大肠菌群计数实验
MPN计数法
一、设备和材料
250ML锥形瓶3个 100ML烧杯1个
250ML量筒1个 1000ML烧杯1个
15*150mm试管3个 1ML刻度吸管4个
18*180mm试管20个杜氏小管
玻璃棒1个接种环1个
剪刀1把药匙2个
均质器天平（感量0.1g）
电炉洗耳球
二、实验准备
1、配制培养基：
LST培养基的配制：
用天平称取17.8gLST培养基于锥形瓶中
加入500ML蒸馏水
加热煮沸至完全溶解
分装于装有杜氏小管的大试管中，每管10ML，共10管高温灭菌备用
BGLB培养基的配制：
用天平称取20gBGLB培养基于锥形瓶中
加入500ML蒸馏水
加热煮沸至完全溶解
分装于装有杜氏小管的大试管中，每管10ML，高温灭菌备用
2、生理盐水
取4.25g氯化钠于大烧杯中
加入500ML蒸馏水溶解
取225ML生理盐水于锥形瓶中
分别取9ML生理盐水于3只小试管中
将分装好的生理盐水进行高温灭菌
3、灭菌：将均质杯、100ML烧杯、刻度吸管、剪刀、接种环、洗耳球高温灭菌备用
三、取样
在提交的产品中随机抽取三箱，从每箱中随机抽取未打开包装的产品1袋~3袋，抽取不低于250g的样品作为微生物指标检验试样。

四、检验程序
五、操作步骤
初发酵试验
1、称取25g 样品，放人盛有225m生理盐水的无菌均质杯内，8 00or/min-10 000r/min 均质1 min-2 min ，制成1:10 的样品匀液。

2、用1ml无菌吸管吸取1:10 样品匀液1ml，沿管壁缓缓注人9ml生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。

3、换一只新的1ml无菌吸管吸取1:100样品匀液1ml，沿管壁缓缓注人9ml生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管，使其混合均匀，制成1:1000 的样品匀液。

4、将三个连续稀释梯度的样品原液在进行10倍递增稀释时，吸取1 ml样品匀液于LST肉汤，每个稀释度接种三管。

5、同时做一组空白，在一支LST肉汤中接种1ml生理盐水。

6、 36℃±1℃培养24h±2h ，观察倒管内是否有气泡产生，如未产气则继续培养至48h±2h 。

记录在24h 和48h 内产气的LST 肉汤
管数。

未产气者为大肠菌群阴性，产气者则进行复发酵试验。

复发酵试验
用接种环从所有48h±2h 内发酵产气的LST 肉汤管中分别取培养物l环，移种于( BGLB）肉汤管中，36℃±1℃培养48h±2h ，观察产气情况。

产气者，计为大肠菌群阳性管。

大肠菌群最可能数（MPN ）的报告
根据大肠菌群阳性管数，检索MPN 表，报告每克（或毫升）样品中大肠菌群的MPN 值。

大肠菌群最可能数（MPN）检索表
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