电转化大肠杆菌感受态细胞
1.从-80︒C冰箱取出感受态细胞,置于冰上解冻。
2.将无菌的电击杯置于冰上预冷。
3.将解冻的感受态细胞按照100ul/管分装至预冷的1.5ml的离心管中,混匀,冰上放置。
4.向装有感受态细胞的离心管中加入1-2 µl质粒或连接产物,并混匀,冰浴10min。
5.打开电转仪,电压为2.0 kV,电击5ms [这些参数设置可以根据经验略作调整]。
6.将混合物转移至已预冷的电击杯中,轻轻敲击电击杯使混合物均匀进入电极杯的底部。
并用吸水纸吸干电击杯外壁的冰水。
7.将电击杯推入电转仪,按一下pulse键,听到蜂鸣声后,向电击杯中迅速加入2X 500μl 的SOC液体培养基,重悬细胞后,转移到1.5ml的离心管中。
8.37︒C,220rpm复苏1小时。
9.离心,涂板,置于37︒C,过夜培养,次日观察结果。