第7卷 第3期天津农学院学报V o l17ΚN o13 2000年9月Jou rnal of T ian jin A gricu ltu ral Co llege Sep tem berΚ2000文章编号Π1008-5394;2000Γ03-0027-03
鸡肾型传支病毒繁毒规律及其血凝特性研究Ξ
刘田生 马文芝 李继蓉
;天津农学院动物科学系Κ天津300384Γ
摘 要Π9日和10日龄鸡胚尿囊腔中接种稀释比例为1 100～1 500的肾型传染性支气管
炎病毒Κ常规培养48h进行繁毒规律和血凝特性分析Λ结果表明Κ10日龄鸡胚尿囊液收毒量大
于9日龄鸡胚Λ1◊的胰酶37℃作用1～4hΚ作用时间对血凝价影响差异不显著Κ56℃1◊的
胰酶作用0.5～2hΚ作用时间对血凝价影响差异显著Λ0.5◊～1◊鸡红细胞对血凝价影响差
异不显著Λ9日龄以1 100种毒繁毒后凝集价最高Κ10日龄以1 400种毒繁毒后血凝价最高Λ
关 键 词Π传染性支气管炎病毒 凝集试验 血凝集价
中图分类号ΠS858.315.3 文献标识码ΠA
鸡传染性支气管炎病毒;I BVΓ属冠状病毒科冠状病毒属Κ可引起雏鸡和成年鸡发生急性接触性传染病Κ造成雏鸡严重死亡Κ蛋鸡产蛋量急剧下降[1]Λ肾型传支为I BV诸多血清型中的肾病型主要侵害鸡的肾脏Κ主要病理变化为肾脏肿大Κ内有尿酸盐沉积Λ我们在前期研究的基础上[2]Κ就胰酶作用时间、红细胞浓度、种毒稀释比例和鸡胚日龄对病毒繁毒量的影响作了进一步的试验分析Κ结果报告如下Λ
1 实验材料与方法
1.1 I BV种毒Π本研究室保存并提供Λ
1.2 鸡胚Π购自天津市华兴养殖厂Κ无I BV母源抗体Λ
1.3 胰酶Π上海秦镇化工厂生产Κ批号Π19980301Κ配成1◊的胰酶溶液冰冻保存Λ
1.4 红细胞Π采自本室的健康鸡Κ按常规方法处理配成1◊、0.8◊、0.5◊的混悬液Λ
1.5 病毒处理Π将I BV种毒配成1 100、1 200、1 300、1 400、1 500五种不同浓度的稀释液Κ分别接种到9日龄和10日龄鸡胚的尿囊腔中Κ每胚0.2mLΛ37℃培养48hΚ不同处理组各收取10枚鸡胚的尿囊液Κ记录收毒总量Κ尿囊液冰冻保存Λ
1.6 病毒血凝价;HAΓ的测定Π按常规方法用96孔微量滴定板测定[3]Λ
1.7 尿囊液处理
1.7.1 取9日龄和10日龄的尿囊液各0.8mLΚ分别加1◊胰酶0.2mLΚ37℃水浴处理Λ作用时间分别为1h、2h、3h、4hΚ用0.8◊的鸡红细胞测HAΛ
1.7.2 取10日龄尿囊液0.8mLΚ加1◊胰酶0.2mLΚ56℃水浴作用Κ作用时间分别为0.5h、1h、2hΚ用0.8◊鸡红细胞测HAΛ
1.7.3 取9日龄尿囊液0.8mLΚ加1◊胰酶0.2mLΚ37℃作用2hΛ然后分别用0.5◊、0.8◊、1◊的红细胞测HAΛ
Ξ收稿日期Π2000206208
作者简介Π刘田生;1962— ΓΚ男;汉族ΓΚ讲师Κ硕士Κ主要从事兽医药理学、兽医生物制品学的教学与研究Λ
・28・天津农学院学报第7卷
2 结果与讨论
2.1 不同日龄、不同浓度病毒接种后收毒量比较
试验结果表明Κ9日龄平均收毒量每枚10.5mLΚ10日龄平均为13.75mLΚ二者差异显著Λ同一浓度处理Κ10日龄鸡胚病毒收毒量大于9日龄鸡胚收毒量Κ见表1Λ
表1 不同处理组收毒量比较
种毒稀释比例日 龄
1 100
9 10
1 200
9 10
1 300
9 10
1 400
9 10
1 500
9 10
毒液总量 mL113137116126961339212696138
平均 mL・枚-111.313.711.612.69.613.39.212.69.613.8
2.2 不同日龄和作用时间对病毒HA的影响
据资料报道ΚI BV衣壳表面有一种血凝抑制物Κ阻止I BV血凝活性Κ用胰蛋白酶或乙醚能破坏这种抑制物Κ使I BV呈血凝活性[4]Λ我们前期研究结果表明Κ用0.5◊～3◊胰酶溶液作用对血凝活性无显著影响Λ本实验中用1◊胰酶37℃处理9日龄的尿囊液1～4hΚ方差分析F=0.512<F0.05
Κ表明1～4h作用时间对血凝价影响不显著Κ10日龄尿囊液作用1～4hΚ方差分析F=0.08<F0.05
Κ同样表现为作用时间对血凝价影响不显著Κ接种不同浓度的种毒Κ9日龄鸡胚尿囊液以1 100稀释的种毒接种后病毒血凝价最高Κ不同稀释浓度的种毒接种后尿囊液中血凝价比较F=39.62>F0.01
=4.89Κ差异极显著Λ10日龄鸡胚以1 400稀释的种毒接种后尿囊液中病毒血凝价最高Λ不同稀释浓度处理组血凝价比较F=17.34>F0.01
Κ差异极显著Κ10日龄鸡胚接种后尿囊液中I BV血凝价普遍高于9日龄鸡胚1～2个滴度Κ但1 100稀释比例组9日龄尿囊液中病毒血凝价高于10日龄Κ其原因正在探讨中Κ实验结果见表2Λ
