第十八章高效液相色谱法
15.外标法测定黄芩颗粒剂中黄芩苷含量：色谱柱为
Zirchrom C8柱（20cm X 4.6mn ,
5um ）；流动相为乙腈-甲醇-水（含0.5%三乙胺，磷酸调pH3.0）（28： 18： 54）;以黄芩苷 对照品配成浓度范围为10.3〜144.2ug/ml 的对照品溶液。

进样，测得黄芩苷峰面积，以峰 面积和对照品浓度求得回归方程为：
A=1.168 X 105C -1.574 X 103, r=0.9998.精密称取黄芩
颗粒0.1255g ，置于50ml 量瓶中，用70%甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，精密量取
1ml 于
10ml 量瓶中，30%甲醇定容到刻度，摇匀即得供试品溶液。

平行测定供试品溶液和对照品溶 液（61.8ug/ml ），得峰面积分别为 4250701，5997670.
16 .校正因子法测定复方炔诺酮片中炔雌醇的含量： ODS 色谱柱；甲醇-水（60:40）流动相；检测器UV280nm
对硝基甲苯为内标物。

（1）校正因子的测定：取对硝基甲苯（内标物） 、炔诺酮和炔雌醇对照品适量，用甲醇制成 10ml 溶液，进
样10ul ，记录色谱图。

重复三次。

测得含 0.0733mg/ml 内标物、0.600mg/ml 炔诺酮和0.035mg/ml 炔雌醇的对照 品溶液平均峰面积列于表
18-6。

（2）试样测定：取本品 20片，精密称定，求出平均片重（60.3mg/片）。

研细后称取732.8mg （约相当于炔 诺酮7.2mg ），用甲醇配制成10ml 供试品溶液（含内标物 0.0733mg/ml ）。

测得峰面积列于表 18-6。

炔诺酮
炔雌醇 内标物 对照品溶液 1.981 X 106 5
1.043 X 10 5
6.587 X 10 供试品溶液
6
2.442 X 10
1.387 X 10
6.841 X 10
m 醇 /A 醇
0.035 10/(1.043 105) 302
m s /A s 0.0733 10/(6.587 105)
试样含炔雌醇的量：
r
A 醇 c cc
" 1.387 105 c 八 c/ \
m 醇 f 醇 m s
3.02 0.0733 10 0.449(mg)
A s
6.841 105
每片含炔雌醇的量： 0 449 ,
0.449 60.3 (0.0369mg/ 片)
732.8
17.测定生物碱试样中黄连碱和小檗碱的含量，称取内标物、黄连碱和小檗碱对照品
解:
c 样 /10 4250701 61.8
5997670
w%
50c 样 10 6
100% 17.4%
0.1255
A 样
各0.2000g配成混合溶液。

测得峰面积分别为 3.60, 3.43 和4.04cm2。

称取0.2400g内标物和试样0.8560g同法配制成溶液后，在相同色谱条件下测得峰面积为 4.16, 3.71 和4.54cm2。

计算试样中黄连碱和小檗碱的含量。

18 .计算在反相色谱中甲醇—乙腈—水（60:10:30 ）的强度因子。

如果改用四氢呋喃—甲醇—水，水的含量不变，为了保持相同的洗脱强度，甲醇的比例是多少？
设改换溶剂后，甲醇的比例为x，则
x = 0.687 = 68.7%
19.用15cm长的ODS柱分离两个组分。

柱
效
n=2.84 x 104m-1;测得t°=1.31min ;组分
的t R1 4.10min; t R2=4.45min。

(1)求k、k?、
可否达1.5?
解:(1)k
1
t R/'t R1 t0 4.10 1.31
t0t0 1.31
⑵由R f
R2L1，则 1.02
R2
0.15
L20.30
a、R值。

（2）若增加柱长至30cm,分离度R
2.13
R 2 = 1.4（达不到1.5）
解：f黄m黄/A黄A s
m s/A s A黄
3.60
3.43
1.05
解：S混S甲甲+ S乙乙+ S水水 3.0 0.60+ 3.2 0.10+ 0 0.30 2.12。