切片：用于具有一定硬度的组织，例如肝、肾等
涂片: 用于液态组织，如血液，精液和唾液。
铺片: 用于很薄的组织，如肠系膜。
磨片: 用于很坚硬的组织，如骨和牙。
石蜡切片制作步骤
石蜡切片的制备
（一）取材
注意事项：
材料愈新鲜愈好，动作要迅速、准确，防止组织发 生变形、自溶； 取材所用的刀和剪要锐利，避免损伤组织； 取材部位要恰当、准确，易于说明问题； 所取组织块大小要恰当，便于固定液的渗透。组织
通过化学反应，将抗原抗体结合部位显示出来，借
助显微镜观察，确定检测物质的分布、含量。
2. 标记物种类

荧光染料：例如异硫氰酸荧光素（FITC），
四甲基异硫氰酸罗达明（TMRITC）， 用荧光显微镜观察

酶类：例如辣根过氧化物酶，用光镜或电镜观察。 胶体金：多用于电镜观察。
抗原
抗体
抗原抗体复合物
根据标记不同分：

免疫荧光技术： 免疫胶体金技术：

免疫酶标技术：目前最常用的方法。包括PAP
法、ABC法、 SABC法等。与免疫荧光技术比较， 其优点定位准确、对比度好，染色标本可长期保 存，适合光镜、电镜研究。
荧光标记免疫组织化学
直接法
间接法
免疫组织化学（荧光素标记） 毛细血管内皮细胞呈vWF阳性——血管性假血友病因子
二、组织学技术简介

显微镜技术

组织化学术
图像分析术 细胞培养术和组织工程


显微镜技术

16 世 纪 末 ， 荷 兰 的 眼 镜 商 詹 森 （ Zaccharias Janssen ） 和 他 的 儿 子 把几块镜片放进了一 个圆筒中，结果发现 通过圆筒看到附近的 物体出奇的大，这就 是现在的显微镜和望 远镜的前身。

铺片：将需要观察的薄片组织用手工的方法直接铺于
载玻片上，然后经过固定、染色等程序制成的标本。例 如蛙的肠系膜铺片，大白鼠的皮下组织铺片等。
磨片：骨，牙齿等组织，不经脱钙和切片，直接在磨
石上用手工磨成大约 50微米左右的薄片，然后再进行染
色封固在载玻片上的标本。
消化分离：将组织分离成小块，然后利用相应的化学
合适的固定液。
3. 固定液的量：一般为组织体积的6-10倍。 4. 固定时间：在保存组织形态结构的同时，尽可 能较好保存组织细胞的抗原。 5. 固定温度：低温可以保持好的结构。
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（三）染色

HE染色（hematoxylin-eosin staining ） ：组
普通光学显微镜由二
部分构成：
①光学部分：包括聚
光镜、物镜和目镜；
②机械部分：包括镜
臂、载物台等。
尼康E-600光学显微镜
荧光显微镜由光源、滤片系 统和显微镜三部分构成。光 源为高压汞灯，用以产生波 长短、能量高的紫外光。 原理：紫外光激发标本中的
荧光物质，使之产生各种不
同颜色的荧光，通过观察荧 光的分布与强弱来测定被检
显微镜技术
根据光源不同，显微镜分为光学显微镜和电子显微镜两大
类。前者以可见光为光源，后者则以电子束为光源。
—、光学显微镜
（一）普通光学显微镜 （二）荧光显微镜
（三）激光共聚焦扫描显微境
（五）相差显微镜 （七）微分干涉差显微镜
（四）暗视野显微镜
（六）偏光显微镜 （八）倒置显微镜
尼康E-600光学显微镜
组织标本制作的方法

组织切片法
非组织切片法

组织切片法：利用化学试剂将组织经过一系列的 固定(fixation)、脱水、透明后，再利用石蜡或火棉
胶和明胶等支持物渗透进组织内部，使组织保持
一定的硬度，并包埋 (embedding) 成块，然后依靠 切片机 (microtome) 将包埋好的组织块切成以微米 计的薄片，再根据需要进行各种染色得到的供显 微镜下观察的标本的方法。包括：石蜡切片、火

ABC法：一抗＋生物
素化二抗＋abc复合物

S-P 法 ： 一 抗 ＋ 生 物
素化二抗＋ HRP 标记的 链霉卵白素
免疫组织化学（辣根过氧化物酶标记） 大肠肌动蛋白——actin阳性
4. 免疫组化技术的注意事项：

