▪ 当实验涉及具有显著基因多态性的P450酶 （CYP2D6、2C9、2C19）时，要考虑药物在 不同代谢类型人群中可能存在的差异。
3.3 底物和作用药物的选择
①受试药物作为CYP酶的底物
▪
在研究受试药物的代谢可能受到抑制或诱导（即
作为底物）时，相互作用药物应首先选用所研究途径的
强抑制剂或诱导剂作为相互作用药物。
2.确认受试药物是否是代谢酶的抑制剂或诱导剂
• 酶抑制能力的评价
2.1
➢ 在确定药物是否会抑制某一特定 CYP 酶的体外试验中， 可将药物与该酶的探针底物共孵育
对于可逆性抑制剂，当抑制剂在酶活性位点的浓度接近或 超过Ki值时，就会产生明显的抑制作用。
[I]/Ki值预测体内相互作用是否存在
若[I]/Ki比值越大，相互作用的可能性越大。若[I]/Ki值大于 0.1, 则有可能存在相互作用，有必要作进一步的体内研究。
3.3 底物和作用药物的选择
②受试药物作为CYP酶的抑制剂或诱导剂
一般应选用敏感底物，以观察到受试药物最大的影响作用。 如①CYP3A：咪达唑仑；②CYP1A2：茶碱；③CYP2B6：安 非他酮；④CYP2C8：瑞格列奈；⑤CYP2C9：华法林；⑥ CYP2C19：奥美拉唑；⑦CYP2D6：地昔帕明。 a.如果最初阶段的研究表明受试药物可以抑制或诱导敏感 底物的代谢，可根据合并使用的可能性选取其他底物做进 一步研究； b.如果试验结果为阴性，则可推断受试药物对次敏感底物 的代谢没有影响。
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（优选）新药开发中药物相互作用研究终
➢ 目的：①判定试验性新药与其他药物之间是否 存在潜在的相互作用： ②若存在，是否表明要采取剂量调整、
额外的治疗监测、联用禁忌或者其他降低危险的 措施。
➢ 内容：①鉴别其主要消除路径； ②药物分布中酶和转运体的作用程度； ③描述药物-药物相互作用的机制。
▪ 例如，若受试药物被CYP3A代谢，则可选择酮康唑 和利福平分别作为抑制剂和诱导剂。如果试验结果是阴 性，则可认为对于这一代谢途径不存在具有临床重要性 的药物-药物相互作用；若结果为阳性，则需选用其他较 弱的抑制剂或诱导剂进一步研究。
▪ 若受试药物经具有多态性的酶代谢，则受试药物在 慢代谢型人群和快代谢型人群中药代动力学参数的对比 可以替代这一代谢途径的研究。
▪
3.底物和作用药物的选择
受试药物为CYP酶的抑制剂，可依据其对敏感底物 代谢的抑制程度进行分类。以CYP3A酶抑制剂为例： 如果受试药物使口服咪达唑仑或其他底物的AUC升 高大于等于5倍，则属强抑制剂；如果AUC升高在 2～5倍间，则为中等强度抑制剂；如果AUC升高在 1.25～2倍间,则为弱抑制剂。
③如果对联合用药方案中的两种药物彼此相互作用效应进 行评估，可以在两个独立试验进行，也可以在同一个试验中 进行，试验可设计为随机三阶段交叉、平行分组和同种序贯 交叉。
④当涉及共同抑制或诱导时，给药时间至关重要。例 如，如果受试药物为代谢酶和OATP（有机阴离子转运多 肽）共有底物，以利福平作（OATP抑制剂）为酶的诱导 剂时，受试药物和利福平同时给药可能会造成对诱导作 用的低估，因此推荐底物受试药物推迟给药，但推迟的 最佳时间需要试验确定。另外，在撤掉相互作用药物之 后，考察其对底物的影响作用也是很重要的。
⑤为避免试验中不确定因素对结果的影响，必须严 格控制饮食。
⑥在涉及到代谢酶的遗传药理学（基因多态性）的 不同基因亚型上的药物相互作用可能有所不同，应在适 当时机进行针对性研究。
3.2 实验群体
▪ 选择健康受试者，研究结果可以推论到患 者群体。
▪ 基于安全性考虑，有时不能采用健康受试 者进行试验。
▪ 当需要使用药效学终点时，需要采用受试 药物拟用患者进行试验。
2.确认受试药物是否是代谢酶的抑制剂或诱导剂
• 酶诱导能力的评价
2.2
体外诱导试验的模型--原代肝细胞。
在评价药物是否能诱导某一 P450酶时，需要阴性对 照和阳性对照。
▪阳性对照：使用有效的诱导剂（即浓度< 500μmol/L时， 能使催化活性增加2倍以上的诱导剂），可判断来源于不 同个体的肝细胞酶活性是否存在差异。
实验方法
%
▪ 试验药引起酶活性的改变与阳性对照相比≥40%时，可视 为酶诱导剂。
▪ EC50值：产生50%最大诱导作用时的有效药物浓度。
▪ 其他一些体外鉴定酶诱导作用的实验方法，如：用Western 免疫印迹法或免疫沉淀法来测定酶蛋白含量的变化，用 RT-PCR在mRNA水平测定酶含量的变化，或者进行受体基 因试验。但是这些试验只能提供支持性的资料，并不一定 能体现酶活性。
一般策略
体外研究
▪ 1.药物代谢酶的鉴别 ▪
重组P450酶
肝微粒体
肝Hale Waihona Puke 胞体外实验系统▪ 代谢酶介导的主要消除途径可依据决策树进行 确证和进一步研究。
▪ 但特定条件下代谢酶介导的次要消除途径也需 要进一步研究，在一些特殊群体中，这些酶会 产生重要影响
例如：①肾脏功能障碍的患者服用主要通过肾脏消 除的药物；②某酶的慢代谢型人服用由该酶代谢的药 物；③患者在同时服用介导次要消除途径的代谢酶的 强烈抑制剂。
设计方案时注意：
①如果实验需要达到稳态血药浓度而底物或作用药物 和（或）其代谢物的半衰期较长，此时可以给予负荷剂量以 迅速达到稳态，也可以考虑特殊的实验设计，比如选择同种 序贯交叉法或者平行设计法，而不是随机交叉法；
②对于一个快速可逆的抑制剂，其服用时间应该在测定当 天服用底物前或同时服用，这样才能增加其敏感性。
IC50：酶催化反应被抑制达到50%最大抑制作用时抑制剂的 浓度
对于机制性抑制剂，由于其抑制作用具有时间依 赖性，要在加入底物前，对抑制剂预孵育30min。
若产物生成率既有时间依赖性又有浓度依赖性， 则说明该抑制剂为机制性抑制剂。
若体外研究发现某抑制剂的抑制作用具有时间依 赖性，则需要进行进一步的体内研究。
3.体内研究
▪ 实验设计 ▪ 研究群体 ▪ 底物和作用药物的选择 ▪ 给药途径 ▪ 给药剂量 ▪ 研究终点 ▪ 统计方面的考虑
3.1 实验设计
根据试验目的，可采用以下几种设计方法：
▪ ①随机交叉法（如先服用S后服用S+I组和先服 用S+I后服用S组）； ▪ ②同种序贯交叉法 （总是先服用S后服用S+I, 或者相反）； ▪ ③平行设计（一组服用S，另一组服用S+I）。