《生物化学实验Ⅰ》总复习思考题部分是自己做的，部分是百度的，各位看官如果要借鉴请酌情考虑，后果自负。

——江湖游子1. 请掌握下列生物化学实验常用仪器的正确操作使用方法，并能回答以下问题：（1）离心机使用时为什么要平衡？普通离心机与高速离心机在平衡时有什么不同要求？平衡是为了让转动物体重心正好在转轴上，如果不在，会对转轴产生很大作用力，有时整台机器会跟着晃动。

这对机器损耗很大。

转速越高的离心机不光重量很重，使用时还要特别放平衡，就连离心管里面的试液都要放置等量，离心管还要对称放入转子试管孔内，以确保转子平衡运行，而且在调节转速时，还要使用分段升速法。

(2)为什么用高速组织捣碎机进行动、植物组织捣碎时，需采用间歇式方式进行操作？为了防止产热过高，破坏组织内的蛋白质。

防止蛋白变性。

(3)用真空泵进行减压抽滤时，为什么要连接缓冲瓶？防止负压产生，引起水泵里的水或油泵里的油倒吸，进入滤瓶中，污染滤液。

2.为什么肝糖元只能从刚宰杀的动物肝脏中获取？在提取肝糖元过程中，三氯乙酸、95%乙醇各起什么作用？糖元水解产物中如果存在提取中残留蛋白质时，在用班氏试剂检测水解产物，有什么影响！动物死亡后，体内的细胞还能存活一段时间，由于进行细胞呼吸作用，肝细胞会消耗肝糖元，所以必须用新鲜的肝脏细胞。

三氯乙酸是固定作用（蛋白质能被三氯乙酸沉淀）；乙醇：糖元不溶于乙醇，可以提取糖元。

班氏试剂使用时需要加热，而加热会时残留的蛋白质变性水解，对最终测得的水解产物颜色可能有影响。

（水解的产生的氨气结合铜离子，是铜离子的氧化性失去，导致生产绛蓝色沉淀，实验将失败）3.请阐述分光光度仪的主要部件及其功能；阐述紫外与可见光的光波长范围；在紫外与可见光范围内测定物质吸光度时，对光源与吸收池有何要求？光电管的功能是什么？为什么说光电管是分光光度仪最脆弱和最易损的部件？光源（钨灯）：发光。

单色器：把混合光波分解为单一波长光的装置。

吸收池：盛放待测流体（液体、气体）试样的容器。

该容器应具有两面互相平行、透光且有精确厚度的平面。

它藉助机械操作能把待测试样间断或连续地送到光路中，以便吸收测量的辐射（光）通量。

检测器：将单色器分出的光信号进行光电转换，电信号在工作站显示成出峰。

测量装置：通过测得的电流表·记录器·数字示值读书单元的数据来绘制吸收曲线。

紫外光：200至350nm可见光波长:350至760nm紫外测定：其应用波长范围为200～400nm的紫外光做光源，在低于350nm的紫外光区工作时，必须采用石英池或熔凝石英池。

可见光测定：用波长为400～850nm的可见光作光源，可以用玻璃池·石英池·熔凝池。

光电管的功能：光电转换，将光信号转化成电信号。

光电管容易产生光电管疲劳：所以不测定时必须将试样室盖盖好，使光路切断，以延长光电管的使用寿命。

4.请阐述Beer-Lamber定律，并用该定律阐述分光光度仪工作原理？用分光光度仪定制某物质标准曲线时，需将OD值测定范围确定在0.2～0.8区域内，为什么？（这题没找到答案，自己写的）朗伯(Lambert)定律阐述为：光被透明介质吸收的比例与入射光的强度无关；在光程上每等厚层介质吸收相同比例值的光。

比尔(Beer)定律阐述为：光被吸收的量正比于光程中产生光吸收的分子数目。

log( Io/I)= εCl (1—4)式中Io和I分别为入射光及通过样品后的透射光强度；log（Io/I）称为吸光度(ab—sorbance)旧称光密度(optical density)；C为样品浓度；l为光程；ε为光被吸收的比例系数。

