溶菌酶活性的测定
方法一
1.取血，断尾或腹主动脉采血，在室温下静置1h，然后4℃冰箱中保持4h，
2000r/min离心10min，取上层血清备用；
2.用0.1mol/L的磷酸缓冲液(PBS,PH6.4)将溶壁微球菌(Micrococcus
lysodeikticus)配制成一定浓度的菌悬液（O.D.570=0.3，菌浓度为4×106cfu/mL）；
3.取3.0 mL该悬液于离心管中，再加入50μl血清混匀，570nm下测初始光密
度值（A0）；
4.然后将试液移于37℃水浴30 min；
5.取出后立即置于冰浴10 min以终止反应，测反应后的光密度值（A）；
6.计算。

公式：
U=(A0-A)/A
U：溶菌活力；A0：反应前光密度值；A：反应前光密度值
方法二
1.取血，断尾或腹主动脉采血，在室温下静置1h，然后4℃冰箱中保持4h，
2000r/min离心10min，取上层血清备用；
2.用0.067mol/L的磷酸缓冲液(PBS,PH6.4)将溶壁微球菌(Micrococcus
lysodeikticus)配制成0.2mg/ml的菌悬液；
3. 3.0 mL该悬液于离心管中，再加入40μl血清混匀，540nm下测初始光密度
值（A0）；
4.然后将试液移于28℃水浴30 min；
5.取出后立即置于冰浴10 min以终止反应，测反应后的光密度值（A）；
6.计算。

公式：
U=(A0-A)/A
U：溶菌活力；A0：反应前光密度值；A：反应前光密度值
方法三
准确称取溶菌酶标准品，用pH 6.4，1/15 mol/L PBS配成1ug/mL，，临用时用PBS稀释成500，100，50，25，10 ug/mL标准液，用以制成标准曲线。

以溶壁微球菌（Micrococcus lysoleikticus）冻干粉为底物，用1/15 mol/L，pH 6.4磷酸缓冲液配成一定浓度的悬浊液（用722型分光光度计于640 nm测定并调整其浓度为透光率达30％-40％）。

O.D.530=0.3，菌浓度为4×106cfu/mL）。

取0.1 mL血清于小试管中，置28℃水浴锅中预热5 min，然后加入1.8 mL 已预热的菌液，立即计时，至2 min时加入2滴5 mol/LKOH溶液以终止反应，立即用0.5 cm比色杯于640 nm波长测其透光率T1％。

取同样血清0.1 mL于1滴5 mol/L的KOH溶液中摇匀，28℃预热5 min后加入1.8 mL已预热的菌液，在同样温度下至2 min时同法测定其透光率T0％。

T1％－T0％为透光率差值，即溶菌酶所致透光率的变化。

再从标准曲线上可查血清中溶菌酶含量。

附：
A所需器材
离心管温箱移液枪枪头血凝板冰离心架722分光光度计水浴锅剪刀
B所需试剂
灭菌生理盐水:0.65%
0.067mol/L的磷酸缓冲液(PBS,PH6.4)：
甲液：KH2PO49.08g/L
乙液：Na2HPO49.47g/L或Na2HPO42H2O 11.88 g/L 或Na2HPO47H2O 17.87g/L或Na2HPO4 12H2O 23.88 g/L
pH6.4的PBS为：甲液73.5mL
乙液26.5ml。