颗粒 什么关系
POX
如果原粒出现颗粒POX一定阳性吗？NO 如果幼淋出现颗粒POX一定阴性吗？YES
若POX阳性，肯定是髓系的。 有颗粒+POX阴性 做酯酶双染及免疫分型 （存在一部分是POX阴性的白血病，MDS转白，CML急变，HAL ） 无颗粒+POX阴性 +临床及形态 淋系 （1%做免疫分型，M0）
4.异常细胞MPO的变化 ①分化差的原始粒细胞及原始单核细胞MPO可为
阴性，如M2，并不是所有原始细胞均阳性。M5a， 原始单核细胞常阴性。 ②MDS：原始细胞POX常阴性，发育异常的下阶 段粒细胞POX可为阴性。 ③MDS转白，CML转白，HAL，原始粒细胞POX 可为阴性，但不能诊断为M0，因为原始粒细胞不 像幼稚淋巴细胞，且可能为发育异常，并不是分化 差。 ④反之，如果典型原始粒细胞POX阴性，应考虑到 是否为MDS转化而来。
急性白血病类型鉴别：
急性粒细胞白血病：阳性率常≥3%，呈现弥散 状，颗粒状或块状阳性；
急性单核细胞白血病：呈弱阳性（弥散状）或 阴性；
急性淋巴细胞、巨核细胞性白血病：阴性。
急性白血病MPO反应强弱顺序： M3>M2>M6(粒)，M4，M1>M5>HAL
2.嗜天青颗粒（紫红色，非特异性颗粒，阿氏颗粒）：
干 4、复染：E液20min
积分计算
据兰色颗粒所占胞浆面积、颗粒大小、多少及染色强度来判断。 阴性为胞浆内无兰色颗粒。 正常值：正常人积分一般为40－100分
级别
+ ++ +++ ++++
兰色颗粒占 颗粒大小 胞浆面积 （％）
<50
小
50-80
小-中等
80-100 100
中等-大 中等和大
颗粒多少 染色强度 积分
血病，M5a。 如何在错综复杂的淋系白血病中与这1%的白血病进行分
析？
POX染色（—）
诊断的准确率：99%
淋系的POX肯定（—）。
怎么鉴别呢
髓系白血病POX （—） 。
如何诊断
CML急变，MDS转白，M0
少见的POX（-)的髓系白血病， M5a
1.临床表现：询问病史，CML，MDS
不升高。 4、辅助PV与ET诊断:PV与ET活性明显增高，继发者一般不
增高或仅轻度增高。CNL NAP积分明显增高。IMF亦显著 增高。
NAP临床意义
CML（慢性期）： 或0分 类白血病反应：正常
PNH：活性 AA：活性
NAP积分
CNL： 明显 IMF：显著 PV与ET：明显
细菌感染：活性 病毒感染：活性轻度 或N
细胞化学染色步骤
固定 染色原理 复染
固定： 意义：保持细胞结构及化学成分的不变。 目的：使细胞内的蛋白质、酶类、糖类等变 成不溶性物质。 蒸汽固定—甲醛 液体固定—甲醛、丙酮、乙醇、甲醇
染色原理
偶氮偶联法： NAP、A-NAE、A-NBE、AS-DCE、ACP 联苯胺法：MPO 普鲁士兰反应：FE 雪夫反应：PAS
判断方法：幼红细胞内出现兰绿色的圆形小珠，需与染料沉渣鉴 别。
Ⅰ型：1个 Ⅱ型：2～5个 Ⅲ型：6～9个 Ⅳ型： ≥10个 环形铁粒幼红细胞：铁颗粒围绕核周排列超过6个以上。
环形铁粒幼红细胞
临床意义
【临床意义】 1、鉴别缺铁性与非缺铁性贫血：IDA细胞外铁消失，铁粒幼
粒细胞 单核细胞
H2O2
亚硝基 铁氰化钠
棕色颗粒
操作步骤
1、复方联苯胺染液：3～8滴 盖满玻片
1 Min 勿冲洗
2、过氧化氢溶液：（2倍）的3～8滴
8 Min 小水流冲,勿冲骨髓
3、复染： A液：B液＝1：2 （30min，据细胞数而定）
阳性率及阳性强度判断
1、计数100个肿瘤细胞，算出阳性率。 M1，M2：原始粒细胞， M3：早幼粒细胞 M4：原始粒细胞及原始幼稚单核细胞。 M5：原始及幼稚单核细胞。M6：原始粒细胞 M7：原始单核细胞。ALL：原始幼稚淋巴细胞 淋巴瘤：淋巴瘤细胞
【试验原理】
碱性磷酸酶
磷酸萘酚AS-BI 萘酚AS-BI + FBB
萘酚AS-BI 蓝色沉淀。
工作液配置
工作液配制： 1、B液50ul+C液50ul混匀，变黄，静置
2min+2ml蒸馏水+D液50ul，淡黄色。 2、固定：血涂片3min，骨髓5min，水洗晾干 3、染色：滴加工作液37℃水浴30min，水洗晾
很少
微弱-中等 1分
少等-中等 中等-强
2分
中等-多
强
3分
很多(密集、 很强
4分
甚至覆于核 上
临床意义
1、鉴别CML与类白血病反应：慢性粒细胞性白血病（慢性 期）时，NAP活性显著降低或为阴性，常为“0”