当浓度采用摩尔浓度时，ε为摩尔吸收系数。

它与吸收物质的性质及入射光的波长λ有关。

工作原理：通过测得的吸光度，带入Beer-Lamber定律，可以求得该物质的浓度；通过确定该物质的最大吸收波长，可以确定该物质的种类。

OD值小于0.2时，底物浓度低，误差大；OD值大于1时，线性关系不好，所以取0.2到0.8.5.可以用来进行分析测定用的标准品应具备哪些特性？普通性，纯度高（工业纯，化学成分单一，分析纯，光谱纯，食品纯），理化性质稳定，含量准确，杂质无影响。

6.请阐述移液管与比色皿的正确清洗方法和放置方法；阐述移液管取样与比色皿加样的正确操作方式和操作注意事项。

移液管：移液管清洗要根据吸取液体的性质选用不同的清洗剂，有机液体可用丙酮、乙醇溶液，无机试剂可用洗涤剂。

应反复清洗数次，再用蒸馏水清洗干净，自然凉干。

标志：内壁不挂水珠。

干净的移液管应置于干净的一夜管架上，先竖着放，等水分干后横着放。

比色皿：用铬酸侵泡一段时间后，将铬酸倒回试剂瓶，再用清水冲洗比色皿。

使用时，要让光穿过透光面，测定完毕放到盒里时要让磨砂面向上，清洗后放置时，倒置于滤纸上。

移液管取样：根据所移溶液的体积和要求选择合适规格的移液管使用，在滴定分析中准确移取溶液一般使用移液管，反应需控制试液加入量时一般使用吸量管。

检查移液管的管口和尖嘴有无破损，若有破损则不能使用;1、使用前：使用移液管，首先要看一下移液管标记、准确度等级、刻度标线位置等。

使用移液管前，应先用铬酸洗液润洗，以除去管内壁的油污。

然后用自来水冲洗残留的洗液，再用蒸馏水洗净。

洗净后的移液管内壁应不挂水珠。

移取溶液前，应先用滤纸将移液管末端内外的水吸干，然后用欲移取的溶液涮洗管壁2至3次，以确保所移取溶液的浓度不变。

2、吸液：摇匀待吸溶液，将待吸溶液倒一小部分于一洗净并干燥的小烧杯中，用滤纸将清洗过的移液管尖端内外的水分吸干，并插入小烧杯中吸取溶液，当吸至移液管容量的1/3时，立即用右手食指按住管口，取出，横持并转动移液管，使溶液流遍全管内壁，将溶液从下端尖口处排入废液杯内。

如此操作，润洗了3-4次后即可吸取溶液。

将用待吸液润洗过的移液管插入待吸液面下1～2cm处用吸耳球按上述操作方法吸取溶液(注意移液管插入溶液不能太深，并要边吸边往下插入，始终保持此深度)。

当管内液面上升至标线以上约1～2cm处时，迅速用右手食指堵住管口(此时若溶液下落至标线以下，应重新吸取)，将移液管提出待吸液面，并使管尖端接触待吸液容器内壁片刻后提起，用滤纸擦干移液管或吸量管下端粘附的少量溶液。

(在移动移液管或吸量管时，应将移液管或吸量管保持垂直，不能倾斜)3、调节液面：左手另取一干净小烧杯，将移液管管尖紧靠小烧杯内壁，小烧杯保持倾斜，使移液管保持垂直，刻度线和视线保持水平(左手不能接触移液管)。

稍稍松开食指(可微微转动移液管或吸量管)，使管内溶液慢慢从下口流出，液面将至刻度线时，按紧右手食指，停顿片刻，再按上法将溶液的弯月面底线放至与标线上缘相切为止，立即用食指压紧管口。

将尖口处紧靠烧杯内壁，向烧杯口移动少许，去掉尖口处的液滴。

将移液管或吸量管小心移至承接溶液的容器中。

4、放出溶液：将移液管或吸量管直立，接受器倾斜，管下端紧靠接受器内壁，放开食指，让溶液沿接受器内壁流下，管内溶液流完后，保持放液状态停留15s，将移液管或吸量管尖端在接受器靠点处靠壁前后小距离滑动几下(或将移液管尖端靠接受器内壁旋转一周)，移走移液管(残留在管尖内壁处的少量溶液，不可用外力强使其流出，因校准移液管或吸量管时，已考虑了尖端内壁处保留溶液的体积。

