0
30
60
90
溶菌酶活力的测定
• 实验数据处理ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ酶活力单位（U）的定义是：在25℃，pH6.2，波长 为450nm时，每分钟引起吸光度下降0.001为1个 活力单位。 酶的活力单位数=△A450/t×0.001 比活力：每毫克酶蛋白所具有的酶活力。单位是 u/mg。比活力越高则酶越纯。 比活力=活力单位/mg蛋白
溶菌酶活力测定
掌握溶菌酶的活力测定的原理和方法
溶菌酶活力的测定
酶活力测定原理 溶菌酶又叫胞壁质酶，N-乙酰胞壁质聚糖水解酶。能催 化某些细菌（革兰氏阳性菌）细胞壁多糖的水解，从而溶解 这些细菌的细胞壁，起到杀死细菌的作用。 测定溶菌酶活力时，可用某些细菌细胞壁做底物，细胞 壁溶解，细菌解体后，菌悬液浊度降低，因此，可以通过分 光光度法测定菌悬液浊度变化，计算溶菌酶活性。 本实验以溶壁微球菌为底物，通过测定细菌悬液浊度的 变化（OD450）来测定溶菌酶的活性。 溶壁微球菌为革兰氏阳性；生长最适温度为25℃-30℃。
溶菌酶活力的测定
3 酶活力的测定
将酶液与底物悬液分别置于25℃水浴中保温10～ 15min, 吸取底物悬浮液3mL放入比色杯中测底物悬液的 OD450 值,作为对照。然后加入酶液0.2mL,迅速摇匀。从加 酶时开始记时, 每30s测1次OD450值,共测3次。 按下列表格记录是按结果：
时间/s OD450
溶菌酶活力测定
实验仪器、材料及试剂 （一）仪器 分光光度计 （二） 材料及试剂 溶菌酶，0.1mol/L pH6.2磷酸缓冲溶液， 溶壁微球菌干粉, 烧杯，玻璃棒，量筒
溶菌酶活力测定
操作步骤
1、溶菌酶液配制：准确称取干溶菌酶粉5mg,用0.1mol/L磷 酸缓冲液5ml溶解成1mg/ml的酶液，再用0.1mol/L磷酸缓冲 液稀释4倍，即为酶应用液。 2、底物配制：取干菌粉5mg加缓冲液少许，在乳钵中（或 匀浆器中）研磨2分钟，倾出，稀释到15～25ml，此时在光 电比色上的吸光度最好在0.5～0.7范围内。