此液10ml
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3.铁盐母液的配制
铁盐如果用柠檬酸铁，则和大量元素一起 配成母液即可。
但目前常用的铁盐是硫酸亚铁和乙二胺四 乙酸二钠的螯合物，必须单独配成母液。 这种螯合物使用起来方便，比较稳定，且 不易发生沉淀。
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这种母液的配制方法是： 用电子天3g乙二胺四乙酸二钠
母液分装
按顺序混合 定容
保存于冰箱
3
实验方法及步骤
1.大量元素母液的配制 MS培养基中大量元素共有5种（表1），按照
培养基配方的用量，把各种化合物扩大5倍，用 电子天平，分别用50ml烧杯称量。并在每只烧 杯中加入30－40ml重蒸馏水溶解。溶解时，可 置于酒精灯上略加热或电炉上加速其溶解（但 要注意温度不可过高）。然后混合按表1顺序定 容于500ml重蒸馏水中。
（Na2-EDTA.2H2O），分别用约200ml蒸馏水
溶解，并分别加热煮沸，然后混和两种溶液继 续煮沸，冷却后定容至500ml，冰箱4℃低温 保存。配制培养基时，每配制1000ml培养基 取此液5ml。
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表3 MS培养基铁盐母液的称量及定容（100×）
FeSO4.7H2O Na2-EDTA.2H2O
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表4 MS培养基有机物成分的称量及定容（50×）
烟酸
0.5 25
盐酸吡哆醇(维生素B6) 0.5 25
盐酸硫胺素(维生素B1) 0.4 20
甘氨酸
2.0 100
定容于500ml重蒸馏水中，每升培养基取
此液10ml
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由于肌醇用量较大，在配制培养 基时单独直接称量加入
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消毒剂： 200ml×2 3ml/100ml的次氯酸钠（15－25min）
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表5 激素母液相应的有机溶剂
激素名称
有机溶剂
2,4—D
95％酒精
萘乙酸（NAA） 95％酒精或1 N NaOH
吲哚丁酸（IBA） 95％酒精或1 N NaOH
吲哚乙酸（IAA） 95％酒精或1 N NaOH
6-BA
1 N HCl 或1 N NaOH
激动素（KT） 1 N HCl 或1 N NaOH 玉米素（ZT） 95％酒精
25 ml。
(5)用封口膜封好，写明培养基代号，扎好线绳。
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培养基配制
移母液
定容
确定配方
培养基熬制
调pH值
称取蔗糖、琼脂
二次定容
接种
灭菌
扎口
分装
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母液吸取量的计算
公式1：
配制培养基的升数
赤霉素（GA3） 95％酒精
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实验二 培养基制备与灭菌
实验方法及步骤
1.培养基配制 每组配制培养基1000 ml。
(1)每组取烧杯一只，分别量取大量元素、微量元素、铁盐、有机物 质成分置于烧杯中备用（注意：移液管不能混用）。
(2)每组取1000 ml白瓷缸一只，用量筒取1000 ml蒸馏水倒入白瓷 缸中。划好液位线，再将蒸馏水倒出一半。称琼脂5g左右倒入 白瓷缸中，再称蔗糖25g备用。将加入琼脂的白瓷缸放在电磁炉
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表1 MS培养基大量元素的称量及定容（5×）
KNO3
1900 9500
NH4NO3 KH2PO3 MgSO4.7H2O CaCl2.2H2O
1650 170 370 440
8250 850 1850 2200
定容于500ml重蒸馏水中，最后加入
CaCl2.2H2O，每升培养基取此液100ml
5
在混合定容时，必须最后加入氯化钙， 因为氯化钙易与磷酸二氢钾形成磷酸三钙、 磷酸钙之类不溶于水的沉淀。
27.8 2780 37.3 3730
定容于500ml重蒸馏水中，每升培养基取
此液5ml
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4.有机物成分的配制
在MS培养基配方中，有机物成分有维生素 和氨基酸（表4），由于用量小，也应配成母 液。按培养基配方用量的50倍，用感量为 0.0001g的电子分析天平分别称取后放入 100ml的烧杯中，加重蒸馏水或蒸馏水约80 ml溶解，然后混合定容于500ml容量瓶中， 转移到储液瓶中保存于4℃冰箱。配制培养基 时，每配制1000ml培养基取此液10ml。
酒精：200ml×2 75％左右（ 75 ml纯酒精＋ 25 ml水） （78.9 ml95%酒精＋ 21.1ml水）
无菌水： 一组两瓶
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5.植物生长调节剂的配制
激素的使用比较灵活，要根据培养的植物种 类和目的而定。
常用的激素如生长素和细胞分裂素配制成 母液使用起来方便、准确。一般激素母液的浓 度为0.2－20 mg/ml。配制前需先用相应的少 量有机溶剂进行溶解，然后再定容。贴好标签， 写明配制激素的浓度，存放于冰箱中。
上煮沸，煮时常用玻璃棒搅动，待琼脂溶化后加入混合液，将装
有混合液的烧杯用蒸馏水洗三次，倒入白瓷缸中，并加入蔗糖加 热片刻（注意不要煮沸），关闭电磁炉，加蒸馏水定容至液位线。
(3)用1N NaOH或1N HCL将pH值调至5.8-6.3。调时应用玻璃棒不 断搅动，并用pH值试纸测试pH值
(4)用玻璃漏斗，将1000ml培养基分注于20个锥形瓶中，每只约
植物组织培养实验实习
董雯 生物技术教研室
1
内容
1.实习实验 （1）培养基母液的配制（MS培养基） （2）培养基制备与灭菌 （3）初代培养（外植体接种） （4）继代培养 （5）生根培养 2.实习报告撰写
2
实验一 培养基母液的配制（MS培养基）
母液配制流程图
确定培养基
按照扩大倍 数称量
溶解
贴标签
将配好的混合液，倒入储液瓶中，贴 好标签保存于4℃冰箱中。配制培养基时， 每配1000ml培养基取此液100ml。
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2.微量元素母液的配制
微量元素母液按照培养基配方用量的50倍， 用感量为0.0001g的电子分析天平，分别称 取后各放入50-100ml的烧杯中，加蒸馏水约 50ml溶解，然后混合定容于500ml容量瓶中， 转移到储液瓶中，贴好标签保存于4℃冰箱。 配制培养基时，每配制1000ml培养基取此液 10ml。
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表2 MS培养基微量元素的称量及定容（50×）
MZCnunSSSOOO444...754HHH222OOO HNa3B2MOo3 O4.2H2O
22.3 8.6 0.025 6.2 0.25
1115 430 1.25 310 12.5
KI
0.83
41.5
CoCl2.6H2O
0.025 1.25
定容于500ml重蒸馏水中，每升培养基取