2、鉴别PNH和AA：前者活性降低，后者升高。 3、鉴别细菌感染与病毒感染：前者升高，后者轻度升高或
诊断
诊断 （1）诊断的意义？
诊断的准确率 POX 99% （2）怎样才能真正的体现细胞化学的价值？
临床+形态+细胞化学 临床+形态+细胞化学+免疫分型
辅助
什么时候是辅助？ 不典型白血病
POX染色
淋系的POX肯定是阴性的。 大概有1%的髓系白血病POX是阴性的。 如何诊断髓系白血病？ CML急变，MDS转白，M0，少见的POX阴性的髓系白
MDS、白血原病始细胞阴性，部分下阶段粒细胞阴性
AML-M5a
AML-M5b血涂片
POX判定技巧
1、根据中性分叶核粒细胞是否阳性，判定染色是否成 功。
2、原始细胞一般POX强度弱，+-++，若+++-+++为早 幼及以下阶段细胞。
3、部分白血病患者原始细胞POX染色强，早幼粒细胞 与POX强的原始的区别：据瑞氏染色的原始细胞数判定。
铁染色
【标本要求】 骨髓片1张
【试验试剂】
固定剂 甲醛
A液
亚铁氰化钾
B液
盐酸
C液
核固红
【试验原理】 酸性
含铁物质＋亚铁氰化钾
亚铁氰化铁（兰绿色）
操作步骤
工作液配制： A液1ml＋B液1ml，马上染，防止HCL挥发。
1、固定：30秒 2、染色：工作液37℃水浴60min，水洗晾干 3、复染：E液20min
细胞化学染色
细胞化学染色项目
髓过氧化物酶染色 （MPO） 中性粒细胞碱磷酸酶染色（ NAP) 糖原染色（PAS） 铁染色 酯酶双染： Α-醋酸萘酚酯酶染色 （ A-NAE ）+特异性酯酶染色 (CE) Α-丁酸萘酚酯酶染色 （ A-NBE ）+特异性酯酶染色 (CE) 抗酒石酸性磷酶染色 (TRAP)
注意事项
1、正常值：40-100分，大多数CMLNAP积分在10分以下， 有时甚至为0分，有时可达30分左右，因此定义正常值低限 为40分。
2、目前由于体检的增加，有时CML患者的白细胞只有1-2 万，外周血可有少许的幼稚粒细胞，无原始细胞，骨髓可 分类正常，但嗜酸及嗜碱性粒细胞易见，此时注意做NAP 积分。
髓过氧化物酶染色
【标本要求】
骨髓片,4℃保存2周
复方联苯胺染液
联苯胺
0.3g
95％乙醇
99ml
36％亚硝基铁氰化钠 1ml
试剂保存：10月或更久
过氧化氢溶液
30％过氧化氢 1滴
蒸馏水
50ml
此溶液需新鲜配制
MPO【试验原理】
粒细胞及一部分单核细胞胞浆内含髓过氧化物酶，此酶能 将过氧化氢中的氧释放出来，而把联苯胺氧化成氧化联苯 胺，后者与亚硝基铁氰化钠结合形成棕色颗粒，沉着于细 胞质中。
碱性染料亚甲蓝或天青与细胞中的酸性成分核染 色质，碱性蛋白结合，使其呈蓝色
酸性染料伊红与细胞中的碱性成分血红蛋白，嗜 酸性颗粒结合，使其呈红色。
粒系及单核系阳性；
淋系阴性：成熟淋巴细胞，原幼稚淋巴细胞，淋 巴瘤细胞；
巨核系阴性： 颗粒及产板巨，血小板均为阴性。
浆细胞内的紫红色颗粒，类柴束样棒状小体为免 疫球蛋白聚集而成，亦为阴性。
复染
核着色效果较好：苏木精 浆着色较好：核固红，甲基绿
髓过氧化物酶
血细胞所含过氧化物酶主要为髓过氧化物酶(MPO) ， 是 一类糖蛋白 ，相对分子质量约为 150000 ，是人类中性粒 细胞含量最多的蛋白质 ，约占细胞干重的 3%~5%。
主要存在于线粒体和溶酶体（嗜天青颗粒）中，是一种与 生物氧化有关的溶酶体酶，主要功能是破坏生物氧化过程 中有巨毒的过氧化物， 使其放出氧，参加细胞内氧化还 原过程。
细胞外铁
观察：骨髓小粒及散在的吞噬细胞。
正常人：一般为“+-++”。
判定方法 ： 阴性：无铁粒可见 +：弥散状，有少数铁粒或偶见到铁小珠 ++：有铁粒小珠和少数小块 +++：有很多的铁粒小珠和少数铁小块 ++++：有很多的铁粒、小珠、小块、大块
细胞内铁
正常人：铁粒幼红细胞≥15％，以Ⅰ、Ⅱ型为主，无环形铁粒幼 红细胞。
POX染色阴性
此病人虽临床，形态，POX染色均支持ALL，但是免疫分型为HAL 说明这种犯错不可避免
POX阴性 淋巴瘤骨髓侵犯
原始粒细胞胞浆中有颗粒POX不一定是阳性 形态是基本
碱性磷酸酶染色NAP
【标本要求】 外周血涂片或骨髓片
【试验试剂】 A液：固定剂，柠檬酸钠、 B液：偶氮溶液，FBB盐 C液：亚硝酸钠 D液：磷酸萘酚AS-BI E液：中性红