• Avoid Non-volatile Buffers – Alkali-metal phosphates, borates, etc.
01111
Change Retention to Improve Resolution – Select Solvents/ Modifiers that are MS Compatible
9.5 – 11.5 10 – 12
Intensity (peak area) F ormate pH
2.5 Phosphate
pH 2.5 Acetate pH
6.0 Phosphate
pH 6.0 Ammonia
pH 8.0 Phosphate
pH 8.0
01121
Effect of Buffer on Analyte Response
液质分析条件的优化策略课件(PPT42页)
液质分析条件的优化策略 （简化板）
液质分析条件的优化策略课件(PPT42页)
液相色谱与液质联用仪使用的要点
• 质量校正的正确 • 对于相关分析要有合适的支持软件（Maxnet，
TargeLyness） • 合适的液相色谱平台 • 合适的质谱接口方式 • 液相色谱分析中合适的色谱柱的选用 • 质谱检测模式的选择 • 必要的后液流补充
• Compatible LC/MS Buffers and Modifiers: – Formic acid, acetic acid, ammonium acetate, ammonium formate, ammonium hydroxide, trifluoroacetic acid – TFA concentration should be <0.1% v/v – Keep volatile buffer concentrations <20 mM to minimize ESI ion suppression
6.00
8.00
10.00 12.00 14.00 16.00 min
Suitable Solvents for LC/MS
• Reverse-Phase LC/MS Solvents – ACN, MeOH, H2O, Isopropanol
• Normal-Phase LC/MS Solvents (for APCI-MS) – Hexane, Methylene Chloride, Acetone, Ethanol
• Volatile buffer – minimize instrument downtime • Buffer concentration:
– High ion suppression decreases ESI sensitivity
– Low system adequately buffered? • pH range permitted by stationary phase • Methanol or acetonitrile
pKa
3.8 4.8
7 9.2
10.5 11.0
pH range
2.8 – 4.8 3.8 – 5.8
6–8 8.2 – 10.2
Buffer Concentrations/Additive amounts: • 10 to 50 mM • formic, acetic acids 0.01 - 1% v/v • trifluoroacetic acid <0.1% v/v • alkylamine type bases <0.1% v/v
质量校正的正确（Myoglobin校正）
质量校正的正确（Myoglobin校正）
质量校正的正确（CsI校正）的肽测定
质量校正的正确（CsI校正）的蛋白测定
质量校正的关键点
• 针对不同的分析采用不同的校正，一般 蛋白质采用Myoglobin，对于小分子分析 建议采用CsI校正。
• 对于采用Myoglobin校正的建议采用高次 方的校正曲线（3-4）；对CsI校正的建议 采用低次方的校正曲线（1-2）
Abundance
250000 200000 150000 100000 50000
1.0% HOAc
2.00
4.00
6.00
8.00
10.00 12.00 14.00 16.00 min
Abundance
250000 200000 150000 100000 50000
0.2% TFA
2.00
4.00
合适的液相色谱平台
• 能提供一个连续、稳定的液流环境 • 真空脱气设备 • 系统的死体积尽可能小，减少管路的长度 • 输液泵的设计能适用于微径柱的要求 • 二极管阵列检测器的池体积与质谱仪匹配 • 必要的液相色谱辅助配件 • 必要的液相色谱与质谱仪的软件操作平台
合适的液相色谱柱
• 柱内径：2.1mm • 柱长度：
– Start with acetonitrile
01094
Useful pH Ranges for Volatile Buffers
Buffers normally used in MS :
Buffer
Formate Acetate
??? Ammonia Diethylamine Triethylamine
Mobile phase: A - 10mM buffer pH 6.0; B – methanol
Gradient: 5% to 75% in 4 min
3.E+08 3.E+08 2.E+08 2.E+08 1.E+08 5.E+07 0.E+00
Pr ocainamide Caffeine Propranolol Nortriptyline Oxazepam
根据分析的目的选择50mm或150mm • 柱填料选用新型的填料：
Symmetry，Discovery，Vydac，Zorbax， Xterra，Intersil，Diamonsil等
LC/MS Flow Injection Analysis of Peptides and Proteins by Reversed-Phase HPLC
Buffer type
Phosphate buffers suppress the MS response of caffeine at all pHs and also the MS response of Oxazepam at pH 8. Volatile buffers (formate, acetate, ammonia) generally provide good responses.