3. 复染：使各种细胞能显示出来
铁染色----中性红、伊红 PAS-------甲基绿 核：中性红、甲基绿、沙黄等。 浆：伊红、刚果红、光绿等。
第二部分 具体细胞化学染色方法
铁染色(Ferric stain)
一、原 理
骨髓中的贮存铁主要存在于骨髓小 粒(外铁)和幼稚红细胞(内铁)中；在酸性 环境中与亚铁氰化钾作用，形成亚铁氰 化铁沉淀。
二、SBB与POX区别：
1. POX操作简单，背景干净，酶无扩 散，易于辨认，特异性强，但敏感 性低于SBB；
2. SBB比POX出现早且反应强，但染 色步骤较繁琐且染液渣子多。
ALL-POX染色 ALL-SBB染色
过碘酸--雪夫反应(糖原染色)
periodic acid-Schiff reaction(PAS)
neutrophilic alkaline phosphatase （NAP）
一、原 理
Kaplow偶氮偶联法：
α-磷酸萘酚钠 NAP α-萘酚+磷酸钠
PH9.6
α-萘酚+重氮盐
不溶性沉淀定位 于胞质
二、正常血细胞染色反应
NAP主要存在于成熟的中性粒细胞胞 质中。严重的化脓性感染时，晚幼阶 段粒细胞也可见有阳性反应。
过氧化物酶染色 (peroxidase，POX)
一、原 理
粒细胞和部分单核细胞的溶酶体 颗粒中含有过氧化物酶(POX)，它可 分解H2O2释放出新生态的氧，后者氧 化二氨基联苯胺，形成棕黄色不溶性 沉淀，定位于胞质内酶活性部位。
二、过氧化酶实验染色方法
1958年 Washburn 复方联苯胺法 1965年 Kaplow 二盐酸联苯胺法 1985年血液学国际标准化委员会(ICSH)
单核细胞呈阳性反应，阳性反应物为 细颗粒弥散状、中粗颗粒往往位于胞 浆边缘。
浆细胞大多呈阴性，少数为红色颗粒。 组织细胞为阳性或阴性反应。 巨噬细胞可呈细颗粒的阳性反应。
三、临床意义
1. 帮助鉴别红细胞系统疾病
阴性：正常红细胞、AA； 弱阳性：MA、 IDA、 HA； 强阳性：红白血病及各类急性白
NAP染色有多种检测方法，国际标准化委员会推荐 Kaplow萘酚AS-BI磷酸钠法和Tomonaga萘酚AS-MX 磷酸钠法。钙-钴法试剂成本低廉，操作繁琐，反应 时间长，临床上逐步被偶氮偶联法取代，阳性产物色 泽鲜明、定位精确，尤其以萘酚AS-BI磷酸钠法最为 广泛使用，利于评定NAP活性强度的分级。常用重氮 盐有坚牢蓝RR、坚牢蓝BB、坚牢紫酱等，不同偶联 有不同的灵敏度。
主要用于鉴别急性白血病的细胞类型
（1）急淋和急性髓系白血病的鉴别： 急淋：（－），阳性率<3%； 急单：弱阳性； 急粒：阳性（ + ～ + + + ）。
急性白血病POX反应强弱的顺序 M3>M2b>M2a>M6(粒)>M4 >M1>M5>HAL>ALL
Auer小体POX 呈阳性
原始/幼稚巨核细胞/浆细胞POX阴性
++++
+++
++
++
+
+
－
EOS －
2. NAP染色结果报告：
NAP染色结果报告包括阳性率和积分值。
阳性率：指计数100个中性成熟粒细胞，其 阳性细胞的数量即为阳性率；积分值：指计 数100个中性成熟粒细胞，不同阳性程度细 胞数量乘以其阳性程度之和即为积分值，其 计算公式为：积分值=(＋)数量×1 +(＋＋)数 量×2 +(＋＋＋)数量×3 +(＋＋＋＋)数量 ×4。
糖原是人体一种重要的贮存糖， 它是产生能量的重要物质，在化学上 糖原是D-葡萄糖分子组成的聚合体， 对AL的分型及MDS、AA、脂质代谢 性疾病等的诊断有着重要意义。
一、原理
过碘酸是一种氧化剂，可使含有乙二醇 基的多糖类物质(糖原、糖蛋白、糖脂、粘 多糖等)氧化，形成双醛基。醛基与Schiff ’s 液中的无色品红结合，使无色品红变成紫 红色化合物，定位于含多糖类的细胞内， 其阳性强弱与乙二醇基含量有关。
和少数铁小块。 (＋＋＋＋)：有极多铁颗粒、小珠和很多
铁小块，密集成堆。
2. 细胞内铁(油镜观察中晚幼红细胞)
阳性率 观察100个中晚幼红细胞，计算
出铁粒幼红细胞的百分比。
细胞内铁(油镜观察幼红细胞)
Ⅰ型：1～2个小铁颗粒。 Ⅱ型： 3～5个小铁颗粒。 Ⅲ型： 6～10个小铁颗粒或1～4个大颗粒。 Ⅳ型： 10个以上小铁颗粒或5个以上大颗粒。
二、PAS染色结果
阳性结果为胞质内出现紫红色物质， 细胞核为蓝色。
颗粒状 片状 珠状 块状
阳性物分布为 细颗粒弥散状
阳性物分布为 粗颗粒/珠状/块状
PAS 珠状、块状
三、正常血细胞的染色反应
1. 粒细胞系统：（阳性逐渐增强）
