厌氧菌检验
王频佳 检验医学院
实验目的
1．掌握产气荚膜梭菌和破伤风梭菌的形态特 ． 点和培养特性。 点和培养特性。 2．熟悉厌氧菌的常别要点。 则和鉴别要点。
器材和试剂
1．菌种：破伤风梭菌、产气荚膜梭菌 ．菌种：破伤风梭菌、 2．培养基：庖肉培养基、血琼脂平板 ．培养基：庖肉培养基、 3．试剂：革兰染色液、芽胞染色液 ．试剂：革兰染色液、 4．其他：接种环、酒精灯、显微镜、普通 ．其他：接种环、酒精灯、显微镜、 培养箱、玻片、封口胶等。 培养箱、玻片、封口胶等。
菌体呈红色，芽胞呈绿色。 菌体呈红色，芽胞呈绿色。
破伤风梭菌形态特点
破伤风梭菌菌落特点
产气荚膜梭菌形态特点
外环不完全溶血由α毒素引起 外环不完全溶血由 毒素引起
内环完全溶血由θ毒素引起 内环完全溶血由 毒素引起
实验内容
第一次 1.接种庖肉培养基：每人接种1支庖肉基 接种庖肉培养基：每人接种 支庖肉基 接种庖肉培养基 菌种：破伤风梭菌、产气荚膜梭菌 菌种：破伤风梭菌、 2. 每人接种 个血平板 每人接种1个血平板 菌种：产气荚膜梭菌、 菌种：产气荚膜梭菌、破伤风梭菌 3.培养：37℃ 48h 培养： ℃ 培养
第二次 1.观察细菌在庖肉基中的生长现象 观察细菌在庖肉基中的生长现象 2.观察厌氧菌的生长情况及菌落特点 观察厌氧菌的生长情况及菌落特点 3.革兰染色镜检：产气荚膜梭菌、破伤风梭 革兰染色镜检：产气荚膜梭菌、 革兰染色镜检 菌 4.芽胞染色：破伤风梭菌 芽胞染色： 芽胞染色 5.汹涌发酵现象观察（示教） 汹涌发酵现象观察（示教） 汹涌发酵现象观察
芽胞染色法（ stain） 芽胞染色法（spore stain）
♦ 方法： 方法：
涂片→干燥→固定→5%孔雀绿加温染 涂片→干燥→固定→5%孔雀绿加温染 3～ →水洗 0.5%沙黄1min→水洗 水洗→ 沙黄1min→水洗、 5min →水洗→0.5%沙黄1min→水洗、晾 干、油镜检
♦ 结果： 结果：