表2 9～10日龄鸡胚处理组尿囊液病毒血凝价比较
种毒稀释比例日 龄
1 100
9 10
1 200
9 10
1 300
9 10
1 400
9 10
1 500
9 10 121128282927282921128210
作用时间 h 22112827292729292112829
321028282927292921028211
421128282102729292112929
2.3 56℃条件下作用时间对病毒HA的影响
资料介绍I BV血凝抑制物主要由蛋白质组成[5]Κ实验结果发现在56℃时随着作用时间的延长Κ血凝价逐渐降低Κ其原因在于胰酶在37℃时活性最强Κ而在56℃条件下随着时间延长酶活性逐渐减弱Κ从而丧失了破坏I BV病毒表面血凝抑制物——蛋白质的能力Κ试验结果见表3Λ
表3 56℃不同时间处理尿囊液病毒血凝价比较
种毒稀释比例1 1001 2001 3001 4001 500
0.52726232829
作用时间 h1 2625222724
2 2424212724
第3期刘田生Κ等Π鸡肾型传支病毒繁毒规律及其血凝特性研究・29・
2.4 不同浓度的红细胞对病毒HA的影响
HA检测I BV病毒的血凝价时Κ红细胞浓度对HA有无影响还未见报道Κ本实验结果证明0.5◊、0.8◊和1◊的红细胞浓度对血凝价影响差异不显著Κ结果见表4Λ
表4 不同浓度红细胞处理尿囊液病毒血凝价比较
种毒稀释比例1 1001 2001 3001 4001 500
1.0210292929210
红细胞浓度 ◊ 0.821029292929
0.5292921029210
3 小结
3.1 肾型传支病毒在尿囊液中繁毒时10日龄接毒鸡胚较9日龄鸡胚病毒液收获量大Λ
3.2 种毒稀释比例相同时Κ10日龄接毒鸡胚较9日龄鸡胚病毒液HA要高Λ
3.3 9日龄鸡胚接种1 100的种毒后鸡胚尿囊液中病毒HA最高Κ10日龄鸡胚则以1 400的种毒为高Λ
3.4 37℃条件下Κ胰酶作用时间对病毒HA无显著影响Κ56℃时病毒HA随胰酶作用时间的延长而降低Λ
3.5 红细胞浓度对病毒HA的影响差异不显著Λ
参考文献Π
[1] 殷震.动物病毒学[M].北京Π科学出版社Κ1985.291～298
[2] 刘田生Κ马文芝Κ李继蓉Κ等.肾型传支病毒繁毒规律及血凝特性研究;一Γ[J].天津畜牧兽医Κ1996;1ΓΠ20～22
[3] 徐为燕.兽医病毒学[M].北京Π农业出版社Κ1993.222～224
[4] 卡尔尼克B W.禽病学[M].北京Π中国农业大学出版社Κ1991.407～426
[5] 刘兴友.鸡肾型传染性支气管炎病毒的初步分离及鉴定[J].中国兽医杂志Κ1996;9ΓΠ6～9
Study on Cultural Character istic and Hu maggluti ng
Activ ity of Av i an Nephropathogen ic I nfectious Bronch itis V irus
L IU T ian2shengΨM A W en2z h iΨL I J i2rong
;D epartm ent of A ni m al ScienceΚT ianjin A gricultural Co llgeΚT ianjin300384ΚCh inaΓ
Abstract 1 100～1 500dilu ted avian neph ropathogen ic infecti ou s b ronch itis viru s;I BVΓw as inocu lated in9days and 10days ch icken em b ryo and cu ltu red fo r48hou rs at37℃Κand the hum agglu ting activity;HAΓis detected.A fter being m ixxed w ith1◊tryp sin and incubated fo r1～4hou rs at37℃Κdivergence of HA is ex isted in ti m eΚbu t HA differs greatly in0.5～2hou rs incubated56℃.T here is no difference of HA betw een0.5◊～1◊ch icken red b lood cells. T he h ighest HA ex ists in9days em b ryo inocu lated w ith1 100I BV and1 400in10days em b ryo.
Key words I BVΜHAΜH um agglu ting。