影响检测结果的因素
3.操作技术的影响 3.1 加样吸嘴的洁净 与否和吸量的准确性， 直接影响检测结果。
常见模式及临床意义
HBsAg HBsAb
HBeA g
+
－
+
+
－
－
+
－
－
+
－
－
+
－
+
+
－
－
HBeA b
HBcAb
临床意义
－
+
急性或慢性乙型肝炎感染；提示HBV 复制，传染性强－大三阳
+
+
急性HBV感染趋向恢复；慢性HBsAg 携带者；传染性弱－小三阳
夹心法 HBsAg
HBeAg
夹心法 HBeAb
HBeAb
竞争法 HBeAb
HBcAb
竞争法 HBcAg
标记或结合物 HBsAb HBsAg
结果判断 显色(+) 显色(+)
HBeAb
显色(+)
HBeAb及中和抗 原
HBcAb
不显色(+) 不显色(+)
结果判定
2.酶标仪判定：用酶标仪单波长450nm 或双波长450nm/630nm测定各孔OD 值，根据OD值判定结果
b
临床意义
－
+
+
－
+ 非典型性或亚临床型HBV感染
－
+
－
－
－
注射过乙肝疫苗有免疫力；既往感染； 假阳性
－
+
－
+
+ 急性HBV感染后康复
－
+
－
+
－ HBV感染后已恢复
－
+
－
－
+
既往感染，仍有免疫力；HBV感染恢复 期
既往感染未能测出HBsAb；恢复期
竞争法 HBcAg
标记或结合物 结果判断
HBsAb HBsAg
显色(+) 显色(+)
HBeAb
显色(+)
HBeAb及中和抗 原
HBcAb
不显色(+) 不显色(+)
标本本要求
采集： 血浆：使用抗凝血浆 管（枸橼酸盐、 EDTA盐、肝素之一 为抗凝剂）采集样品。
标本要求
储存：样品可存放于 2~8℃冰箱，24小时 内测定。若需长时间 保存，则应冻存于20℃以下，避免反复
1个 1份 3张
实验前准备
1.取出试剂盒及待测 样品，将所有试剂及 样品恢复至室温 （18~25℃）。 2.将恒温箱或水浴锅
检验步骤
排板
检验步骤
表面抗原（两步法）
1.留一孔作空白对照， 加入样本稀释液20ul/ 孔（含空白孔），其 他加入阴性对照三孔
检验步骤
4.撕下板贴，除空白孔外，各孔加入酶结合物50ul。 5.在微型振荡器上振荡30秒使孔内液体混合均匀
注意事项
所有样本都应按传染源处理。 样品显色深浅与样品中抗体的含量没有
一定正相关。任何一种测试都不能绝 对保证样品中没有低浓度的抗体存在。 不同品名、不同批号的试剂不可混用， 以免产生错误结果。
影响检测结果的因素
1.样本采集与处理的 影响 1.1 标本严重溶血。 1.2 标本凝固不全： 血液还未开始凝固时
试剂（安图生物）
主要组成成分
编号
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
组分名称
包被板 样品稀释液
酶结合物 底物液 显色剂 洗涤液 终止液 阴性对照 阳性对照 子母袋 说明书
板贴
96人份
69孔X1块 2.3ml X1瓶 5.5ml X1瓶 6.2ml X1瓶 6.2ml X1瓶 30ml X1瓶 5.5ml X1瓶 1.0ml X1瓶 1.0ml X1瓶
5.撕下板贴，洗板6次，最后在吸水纸上拍干。 6.每孔加入底物液、显色剂各50ul，37℃避光反应10
分钟。 7.加终止液50ul/孔，轻轻振荡混匀后，立即测试结
果。 8.使用酶标仪450nm单波长测量各孔的OD值。
结果判定
1.肉眼判定
血清学标志 原理 包被试剂
HBsAg
夹心法 HBsAb
HBsAb
注意事项
浓缩洗涤液配制前充分摇匀。 加样本时要加到孔底。 加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液
体混匀。 如果滴加，滴加前应弃去1-2滴。
注意事项
滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。 勿将试剂滴在孔壁上。
洗涤时各孔须加满，防止孔口内有游离 酶残留。
洗涤时注意孔与孔之间的交叉污染。 脂血，溶血可影响结果。
（该步骤非常重要）。 6.贴上板贴，置37℃下温育30分钟。 7.撕下板贴，洗板6次，最后在吸水纸上拍干。 8.每孔加入底物液、显色剂各50ul，37℃避光温育30
分钟。
检验步骤
9.加终止液50ul/孔， 轻轻振荡混匀后，立 即测试结果。
10.使用酶标仪450nm 单波长测量各孔的
检验步骤
表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体（一步法） 1.留一孔空白，三孔加入阴性对照、二孔加入阳
－
+
急性HBV感染；慢性HBsAg携带者； 传染性弱
+
－
慢性HBsAg携带者易转阴；急性HBV 感染趋向恢复
－
－
急性HBV感染早期或慢性携带者，传 染性强
－
－
急性HBV感染早期；急性HBV感染潜 伏期；慢性HBV携带者，传染性弱
常见模式及床意义
HBsA HBsA HBe HBe HBcA
g
b
Ag Ab
乙肝两对半测定 －酶联免疫法
实习生：廖於波 指导老师：李海龙
HBV是乙型病毒性肝 炎的病原体。HBV感 染呈世界性流行，但 不同地区感染的流行 程度差异很大。据
乙肝病毒血清标志物
HBsAg
第一个出现，感染后1-2周即可阳性 阳性表示存在HBV感染
HBsAb
出现在HBsAg消失后 保护性抗体 疫苗免疫成功的标志
酶联免疫吸附实验原理
用于检测包被于固相 板孔中的待测抗原 （或抗体）。即用酶 标记抗体，并将已知 的抗原或抗体吸附在
乙肝病毒血清标志物检测原理
血清学标志 原理 包被试剂
HBsAg HBsAb
夹心法 HBsAb 夹心法 HBsAg
HBeAg HBeAb
夹心法 HBeAb 竞争法 HBeAb
HBcAb
性对照各50ul/孔，其他各孔分别加入样本50ul (HBcAb测定时待测血清用生理盐水1:30稀释 －50ul血清+1.5ml生理盐水) 。 2.除空白孔外，各孔加入酶结合物50ul。 3.在微型真当器上振荡30秒使孔内液体混合均匀 （该步骤非常重要）。 4.贴上板贴，置37℃下温育30分钟。
检验步骤
乙肝病毒血清标志物
HBeAg
病毒复制标志 传染性强
HBeAb
传染性降低 长期存在是DNA与肝细胞整合的结果
乙肝病毒血清标志物
HBcAg
HBV复制的标志 血清中难以检测出来
IgM-HBcAb
急性HBV感染
IgG-HBcAb
急性感染恢复期和慢性持续感染
检测HBV病毒血清标 志物是临床最常用的 病原学诊断方法。 HBV具有三个抗原抗 体系统，即乙肝表面