4、判定方法 5、结果评价
家兔耳缘静脉血管
（二）体外溶血试验
1、目的 静脉注射剂对红细胞状态的影响 2、动物 家兔1只 家兔 只 3、方法 （1）2%红细胞悬液的制备 ） 红细胞悬液的制备 （2）受试物的制备 临床使用浓度 ）受试物的制备-临床使用浓度 （3）试验方法 ）
体外溶血试验加样表 试管号 1 2 3 4 5 6 7 2%红细胞 2%红细胞 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 生理盐水 2.0 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 蒸馏水 2.5 受试物 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 4、判定方法 溶血、无溶血、 溶血、无溶血、红细胞凝聚 5、结果评价 小时内无溶血， 3小时内无溶血，可以注射使用
第三节
制剂的全身毒性试验
一、静脉注射制剂的全身毒性试验
血管刺激性试验 体外溶血试验 过敏性试验 热原试验
全身毒性试验
（一）血管刺激性试验 1、目的
观察静脉注射剂多次给予后对血管 的刺激性情况。 的刺激性情况。
2、动物
家兔（每组至少 只动物 只动物） 家兔（每组至少3只动物）
3、方法
分成两组（阴性对照组、给药组） 分成两组（阴性对照组、给药组） 分别对家兔耳缘静脉注射给药，连续5次， 分别对家兔耳缘静脉注射给药，连续 次 末次注射后24小时处死部分动物 小时处死部分动物， 末次注射后 小时处死部分动物， 肉眼观察并对组织进行病理学检查； 肉眼观察并对组织进行病理学检查； 余下的动物14天后进行同样检查 天后进行同样检查。 余下的动物 天后进行同样检查。
二、局部用药的全身毒性试验
主要讨论皮肤用药、眼科用药、滴鼻剂、 主要讨论皮肤用药、眼科用药、滴鼻剂、吸入 剂及直肠、阴道制剂等引起的全身毒性试验。 剂及直肠、阴道制剂等引起的全身毒性试验。 见第十九章。 见第十九章。
小 结
第一节 新药急性毒性试验
一、目的和意义 二、试验方法 1、半数致死量的测定 、 2、最大给药量试验 、 3、最大耐受量试验 、 4、固定剂量试验 、 5、近似致死量试验 、 急性毒性试验中常用的LD50计算方法 三、急性毒性试验中常用的 计算方法
四、近似致死剂量法
单次给药引起动物出现明显中毒反应 而未发生死亡的剂量。 而未发生死亡的剂量。 一般使用20只动物 连续观察7-14天。 只动物， 一般使用 只动物，连续观察 天
五、固定剂量法 试验不以死亡为观察终点， 试验不以死亡为观察终点，而以明显的毒性 体征为评价指标。 体征为评价指标。 据资料， 据资料，用5、50、500和2000mg/kg 、 、 和 4个国定剂量中的一个做初试剂量，单次给药。 个国定剂量中的一个做初试剂量， 个国定剂量中的一个做初试剂量 单次给药。 给药前禁食6-12小时，给药后禁食 小时。 小时， 小时。 给药前禁食 小时 给药后禁食3-4小时
（五）结果处理 1、试验结果数据进行统计学处理。 、试验结果数据进行统计学处理。 2、根据试验目的，结合所观察到的毒性表现作出 、根据试验目的， 恰当的评价。 恰当的评价。 3、对获得的数据进行科学全面地分析。 、对获得的数据进行科学全面地分析。 4、对于某些项目的试验，可安排在该实验中同时 、对于某些项目的试验， 观察，并提供符合要求的实验结果。 观察，并提供符合要求的实验结果。
（三）过敏性试验
1、目的 观察供试物对动物有无过敏反应 2、动物 雄性豚鼠18 18只 三组-每组6 雄性豚鼠18只（三组-每组6只） 溶剂组3、方法 溶剂组-生理盐水或葡萄糖注射液 阳性组-1%新鲜鸡蛋清 1）分组 阳性组-1%新鲜鸡蛋清 给药组给药组-受试物 每组分别腹腔注射，隔日一次，共三次， 2）每组分别腹腔注射，隔日一次，共三次， 首次注射第14 14日 21日每组取 日每组取3 首次注射第14日、21日每组取3只动物静脉 注射，观察过敏反应。 注射和不超过 ℃而且每只家兔 只家兔升温总和不超过1.4℃ ） 只家兔升温总和不超过 升温不超过0.6℃ 升温不超过 ℃。 2）5只家兔升温总和不超过 ℃而且升温超过 只家兔升温总和不超过3.5℃ ） 只家兔升温总和不超过 0.6℃的家兔不超过 只。 ℃的家兔不超过1只 5、结果评价
第二十章 全身用药的毒性研究
第一节
急性毒性试验
急性毒性试验
毒性反应类型 定性 出现和消失时间 可能的靶器官和死亡原因 致死量 最大给药量 半数致死量
定量
一、概念和目的
1、了解新药急性毒性的强弱 LD50 ED50 治疗指数（ 治疗指数（ LD50/ED50） ） 相对毒性 安全系数（ LD5/ ED95） 安全系数（ ）
（3）系统尸解和病理组织学检查 1、脏器系数 肾上腺、甲状腺、睾丸、 心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、甲状腺、睾丸、 子宫、 子宫、脑等 2、病理组织学检查 内容： 内容： 脊髓、视神经、 垂体、心脏、 脑、脊髓、视神经、眼、垂体、心脏、肝、脾、 肾上腺、甲状腺、睾丸、 肺、肾、肾上腺、甲状腺、睾丸、子宫等。