原始粒C（－）或（+） 早幼粒C~成熟中性粒C（+）：
细颗粒均匀红色 嗜酸粒C：颗粒不着色，胞质呈红色。 嗜碱粒C：颗粒阳性，胞质不着色。
1. 粒细胞系统：
原始粒细胞（－）或（+） 除嗜碱性粒细胞以外，早幼粒以下阶段细胞 均为阳性且随着细胞的成熟阳性逐渐增强， 嗜酸粒细胞阳性最强。
2. 单核细胞系统：
（－）或弱（+），阳性颗粒少而细小。
3. 其它系统细胞：
淋巴细胞系统、红细胞系统、巨核 细胞系统、浆细胞、组织细胞（－）。
六、临床意义
19%~44%， I~II型（ I型为主），无 Ⅲ型、Ⅳ型、环形铁粒幼红细胞及铁粒 红细胞。
四、临床意义
1. 缺铁性贫血： 外铁（－），内铁阳性率<10%； 治疗有效后，内外铁 。
2. 铁粒幼细胞性贫血： 外铁；内铁阳性率，环形铁粒幼 红细胞增多，可见Ⅲ、Ⅳ型铁粒幼 红细胞。
3. MDS-RAS：内外铁增多，环形铁粒幼 红细胞>15%。
第二节 细胞化学染色检验
本节主要内容： 一、铁染色 二、中性粒细胞碱性磷酸酶染色 三、过氧化物酶染色 四、糖原染色 五、酯酶染色 六、酸性磷酸酶染色
要求：
掌握细胞化学染色的原理及临床应用 熟悉正常血细胞的染色反应 了解细胞化学染色的基本步骤
第一部分 概 述
一、概念
细胞化学染色是细胞学和化学相结合 而形成的一门科学。它以细胞形态学为 基础，结合运用化学反应的原理对血细 胞内的各种化学物质(酶类/脂类/糖类/铁 /蛋白质/核酸等)作定性、定位、半定量 分析的方法。
铁粒幼红细胞(sideroblast)： 胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。
铁粒红细胞(siderocyte)： 胞质中出现蓝色铁颗粒的成熟红细胞。
环形铁粒幼红细胞(ringed sideroblast) 幼红细胞胞质内铁颗粒≥5个，紧密排 列或围绕核周1/3以上者。
三、参考范围
1. 细胞外铁： （ + ） ~（ ++ ） 2. 细胞内铁：铁粒幼红细胞阳性率大约
4. 非缺铁性贫血：溶贫、巨幼贫、再障、 白血病等，内外铁常增多。
5. 感染、肝硬化、慢性肾炎、血色病等： 外铁增多。
五、应用评价
铁染色是临床常用的一种细胞化学 染色，虽不如血清铁蛋白敏感，但是反 映机体储存铁的金标准。 外铁：反映骨髓中铁的储存量； 内铁：反映骨髓中可利用的铁量。
中性粒细胞碱性磷酸酶染色
二氨基联苯胺法（DAB染色法） 过氧化酶氨基-甲基卡巴唑染色法 二盐酸联苯胺法
三、ICSH规定POX方法选择条件
酶反应基质是否容易获得 是否有致癌倾向危险 反应产物的显示观察是否满意
四、结果判断
在细胞胞质内出现金黄色颗 粒为阳性反应。
复方联苯胺法
二氨基联苯胺法 二盐酸联苯胺法
五、正常血细胞POX染色反应
戈雪氏细胞阴性 尼曼-匹克细胞阴性 组织嗜碱细胞阴性 海蓝细胞+）与原淋（－） b. 急性早幼粒白血病(+++)与急单（+） c. 急单（+）与组织细胞白血病、 恶性组织细胞病（－）
苏丹黑染色 （Sudan black B，SBB）
一、原理
苏丹黑B是一种脂溶性重氮染料， 可溶解细胞内含脂结构(中性脂肪、磷 脂、糖脂和类固醇)，而使脂类物质显 示出来，呈棕黑色或深黑色(粒细胞： 丰富；单核细胞：少量)。
形态学分型：进行初步的诊断
免疫学分型：明确细胞种类
细胞遗传学分型：与疾病预后有关
分子生物学分型：提高到分子水平
四、基本步骤
1. 固定 （1）物理法：干燥、火焰 （2）化学法：
A、蒸气固定： B、液体固定：甲醛、乙醇、甲醇。
2. 显示：有色沉淀反应
（1）偶氮偶联法：酯酶染色 （2）联苯胺法：POX （3）普鲁士蓝反应：Fe （4）雪夫反应：PAS （5）金属沉淀法：NAP （6）物理显色法：SBB
4Fe3+ + 3K4[Fe(CN)6] 酸性 Fe4[Fe(CN)6]3 + 12K+
含铁物质 亚铁氰化钾
亚铁氰化铁
二、结果判断
1. 细胞外铁(骨髓小粒－含铁血黄素) 铁颗粒、铁小珠、铁团块
细胞外铁(低倍镜下观察骨髓小粒)
（－）： 无铁颗粒 （＋）：有少量铁颗粒或偶见铁小珠 (＋＋)：有较多的铁颗粒或铁小珠 (＋＋＋)：有很多的铁颗粒、铁小珠
前者 后两者正常或
(4) 慢粒病情观察：
(5) 再障与阵发性睡眠性血红蛋白尿：
前者
后者
(6) 恶组与反应性组织细胞增多症：
前者
后者常
(7) 急性白血病类型：
AML
急淋
细菌感染NAP染色 细菌感染NAP染色
CML NAP阴性