组织固定愈新鲜愈好。固定液多用4%多聚 甲醛，固定时间不宜过长。

组织脱水必需彻底。 切片必需完整，平展，无气泡、皱褶。 切片贴附必需牢固：载玻片需做特殊处理。 切片脱蜡彻底。
组织学基本技术
内容提纲

组织的概念及研究内容 组织学技术简介 组织标本的制备


组织化学与免疫组织化学术
组织学的学习方法
一、组织学概念及研究内容
1. 组织学（Histology）概念

研究机体的微细结构及其相关功能的科学。
2. 研究内容

是在细胞水平、亚细胞水平和分子水平上对
机体进行研究。
荧光素
辣根过氧化物酶
胶体金 免疫组织化学原理模式图
3. 免疫组化技术的种类
根据染色步骤分：

直接法：直接标记第一抗体。该法简单，特异
性强，但敏感性较差。

间接法：不标记第一抗体，标记第二抗体。该
法敏感性较高。

特殊的间接法：第一抗体和第二抗体均不标记，
而是用酶标记与第二抗体结合的物质。该法敏感 性高。包括PAP法、ABC法、 SABC法等。
喷 镀
干 燥
脱 水
三、显微组织标本的制备
显微组织标本的制备有多种方法，例如：切片法
（石蜡切片和冰冻切片）、涂片法、铺片法、
磨片法等。组织学中最常用的方法是石蜡切片法。
三、显微组织标本的制备

组织制片的意义和目的
组织标本制作的方法
组织切片标本制作的基本程序 苏木精-伊红染色的程序
组织制片的意义和目的
物质。
研究内容：观察组织、细胞 中有自发荧光或经荧光染料
染色或标记的结构。
尼康E800荧光显微镜
倒置显微镜：组成和普通显
微镜一样，不同处物镜与照 明系统颠倒，前者在载物台 之上，后者在载物台之下。 研究内容：观察细胞培养中 活细胞的形态结构和生长变 化情况。 倒置相差显微镜：具有相差 物镜，使活细胞的不同结构 出现显著的明暗反差，并具 有立体感。 莱卡倒置显微镜

复合固定液 AF（乙醇-甲醛）固定液 Bouin固定液 Carnoy固定液 Zenker固定液

固定方法

浸透固定：将组织切成小块，直接 投入固定液中固定。 灌注固定：一般采用心脏灌注固定。

固定更加迅速、均匀。
尤其适用神经组织。
固定注意事项
1. 及时固定：最好动物死后半小时内固定，一般 不超过2小时。 2. 固定液选择：根据组织的特点、染色方法选择
织学最常用的染色方法。

特殊染色：硝酸银染色、醛复红染色、甲苯胺
蓝染色等。
神经元
H.E染色
镀银染色
HE染色
苏木精 碱性染料 将嗜碱性物质染成蓝色
伊红
酸性染料
将嗜酸性物质染成红色
多数细胞的细胞质 细胞核中的染色质细 胞质中的核糖体 （线粒体、溶酶体、滑面内质网）
嗜碱性 嗜酸性
细胞爬片制作

将处理好的盖玻片放入接种了细胞的 培养瓶或六孔板内。
棉胶切片、明胶切片，冰冻切片。
非组织切片法
组织不经过切片手续制成的观察标本的方法为非 组织切片法。包括：涂片、压片、铺片、磨片、 消化分离、活体标本、整装标本、血管注射标本。 涂片：将所采的血液或骨髓样品涂抹于载玻片上 经瑞氏或姬姆萨染色后的标本。

压片：先将组织处理成小块物质，然后经化学药 品软化和染色，再用盖玻片压封于载玻片上的标 本。例如运动终板等。
PAS反应：确定组织或细胞中有无多糖存在的 一种方法。反应产物呈紫红色。
Feulgen反应：显示DNA，呈红色。
甲基绿-派若宁反应：同时显示DNA核RNA，DNA
呈蓝绿色，RNA呈红色。
洋葱鳞茎内表皮细胞
苏丹红染色：脂类物质呈红色。 冰冻切片对脂类物质保持较好。
酶类：在适当温度和 PH 条件下，酶催化特异
的大小以1X1X0.3cm为宜，厚度一般不超过0.5cm。
（二）固定
目的：使组织内的蛋白质迅速凝固或
沉淀，防止细胞自溶或组织腐败，尽
量保持组织的原有结构和化学组成。
固定液的种类
单纯固定液 4%中性甲醛：用 PH7.2-7.4的PBS配制，配制后 密封、 4℃ 保存，保存时间不超过一个月。适用 HE染色和免疫组化。 4%多聚甲醛：用PH7.2-7.4的PBS配制。 乙醇混合固定液
二、电子显微镜

透射电镜
扫描电镜

透射电镜
观察细胞的内部结构
Hale Waihona Puke 扫描电镜观察细胞表面的立体结构
透射电镜标本制备步骤
取材（约1mm3）
双重固定 （双醛固定液和四氧化锇）
树脂包埋 脱 水
超薄切片
重金属染色
电镜观察
扫描电镜标本制备步骤
取材（直径约0.3cm）
双重固定 （双醛固定液和四氧化锇）
电镜扫描观察
藏于盛满固定剂的透明容器中。另一种是将发育至某一阶
段的鸡胚整体取出，经固定、染色、脱水、透明后封固于
载玻片上的标本。
血管注射标本：一种是将有色物质注射进血管，用酸或
硷将血管周围的组织腐蚀后做成的整体封藏的血管标本。 另一种是将有色物质注射进血管后，经一系列制片技术处
理后封固于载玻片上供显微镜下观察的标本。



四、组织化学与免疫组织化学术