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• 葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食 品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜 等处均有存在，大部分不致病，也有一些致病的球菌。金 黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症 ，还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒 素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食 品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险
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1、目的要求
• 了解食品和食物中毒样品中金黄色葡萄球菌及肠毒 素的检测方法
• 观察金黄色葡萄球菌的革兰氏染色镜检形态以及在 血平板和Baird-Parker琼脂平板上生长的菌落特征
• 观察金黄色葡萄球菌产生血浆凝固酶现象
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2、基本原理
• 金黄色葡萄球菌可产生多种毒素和酶。
• 在血平板上生长可金黄色色素使菌落呈现金黄色； 由于产生溶血素使菌落周围形成大而透明的溶血圈
实验六 金黄色葡萄球菌的 检验
Contents
生物学特性---菌体形态及培养特征
1 革兰氏阳性球菌，直径为0.8-1.0微米，镜检时 呈单个、成对、四联或不规则的簇群；
2 无芽孢，不运动
3 兼性厌氧菌，在好氧条件下生长最好
4 可在15%氯化钠和40%胆汁中生长
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直接计数法
• 形态：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状 ，无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为 0.5－－1um。
• 培养特征：在肉汤中呈混浊生长，在胰酪胨大豆肉汤内有时 液体澄清，菌量多时呈混浊生长，血平板上菌落呈金黄色， 有时也为白色，大而突起、圆形、不透明、表面光滑，周围 有溶血圈。在B--P平板上为圆形、光滑凸起、湿润、直径为2 －3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带， 在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬 度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明 圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落 所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。
• 金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌
株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，
在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球
菌的重要指标。
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• 肠毒素形成条件：
• 存放温度，在37°C内，温度越高，产毒时间越短； • 存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素； • 食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉
的食物，肠毒素易生成。
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实验材料
• 仪器材料：显微镜、恒温箱、无菌吸管、无菌试 管、 无菌平皿、 载玻片、L型涂布棒、酒精灯、 接种环等
• 培养基及试剂：10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤、 7.5%氯化钠肉汤、血琼脂平板、Baird-parker培养 基、无菌盐水、BHI肉汤、兔血浆、革兰氏染色液
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• 7、好氧生长的细胞产生接触酶；
• 8、产生蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶、脂酶和溶菌酶 ，大多数菌株可水解天然的动物蛋白，例如血红 蛋白、纤维蛋白、卵白、酪朊和多肽类如明胶， 水解脂类、吐温类和磷脂蛋白质，并释放脂肪酸
• 9、所有的毒株产生凝固酶，人和动物来源的菌株 通常可凝固兔、人、马和猪的血浆。
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致病性
• 葡萄球菌性食物中毒是葡萄球菌肠毒素所引起的 疾病，可引发不同程度的急性胃肠炎症状，恶心 、呕吐最为突出而且普遍，腹痛、腹泻次之。
• 当金黄色葡萄球菌污染了含淀粉及水分较多的食 品，如牛奶和奶制品、肉、蛋等，在温度条件适 宜时，经8-10小时即可产生相当数量的肠毒素。
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电镜照片
• 5、大多数菌株能生长在6.5-46℃之间（最适温度 30-37℃）能在pH4.2-9.3之间生长（最适pH为 7.0-7.5）；
• 6、大多数菌株产生类胡萝卜素，使细胞团呈现出 深橙色到浅黄色，色素的产生取决于生长的条件 ，而且在单个菌株中可能也有变化
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色葡萄球菌为条件致病菌，菌株致病力的强 弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：
a.溶血素：外毒素，分α、β、γ、δ四种， 能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血 和坏死；
b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞 ；
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c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该 酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或 凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成 的感染易局部化与此酶有关
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B—P平板
主要成分及作用： 氯化锂、甘氨酸:抑制非制病性葡萄球的生长 丙酮酸钠: 促进葡萄球菌生长 亚碲酸钾: 抑制G-杆菌生长，可被金黄色葡萄
球菌还原为碲盐呈黑色 卵黄: 含蛋白质、卵磷、脂肪
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检
验
取2 5ml 样品，接种于225ml 7.5％氯化钠肉汤培养基内 ，置36℃±1℃培养24h
d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核 糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄 色葡萄球菌
e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃
肠炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E五种
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致病性
金黄色葡萄球菌是人类 化脓感染中最常见的病原 菌，临床表现多种多样， 可引起局部化脓感染，也 可引起肺炎、伪膜性肠炎 、心包炎等，甚至败血症 、脓毒症等全身感染。
• 在B-P平板上生长时，因将亚碲酸钾还原成碲酸钾使 菌落呈灰黑色；因产生脂酶使菌落周围有一混浊带
，而在其外层因产生蛋白水解酶有一透明带。
金黄色葡萄球菌Ⅰ型溶血 金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落形态
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• 在肉汤中培养时，菌体可生成血浆凝固酶并释放 于培养基中，此酶类似凝血酶原物质，不直接作 用到血浆纤维蛋白原上，而是被血浆中的致活剂 激活后，变成耐热的凝血酶样物质，此物质可使 血浆中的液态纤维蛋白原变成纤维蛋白，血浆因 而成凝固状态
程
序
转种血平板和B-P 平板，置36℃±1℃培养24h ，挑取血平板上金 黄色（有时为白色）菌落时行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验
血浆凝固酶试验：吸取1：4 新鲜兔血浆0.5ml，放入小试管中，再加入培养 24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物0.5ml，振荡摇匀，置36℃±1℃温 箱或水浴内，每半小时观察一次，观察6h，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒 置时，呈现凝块者，被认为阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及 肉汤作为对照。