质粒转化、细胞转染步骤
转化是指将外源DNA（常以质粒作为载体）导入受体细
胞（如大肠杆菌），从而使其获得新的遗传特性。

具体步骤如下：首先将12ul的质粒DNA加入50ul感受态cell中，轻柔混合后进行冰浴30min。

接着向管中加入培养基，混匀后使细菌
恢复正常生长状态。

然后在42℃下热激90s，迅速冰浴2min，最后在37℃下震荡培养（﹤225rpm）1h，使细菌获得新的遗
传特性。

转染（n）是将含有目的基因的载体转移到真核细胞内的
过程。

在进行质粒转染时，需要先将6-well-plate中的每个孔
培养至60-70%的状态。

然后在接种时每个孔加入2.5×105个
/ml的细胞。

接下来，将2.5ug质粒DNA和200ul的opti-
MEM混合，再加入6ul的转染液进行混匀，并在室温下静置
15min。

待转染细胞换成1.3ml的opti-MEM培养基后，将转
染复合物（200ul）轻轻均匀滴入细胞培养基中，并十字形摇
晃6-well-plate以混匀转染复合物。

最后将6-well-plate放入37℃、CO2培养箱中进行培养。