酶法测定膳食纤维的推荐方法:
试剂:1. 0.1M PBS, PH=0.6.
2. 4M HCl ; 4M NaOH
3. 95%乙醇,78%乙醇
4. 丙酮
酶:淀粉酶,蛋白酶,胰酶
步骤:1. 湿样品需要均质并冻干,所有样品都需要粉碎至粒径0.3mm。
2. 当脂肪含量大于6-8%时或者需要适当粉碎时,需要在室温下用石油醚抽脂15min。
3. 称取1g样品,精确到0.1mg,转移至锥形瓶。
向其中加入25ml 0.1M的PBS,PH=6,充分悬浮样品。
4. 加入100ul 淀粉酶。
用膜盖住锥形瓶顶部,沸水浴保温15min,偶尔摇晃一下。
5. 室温下放凉,加入20ml蒸馏水,用HCL调至PH=1.5,用少量蒸馏水冲洗电极。
6. 加入100mg 胃蛋白酶,顶部盖膜,40℃保温并搅拌60min.
7. 加入20ml蒸馏水,用NaoH调PH至6.8,少许蒸馏水冲洗电极。
8. 加入100ml 胰酶,顶部盖膜,40℃保温并搅拌60min.
9. 用HCl调PH至4.5.
10. 用干燥的称量过的G2坩埚(含0.5g硅藻土)作为辅助过滤设施。
用20m蒸馏水分两次冲洗。
A. 滤液残留(不溶性膳食纤维):
11. 用20ml 95%乙醇和20ml 丙酮分两次冲洗。
12. 105℃干燥至恒重,干燥器内冷却后称重(D1)。
13. 550℃灰化5h,干燥器内冷却后称重(I1)
B.滤液(可溶性膳食纤维)
14. 将滤液可冲洗水合并定容至100ml.
15. 加入微热(60℃)的95%乙醇400ml,沉淀1h(时间可以缩短).
16. 用含有0.5g硅藻土的G2坩埚过滤。
17. 用20ml 78%乙醇、20ml 95%乙醇和20ml丙酮分别分两次冲洗。
18. 105℃烘至恒重,在干燥器内冷却后称重(D2)
19. 550℃至少灰化5h,干燥器内冷却后称重(I2)
空白:水溶性膳食纤维和不溶性膳食纤维空白值(B1和B2)的测定都是在没有添加样品的情况下进行。
使用新的一批酶时,应该不定时检查空白值。
计算:W=样品质量(g)。
D=干燥后的质量(g)。
I=灰化后的质量(g)。
B=无灰空白质量(g)
不溶性膳食纤维=D1-I1-B1。