除在管身上标有“吹”字的，可用吸耳球吹出，不允许保留)。

5.洗净移液管，放置在移液管架上。

注意事项：1.移液管(吸量管)不应在烘箱中烘干。

2.移液管(吸量管)不能移取太热或太冷的溶液。

3.同一实验中应尽可能使用同一支移液管。

4.移液管提出液面后，应用滤纸将沾在移液管外壁的液体擦掉;5.看刻度时，应将移液管的刻度与眼睛平行，以最下面的弯月面为准。

6.移液管在使用完毕后，应立即用自来水及蒸馏水冲洗干净，置于移液管架上。

7.移液管和容量瓶常配合使用，因此在使用前常作两者的相对体积校准。

8.在使用吸量管时，为了减少测量误差，每次都应从最上面刻度(0刻度)处为起始点，往下放出所需体积的溶液，而不是需要多少体积就吸取多少体积。

比色皿加样：手持干净的比色皿粗糙面，将装有溶液的试剂瓶口紧靠比色皿内部，缓缓倒出液体，液体大约占全部的三分之二时，停止倒入，试剂瓶口紧靠比色皿口微提防止溶液倒出。

并用吸水纸擦干。

注意事项：1、拿取比色皿时,只能用手指接触两侧的毛玻璃,避免接触光学面。

同时注意轻拿轻放，防止外力对比色皿的影响，产生应力后破损。

2、凡含有腐蚀玻璃的物质的溶液,不得长期盛放在比色皿中。

3、不能将比色皿放在火焰或电炉上进行加热或干燥箱内烘烤;。

4、当发现比色皿里面被污染后，应用无水乙醇清洗，及时擦拭干净。

5、不得将比色皿的透光面与硬物或脏物接触。

盛装溶液时,高度为比色皿的2/3处即可,光学面如有残液可先用滤纸轻轻吸附，然后再用镜头纸或丝绸擦拭。

7.请阐述“黑体”与“参比”在分光光度仪校正中的作用，以及正确的校正操作方法；（以7200型可见光分光光度仪，用DNS法测定还原糖为例，说明如何进行“黑体”与“参比”的校正操作？）黑体校正作用：完全挡住光线，使透光度调零。

黑体校正：调到T档，使透光率为0%。

参比校正作用：消除DNS的颜色对测定的影响。

参比校正：调到A或T档校正都可，A档调0%，T档调100%。

8.请阐述用分光光度法测定物质含量的基本操作步骤；并请阐述“两表一图”的含义。

1.接通电源，打开仪器开关，掀开样品室暗箱，预热十分钟。

2.将灵敏度开关调至“1”档（若零点调节器调不到零时，需选用较高档）3.根据所需要测定的波长选择波长范围档4.将空白液及待测液分别导入比色杯3／4处，用擦镜纸擦干净外币，放入样品室，将空白管对准光路。

5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器，是读数盘指针指向“0”处。

6.盖上暗箱盖调节“100”调节器，是空白管的T=100，指针稳定后逐步拉出样品滑竿分别读出测定管的光密度值，并记录。

7.比色完毕，关上电源，取出比色皿洗净，样品室用软布或软纸擦干净。

两表一图：一表为标准品吸光度随浓度变化的关系，一表为待测样吸光度随浓度变化的关系。

在最大吸收波长下，吸光度从0.2到0.8对应的浓度范围换算出线性回归方程，为测定该物质含量提供理论依据。

9.用分光光度仪定制标准曲线时，需用一对比色皿，一只用于盛参比液，另一只用于盛不同浓度的标准溶液，在使用时，这两只比色皿之间需要进行校正吗？为什么？如何校正？需要，每测定一次不同浓度的待测液后都需要从新校正。

防止每次微小的系统误差和光线温度等对仪器的影响。

每测定一次待测溶液后，先拉到黑体位置，调节透光度为0:；再拉到参比液位置，将吸光度调为0.10.什么叫物质的特征吸收波长？用分光光度法定制实测物质标准曲线时，如何确定被测物质的特征吸收波长？特征吸收波长：吸光度最大时所对应的波长。