第二节 新药长期毒性试验
一、一般原则 二、检测项目 1、一般观察 、 2、血液学指标 、 3、血液生化指标 、 4、特殊检查 、 5、系统解剖 、 三、检测指标时间 1、检查时间 、 2、恢复性观察 、 四、资料整理要求 五、结果评价
第三节 制剂的全身毒性试验
一、静脉注射制剂的全身毒性试验
1、血管刺激性 2、体外溶血试验 3、过敏性试验 4、热原试验
4、判定方法
反应级数 豚鼠过敏反应判定标准 反应症状
0 1 2 3 4
无明显反应 有轻微抓鼻、 有轻微抓鼻、颤抖或竖毛 有几次咳嗽、抓鼻、 有几次咳嗽、抓鼻、颤抖或竖毛 多次或连续咳嗽、 多次或连续咳嗽、伴有呼吸困难 或痉挛、 或痉挛、抽搐等 痉挛、抽搐、大小便失禁、 痉挛、抽搐、大小便失禁、休克死亡
六、急性毒性试验中常用LD50计算方法 急性毒性试验中常用 计算方法 1、Bliss法 、 法 2、寇氏法 、 3、改良寇氏法 、 4、何尔恩法 、
第二节
一、概念和目的
长期毒性试验
新药长期毒性试验
对动物反复多次连续给药的毒性试验。 对动物反复多次连续给药的毒性试验。 长期毒性试验的目的
1、反复多次给药的情况下，实验动物出现的毒性反应、 、反复多次给药的情况下，实验动物出现的毒性反应、 毒性反应 量效关系、主要的靶器官 损害程度及其可逆性。 靶器官、 及其可逆性 量效关系、主要的靶器官、损害程度及其可逆性。 剂量范围及 2、获得反复给药情况下，实验动物能耐收的剂量范围及 、获得反复给药情况下，实验动物能耐收的剂量范围 完全无毒性反应的安全范围 安全范围。 完全无毒性反应的安全范围。
5、结果评价 反应级数2 包括2 反应级数2级（包括2级）为阳性
(四）热原试验
1、目的 判定受试物是否有致热作用 2、动物 家兔 3、方法
3只家兔，侧正常体温，注射药物，每小时测体温一次， 只家兔，侧正常体温，注射药物，每小时测体温一次， 只家兔 共3次。 次 最高一次温度减正常体温。 最高一次温度减正常体温。 如三只家兔中有一只升温超过0.6℃ 如三只家兔中有一只升温超过 ℃或三只家兔升温总和 超过1.4℃ 应另取 只家兔复试，方法通上。 应另取5只家兔复试 超过 ℃时;应另取 只家兔复试，方法通上。
（三）给药途径和给药体积 两种给药途径 （四）观察记录 观察时间及观察内容 （五）结果处理与评价 对数据进行科学全面分析， 对数据进行科学全面分析，概括出 药物急性毒性总体情况。 药物急性毒性总体情况
三、最大给药量测定法
在受试药物合理的最大容积和最大 浓度条件下， 浓度条件下，单次给予试验动物不产生 死亡最大给药量试验。 死亡最大给药量试验。
2.检测项目 2.检测项目 血液学指标 （1）血液学指标 红细胞、 红细胞、网织红细胞计数 血红蛋白 血液学指标 白细胞总数级分类 血小板 凝血时间
2.血液生化指标 2.血液生化指标 天门冬氨酸氨基转换酶(AST) 天门冬氨酸氨基转换酶 丙氨酸氨酸氨基转换酶(ALT) 丙氨酸氨酸氨基转换酶 碱性磷酸酶(ALP) 碱性磷酸酶 尿酸氮(BUN) 、总蛋白 总蛋白(TP) 血液生化指标 尿酸氮 白蛋白(Alb) 、血糖 血糖(ALU) 白蛋白 总胆红素(T-BIL)、肌酐 总胆红素 、肌酐(Crea) 总胆固醇(T-CHO) 总胆固醇
2、为长期毒性试验和特殊毒性试验的 剂量设置提供依据 致突变作用评价为试验的最高剂量 半数致死量。 为1/2半数致死量。 半数致死量 生殖毒性试验中， 生殖毒性试验中，雌性动物最高量 为急毒中的最大耐受量。 为急毒中的最大耐受量。 长期毒性试验中为急性毒性的最大耐受量。 长期毒性试验中为急性毒性的最大耐受量。
二、试验内容
（一）实验动物 啮齿类 非啮齿类 溶剂对照组 高剂量组 给药试验组 中剂量组 低剂量组
（二)受试药物和给药途径 拟推荐的临床用药途径 （三）分组、给药剂量和给药周期 分组 低剂量组-无毒剂量（临床用量2-3倍） 低剂量组 无毒剂量（临床用量2 无毒剂量 中剂量组-高 中剂量组 高、低剂量几何平均数 高剂量组-毒性剂量 高剂量组 毒性剂量
3、获取新药毒性反应信息 毒性反应症状、靶器官、 毒性反应症状、靶器官、致死原因等
一般情况 毒性大小 特殊情况
有明显种属差异 无明显种属差异
对一期临床的指导意义 4、为新药药学研究提供参考
二、基本内容
（一）实验动物选择
啮齿类动物 动物 非啮齿类动物
动物性别、年龄、数量。 动物性别、年龄、数量。
（二）剂量与分组 1.随机分组 1.随机分组 按性别、 按性别、体重采用分层随机法 2.剂量设计 2.剂量设计 预试验得出0-100%的死亡剂量范围内， 的死亡剂量范围内， 预试验得出 的死亡剂量范围内 设计5-6个剂量组 个剂量组。 设计 个剂量组。 各剂量组间距为1:0.65-0.85, 各剂量组间距为 高剂量70%死亡率以上，低剂量死亡率30%以下。 死亡率以上，低剂量死亡率 以下。 高剂量 死亡率以上 以下