可编辑ppt
14
3、在酒精灯火焰旁，打
开三角瓶，把花茎用无菌解 剖刀切成几段，每段至少有 一张叶片
4、切段插入培养基，诱 导愈伤组织，盖上封口膜。
5、愈伤组织插入生芽培 养基，盖上封口膜。
6、用记号笔在瓶壁上写
明培养材料、培养基代号、 接种日期。
注意事项
全部接种操作都是在无菌条件下进行的，所以
要特别认真仔细，以防可杂编辑菌ppt 污染。
(2)将盛有培养基的烧杯在电磁炉上，煮至琼脂完全 融化，补加蒸馏水至1000ml。
将配制好的培养基分装到培养用三角瓶中，每只
100ml三角瓶约装40ml培养基。 分装时要避免把培养基倒在瓶口上，否则培养时容
易引起杂菌污染。
可编辑ppt
11
3、灭菌
（1）把装好的培养基的三角瓶放入高 压灭菌锅中，盖好锅盖。
15
（四）培养
接种后的锥形瓶最好放在无菌箱中培养。培 养期间应定期消毒，温度控制在１８～２5℃， 并且每日照光１4.5小时 。观察记录生长情况， 并照相存档。
2-3周后将生长健壮的丛状苗在无菌条件下 一个个转入生根培养基中，在上述条件下继续 培养
可编辑ppt
16
（五）移栽
生根后，将苗移 至消毒的草炭土或蛭 石中，用玻璃罩或塑 料布保持80%以上湿 度，2-3天后打开玻 璃罩低湿度锻炼
微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同， MS培养基则需提供大量无机营养，无机盐混合物包括植 物生长必须的大量元素和微量元素两大类。
可编辑ppt
10
2.培养基配制与分装：
(1) 取1000ml烧杯一只，加大量元素10倍母液 100ml，微量元素100倍母液10ml，铁盐100倍母液 10ml,有机物质100倍母液10ml。此外,根据培养材料 和实验目的还要附加一定量的生长素,细胞分裂素及蔗 糖 等 , 然 后 加 水 至 1000ml, 待 蔗 糖 充 分 溶 解 后 用 1mol/L 的NaOH或HCl调酸碱度为pH5.8,最后加入 琼脂粉6.5g,如用琼脂条,则要加8g。
(1)外植体选取：不同的植物组织 同一植物的不同材料
(2)营养 (3)环境条件(pH、温度、光照) (4)植物激素 (5)消毒
可编辑ppt
5
（四）生长素与细胞分裂素使用配比对实验结果的影响
可编辑ppt
6
二、实验操作
制备MS固体 培养基
外植体消毒
接种 培养
栽培
可编辑ppt
移栽
7
（一）制备MS固体培养基
1、配制母液
按照MS培养基成分表, 分别配制培养基的母液。
(1)大量元素母液(10倍液) 分别称取10倍用量的各种大量无机盐，依次溶解于大约800ml 热的（60-80℃）蒸馏水中。（一种成分完全溶解后再加入下一 种，最后加水，定容至1000ml后装入试剂瓶中，冰箱内贮存备 用）。
(2)微量元素母液(100倍液) (3)铁盐母液（100倍液） (4)有机物质母液(100倍数) (5)生长素母液 (6)细胞分裂素母液
（ 2 ） 设 置 灭 菌 温 度 参 数 为 121℃ ， 20min，开始灭菌。
无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键．
可编辑ppt
12
（二）外植体（离体组织）消毒
1、70﹪酒精中浸泡10min，无菌水冲洗 2、5%次氯酸钠溶液中浸泡，无菌水冲洗 3、用另一5%次氯酸钠溶液浸泡5min，无菌水冲洗 4、超净台中用无菌水多次冲洗
可编辑ppt
3
（二）植物组织培养的基本过程
离体器官、 组织或细胞
脱分化 愈伤组织
再分化 根、芽
知识要点: 1.细胞分化的概念可编；辑ppt 2.离体植物细胞的脱分化和再分化。
植物体
4
（三）影响植物组织培养的因素
影响植物组织培养的因素有培养基配制、 外植体的选取、消毒、接种、培养、移栽和 栽培等。
第四部分 浅尝现代生物技术
可编辑ppt
1
实验目的
1、进行菊花的组织培养 2、尝试植物激素的应用
可编辑ppt
2
一、基础知识分析
（一）组织培养的生殖方式
通过必修课的学习，我们已经了解到大多 绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那么，有 没有不用种子来培育植物的方法呢？
扦插
营养繁殖
嫁接
无性繁殖
压条
组织培养
注意:配制培养基时，一定要注意调节pH。
可编辑ppt
8
MS培养基配制方法
可编辑ppt
9
你能说出各种营养物质的作用吗？同微生物 培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明 显的不同？
微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐； 蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压；甘氨酸、维 生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径 受到一定影响后所产生的特殊营养需求。
（三）是否进行了统计、对照与记录
做好统计和对照，填好结果记录表，培养严谨的科学 态度。从实验的第一步开始就要求做好实验记录，实验 小组配制不同培养基，如诱导愈伤或直接分化丛芽的培 养基，然后做不同配方的比较。
可编辑ppt
19
（四）生根苗的移栽是否合格
生根苗移栽技术的关键是既要充分清洗根系表面 的培养基，又不能伤及根系。一般使用无土栽培的 办法。培养基质要提前消毒，可以向培养基质喷洒 质量分数为5%的高锰酸钾，并用塑料薄膜覆盖12 h。 掀开塑料薄膜后24 h才能移栽。新移栽的组培苗要 在温室过渡几天，等壮苗后再定植大田或进行盆栽。 学生可以在课后统计自己移栽的成活率，看看移栽 是否合格。
注意：对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药 剂的消毒效果；另一方面还要考虑植物材料的耐受能力。
不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待。
可编辑ppt
13
（三）切段后接种
1、先用肥皂洗手， 穿上工作服，戴上口罩 和工作帽。
2、放入培养瓶和灭 菌后的接种用具(镊子、 解剖刀、接种针)，把镊 子、解剖刀、接种针插 入 内 盛 70% 酒 精 的 广 口 瓶中。
（六）栽培
转移至土中培养 （定植）
可编辑ppt
17
三、结果分析与评价
（一）对接种操作中污染情况的分析
接种3～4 d后，在接种操作中被杂菌污染的培养 物会表现出被污染的现象。请学生适时统计污染率， 分析接种操作是否符合无菌要求。
可编辑ppt
18
Байду номын сангаас
（二）是否完成了对植物组织的脱分化和再分化
观察实验结果，看看是否培养出了愈伤组织，记 录多长时间长出愈伤组织。统计更换培养基后愈伤 组织进一步分化成根和芽的比例和时间。