3500/xl遗传测序仪介绍
肖怀东 Field Application Scientist Tel: 400 820 8982 / 800 820 8982 E-mail: CNAPMsupportlifetech
Life Technologies™ Proprietary |1
AB遗传分析仪发展历史
Life Technologies™ Proprietary |19
光谱校准——目的
多重颜色检测
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光谱校准
什么时候做?
• 使用新的染料组合 • 调整过仪器的光路系统 • 不同颜色的荧光间出现干扰(有拔起或下压峰) • 参数改变(如毛细管长度改变) • 作为每年一次的日常维护
仪器耗材——阴极缓冲液
• 一体化缓冲杯 • 迷宫般设计分离洗涤池和废液池
• 确保缓冲液达到Fill line
• 两种独立的胶垫Septa (available in CBC septa kit)，注意胶垫安装 • 注意缓冲液放置的位置 • 在仪器上放置有效期7天
• 存储在冰箱冷藏，使用前恢复室温
On instrument:
15 kv
仪器工作原理-通过毛细管电泳分离DNA片段
+
正极
-
负极
+ + + + + + + + ++
H H H H H H H H HH
TRIVIA: 什么样的片段泳动的更快?
小片段
仪器能够区分带电的DNA和其他带电分子吗?
不
Life Technologies™ Proprietary |7
仪器工作原理 -荧光标记的DNA片段在检测窗口被检测
Charged Coupled Device电荷耦合器件
Life Technologies™ Proprietary |9
仪器工作原理
• 荧光标记的DNA在电场中由负极向正极移动,依次
-
通过激光检测区,小片段在前,大片段在后
Electrophoresis
• 激光束在检测窗口同时激发16/4根毛细管,荧光分子
• 存储在冰箱冷藏，使用前使之恢复室温
Life Technologies™ Proprietary |37
Removable seal
Overflow chamber
仪器耗材——Conditioning Reagent
▪ 用途 − 填充胶泵 − 换胶时冲洗胶泵使用 − 仪器长期关机时使用
▪ 可供一次使用，足量
指标: • 峰高大致相同 • 峰型尖锐、左右对称 • 橙色十字在峰顶端 • 间距:13 - 16
Life Technologies™ Proprietary |13
空间定位——结果评估
Click
to save the calibration data to the database
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On-instrument
Shelf life
(new)
Life
Sample Usage
RFID tracked limits
Hard stop (cannot exceed)
Warning (option to proceed)
Life Technologies™ Proprietary |11
毛细管空间定位(Spatial Calibration)
什么时候要做空间定位?
• 毛细管安装完成后,包括重新安装用过的旧毛细管 • 移动或调节了毛细管检测窗口的位置 • 仪器移动后 • 作为仪器日常维护的一部分
怎么做?
• 当仪器正常启动，毛细管已经安装在仪器上，仪器上的相应位置已经放
测序仪工作原理
Life Technologies™ Proprietary |5
仪器工作原理——电进样
● 电进样 ● DNA在碱性环境下带负电
荷 ● 带负电荷的DNA在强电场
作用下进入毛细管
TRIVIA:电进样意味着什么? 只有带电分子能够进入毛细管.
Life Technologies™ Proprietary |6
▪ 重量：82kg
3130/3130xl基因分析仪
• 宽度：74cm • 深度：54.8cm • 高度：81cm
• 重量：130kg
总体积3500是3130系列的82% （减少了18%） 总重量3500是3130系列的63% （减少了37%）
Life Technologies™ Proprietary |24
毛细管阵列
Life Technologies™ Proprietary |29
仪器耗材——毛细管
易于安装的毛细管结构
Life Technologies™ Proprietary |30
易于安装的锁定装置
过期日期 易于存储
• 内壁无涂层 • 50 µm 内径 • 160 runs
仪器耗材——毛细管
双向激发
Life Technologies™ Proprietary |8
仪器工作原理 -激发出的荧光由于波长不同而被分离，
并被CCD相机收集
▪ CCD 相机收集波长范围 520nm到650nm（发射波长）
▪ 虚拟的光栅设置 ▪ 氩离子激光，激发波长
488nm，514nm.
TRIVIA: 什么是CCD?
3730(xl)
370 373 377
3100(A) , 3130（xl）
3500 , 3500（xl）
平板胶电泳
Life Technologies™ Proprietary |2
310
毛细管电泳
1986年 1991年 2019年 1996年
370型全世界第一台基因分析仪 373型基因分析仪 377 型基因分析仪，光栅+CCD 310型毛细管基因分析仪,全世界第一台毛细管分析仪
被激发,产生荧光信号
• 发射的荧光信号被CCD相机收集 • 软件将光学信号转化为电信号
Energy Laser
dye
CCD
:
+
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毛细管空间定位(Spatial Calibration)
������ 什么是空间定位？ –空间定位将标记出每道毛细管 在CCD上的对应位置，使信号 收集软件(Data Collection)能够 找到它们。
检测区 (Detection region）
胶块区 (Gel block region）
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Байду номын сангаас
自动进样区 (Autosampler region）
胶块区 (Gel block region）
胶袋
Life Technologies™ Proprietary |27
空间定位——结果评估
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Click
for
any failed calibration
空间定位——结果评估
如果空间定位失败怎么办?
• 重复做一次空间定位 • 若无效，观察系统中有无气泡，去除气泡后再定位 • 若无效，重新安装毛细管的检测窗口，进行空间定位 • 若无效，取下毛细管，用枪吸取无水甲醇冲洗毛细管检测窗口上的凹槽，待甲醇
改进措施
清洁检测窗口 重装毛细管
清洁检测窗口
灌胶
清洁检测窗口
光谱校准——目的
• 让机器认识纯荧光。 • 每个染料都有自己的最大发射波长，但是不同染料之
间有相互重叠的部分，重叠的部分通过光谱校正来识 别。
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光谱校准——目的
光谱重叠
结果: 光谱校正后
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仪器结构——外观
电源 开关
网络插口
状态灯
内部照明灯开关
自动进样器按纽
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断路开关 电源插头
仪器结构
3500/3500xl基因分析仪
▪ 宽度：61cm ▪ 深度：61cm ▪ 高度：72cm
炉子Oven 风扇Fan 检测窗口
毛细管阵列
阳极bufferABC 胶袋
样品托盘
电极electrodes
Sample tray
自动进样器 Autosampler
阴极buffer CBC
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仪器耗材
POP胶袋
CBC – 阴极缓冲液槽
ABC – 阳极缓冲液槽
Two unique Septas
Buffer
Wash
Waste
Life Technologies™ Proprietary |36
仪器耗材——阳极缓冲液
• 预装好的1 x running buffer • 1个包装4个 • 易于安装 • 放置在仪器上的有效使用期限为7天 • 安装前确保溢杯中的缓冲液都流到主腔中 • 确保主腔中的缓冲液达到Fill line
2019年 2019年 2000年 2019年 2019年
2004年
377-96基因分析仪 3700型96道毛细管基因分析仪 3100 16道毛细管基因分析仪 3100 Avant 4道毛细管基因分析仪 3730 48道毛细管基因分析仪 3730xl 96道毛细管基因分析仪 3130 4道毛细管基因分析仪 3130xl 16道毛细管基因分析仪