API微生物鉴定系统
——全球金标准
细菌鉴定的重要性
- 疾病的评估 - 找出食物变质的原因，从而制定预防的步骤 - 确保用药治疗洽当 - 环境控制 - 流行病学的基础
常规鉴定所遇的困难
- 分类学复杂及进化
- 涉及很多生化项目
- 工业微生物容易出现变异
- 结果处理及计算麻烦
API 系统
所引用的分类学方法国际认可 - International Journal of Systematic Bacteriology
ID 显色接触酶 现成试剂 稳定化试剂 显色剂 粘度 敏感性 实 用 性 : 用 於 包括 血 平板在内各种培养 有 有 (稳定期 1 年 ) 有 (Evans 兰) 试剂可保持在测定的菌落上 高 有 传统方法 (H2O2) 无 无 无 滴加於琼脂上 低 无
ID Color Catalase
产品规格
名称 货号 试剂 ID Color Catalase 55561 2 瓶 5ml 滴瓶 (~100 测试量) 储存 有效期 2-8° C 於暗处 一年或 6 个月(於室温)

培养盒 保持潮湿环境

PSIpettes 接种管 挑菌落，混匀及接种

API 试条 每个小孔载有风乾的底物
操作步骤 1 (API 20E)
分离单个菌落
挑单个可疑菌落 尽量避免使用高度选择性培养基
调制菌液

悬浮液 (容量: 5ml)
操作步骤 2 (API 20E)

将菌液接种到小 管或小管及小杯 (CIT, VP和 GEL)
API鉴定原理
API 微生物鉴定系统以微生物生化理论为基础,借 助微生物信息编码技术,为微生物检验提供了简易 、方便、快捷、科学的鉴定程序。
生理生化鉴定：根据微生物对各种生理条件（温 度、pH、氧气、渗透压）、生化指标（唯一碳氮 源、抗生素、酶、盐碱性）代谢反应进行分析， 并将结果转化成软件可以识别的数据，进行聚类 分析，与已知的参比菌株数据库进行比较，最终 对未知菌进行鉴定的一种技术。
葡萄球菌
链球菌
接触酶试验
原理 :
H 2 O2
接触酶
H2O + O2
传统方法 :
试管法
O2
菌落
+ =接触酶(+)
H2O2
玻片法
=接触酶(+)+
接触酶显色剂
玻片法
试管法
ID Color Catalase 接触酶试剂
组成:
- 增稠剂: 高粘度集中所产生的气泡, 防止试剂扩散
- Evans兰: 兰色使结果更容易阅读
API 系统
- 构成: 试条由特別选择的生化反应小管 API试条有多种类 各有相应的数据库 所有生化结果以同时间一并阅读
API 套件
API 试剂盒及其配套试剂

石腊油(容量: 125ml) 覆盖在指定小孔上

悬浮液 (容量: 5ml) 用於调菌液
安培架

附加试条 加进指定的生化孔内
容许於平板(包括血平板)上作直接检测
- 玻片法
- 直接在平板上测试
ID COLOR CATALASE 接触酶试剂
步骤 :
– 玻片法 : 或 – 直接平板测试 : 落
将待检菌落乳化於一滴试剂中
将一滴试剂直接滴於平板上的菌
即时产生气泡 (5 秒内) 代表阳性结果。
鉴定用接触酶显色剂
接触酶试验是细菌鉴定中的一个重要反应。由於传统方法的弱 阳性结果，这个试验没有得到充分应用。
步骤
- 染色前，所有细胞是透明的
G()
G()
- 结晶紫着色後用碘增加染料ห้องสมุดไป่ตู้与菌体结合
- 乙醇从G() 菌体洗脱结晶 紫
- 用番红液复染，革兰氏阴性 菌呈粉红色，革兰氏阳性菌 呈兰紫色
革兰氏染色
原理 : 检查细菌细胞壁的渗透性
不紧密外壁层(透乙醇) + 薄内壁层钛聚糖
单层厚钛聚糖细胞壁
革兰氏阳性
革兰氏阴性
革兰氏染色液 2 (Color Gram 2)
- 特性

稳定化的碘液 PVP(聚氯乙烯吡咯烷酮)可以防止因 碘挥发而变质，同时也增强了媒染效 果。
更容易分别G()及G(-)菌

高质量的结晶紫和番红，无沉淀。
接触酶试验
接触酶试验
用于分辨葡萄球菌及链球菌
革兰氏阳性球菌 接触酶 + 接触酶 -
按操作说明书规定，将附加试剂 加进适当小孔内
api20E 试剂
API 试剂条
24小时出结果
阅读结果
根据说明书上，
或彩图的指示， 记录结果於报告 单上。
利用编码手册
或APILAB PLUS软件进出分析
全Windows操作界面，多种语言。
API 结果
跟据T值及%Id的组合，作出评语： (i) 极好的鉴定结果 (ii) 很好的鉴定结果 %Id >99.9及T>0.75 %Id >99.0及T>0.50
(iii) 好的鉴定结果
(iv) 可以接受的鉴定结果 (v) 可疑的生化谱
%Id >90.0及T>0.25
%Id >80.0及T>0
API 与日俱进
不断更新的数据库：
- 分类学的进化 - 新的菌种发现 - 生化反应的演进 - 鉴定菌种需要的改变
定向试验
革兰氏染色液
- 在细菌学里最普遍的染色方法
资料库＝整个系统的心脏
API 系统
• 美国FDA的细菌鉴定标准 • 欧洲药典的细菌鉴定标准 • 国标
API的优点
标准化，简易化 在制造过程中，进行质控 FDA标准 用户可用ATCC菌种进行质控 系统化 操作简易 快速报告 30多年的经验，拥有菌种资料＞25000 ，鉴定系统的发源生化测试＞750 - ＞1500多篇使用文献 -
完整的鉴定谱
微生物鉴定
杆菌 球菌
接触酶
革兰氏
革兰氏
杆菌
球菌
API 鉴定范围
庞大资料库 15种试条 >600种细菌可被鉴定 研究用试条： 乳酸杆菌，芽胞菌，弯曲菌
API 试剂类别
• • • • • • • • • •
API 20E /RapiD 20E革兰氏阴性杆菌鉴定 API 20NE非发酵菌鉴定 API STAPH葡萄球菌及微球菌 API STREP链球菌鉴定 API 20C AUX酵母菌 API 20A厌氧菌 API LISTERIA李斯特菌 API CAMPY弯曲菌属 API CORYNE棒状杆菌 API CH芽胞杆菌/乳酸杆菌
将试条放进培 养盒内

将 5ml 无菌 水放进培养 盒里
利用石腊油覆盖指定的生化孔 (有划线的孔)
ADH ODC H2S URE
把培养盖盖上
操作步骤 3 (API 20E)
把试条放进孵育箱内，利用指
定温度及时间 API20E : 35 - 37oC，18-24 小时
18-24 小时後