******外周血游离核酸提取试剂盒
货号：LS-R-N-004-05-3-0
测试报告
测试人员：
测试时间：
一、主要内容：
测试广东南芯医疗外周血游离核酸提取试剂盒游离核酸提取得率和质量。

实验过程中使用的是两个样本。

对实验过程中的cfDNA纯化产物进行质控（浓度及4200目的条带）。

二、实验结论
1、Qubit测定1号样本、2号样本浓度均低于0.5ng/mL。

溶解体系为50μL，1号样本、2号样本均无法计算cfDNA的提取量。

2、4200检测：HSD1000，
1号样本在185bp处有主峰，2号样本在182bp处有主峰。

3、实验过程遇到的问题及解决方法
（1）问题：试剂盒说明书上适用于3mL的血浆，本次实验使用1mL血浆进行，并且蛋白酶K、BufferBEO用量根据倍数减少。

疑问： 1mL血浆的蛋白酶K用量为20uL，对裂解效果是否有影响？
建议联系该试剂盒技术支持进行咨询，关于提取条带中500bp以上条带的来源。

除上述问题外，其余实验步骤完全依照试剂盒要求进行。

三、实验结果
1、测试样本2个，实验步骤完全依照试剂盒要求进行，具体信息见下表：
样本名称样本编号cDNA浓度
李万才1＜0.5ng/mL
陈秀英2＜0.5ng/mL 4200检测图谱如下
1号样本的图谱：
2号样本的图谱：
结果分析：
Qubit测定1号样本、2号样本浓度均低于0.5ng/mL。

溶解体系为50μL，1号样本、2号样本均无法计算cfDNA的提取量。

1号样本在185bp处有主峰，2号样本在182bp处有主峰。

四、实验方案
cfDNA的提取：
1、实验前准备：往BufferBEE中加入异丙醇；往BufferBEZ1和Buffer BEZ2中加入无水乙醇；加入体积参照试剂瓶上的标签。

2、准备血浆样品：从-80℃冰箱中取出样品1号李万才和样品2号陈秀英，置于室温水槽中溶解。

3、选择10ml的离心管，依次加入20μLProteinase K、1mL血浆。

4、再加入0.8mL Buffer BEO，涡旋震荡混匀30s。

5、在60℃孵育30min。

6、向裂解物中加入1.8mL Buffer BEE，涡旋震荡混匀15-30s。

7、冰上孵育5min。

8、取出吸附柱，做好标志。

分多次将步骤7得到的裂解物加到吸附柱上，10000rpm，1min离心，去除废液。

直至裂解物完全过柱。

9、向吸附柱中加入600μL Buffer BEZ1，12000rpm离心1min，倒掉废液，将吸附柱放回收集管上。

10、向吸附柱中加入750μL Buffer BEZ2，12000rpm离心1min，倒掉废液，将吸附柱放回收集管上。

11、向吸附柱中加入750μL无水乙醇，12000rpm离心1min，倒掉废液，将吸附柱放回收集管上。

12、12000rpm离心2miin，以去除吸附柱中残余液体。

13、将吸附柱放入新的1.5mL离心管中，打开盖子，室温静置10min，以完全干燥膜。

14、往吸附柱膜中间加入20-100μL的Buffer BXH（65℃预热），室温静置2min。

15、12000rpm离心2min，洗脱核酸。