（4）具有与同源序列质粒进行重组的能力。
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四、酵母细胞的克隆载体
♪1、整合型载体（YIP）
♪ YIP型载体是由大肠杆菌质粒和酵母的 DNA片段构成的。这类载体在细菌中复 制、扩增，进入酵母后可整合表达。 YIP型载体的特点是转化率低(只有110转化子/微克DNA)，但转化子遗传性 稳定，多用于遗传分析工作。
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3.M13噬菌体载体的优点
与其它载体相比，M13载体具有两个十分有用 的优点：
①这类载体的基因组中有一条饰变的β-半乳糖苷酶 基因片段，其中插入了一段具有密集的多克隆位 点的序列。
②M13载体系列是应用基因工程技术成对地构建的， 可以有效地克隆双链DNA分子的每一条链。
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三、柯斯质粒载体
sup-细菌
尾部基因 （琥珀突变型）
组装尾部所需要的组分 “无头部”的提取物
转录复制 蛋白质合成
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组装头部所需要的组分 “无尾部”的提取物
温育 完整的噬菌体
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二、M13噬菌体载体
M13是丝状噬菌体，有长约 6500个核苷酸的闭环DNA基 因组。M13附着在大肠杆菌 的F性菌毛上，所以它们只 能感染雄性细菌。不过M13 噬菌体DNA亦可通过转染作 用导入雌性大肠杆菌细胞。
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2、复制型载体（YRP）
♪ YRP型载体是带有选择标记和复制子的酵母 的DNA片段插入到大肠杆菌质粒中构成的。 因为它同时含有大肠杆菌和酵母的自主复 制基因，所以能在两种细胞中存在和复制
♪ 可以在两种截然不同的生物细胞中复制的 载体称为穿梭载体，穿梭载体在基因工程 中广泛使用。
分子克隆常用载体
➢质粒载体 ➢噬菌体载体 ➢柯斯载体 ➢酵母细胞的克隆载体
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一、质粒载体
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理想的质粒载体必须具备的基本条件
♪ 1、具有复制起点 ♪ 2、具有抗菌素抗性基因 ♪ 3、具有若干限制酶单一识别位点 ♪ 4、具有较小的分子量和较多的拷贝数
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重要的大肠杆菌质粒载体
♪ pSC101质粒载体； ♪ ColE 1质粒载体； ♪ pBR322质粒载体； ♪ pUC质粒载体；
♪ T载体
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pUCm-T质粒 图谱
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pUCm-T载体序列
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二、噬菌体载体
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噬菌体的生命周期
♪ （1）溶菌生长周期噬菌体（烈性 噬菌体）
♪ （2）溶源生长周期噬菌体（温和 噬菌体）
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（1）烈性噬菌体的生活周期
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（2）温和噬菌体的生活周期
裂解循环
溶源态
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重要的噬菌体载体
一、λ噬菌体载体
（1）插入型载体：有单一酶切点,便于外源DNA插入
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（2）替换型载体，具有成对的克隆位点，在这两个位点之 间λ DNA区段可以被外源插入的 DNA片段所取代
1.柯斯载体的组成
由质粒和λ粘性末端 “尾巴”两部分组 成。
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2、Cosmid载体特点：
（1）具有λ噬菌体的特性（但因不含λ噬菌体的全部 必需基因，因此不能通过溶菌周期，无法形成子 代噬菌体颗粒）；
（2）具有质粒的特性（有质粒复制子及抗菌素基因 ）；
（3）具有高容量的克隆能力（本身仅5-7kb, 克隆极 限可达45kb左右）；
（4）可产生大量纯化的含外源片断的单链DNA分子 。
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2.M13载体筛选方法
插入→α-多肽→互补于受体细胞→半乳糖苷酶 无色噬菌斑←不分解X-gal(IPTG)
未插入→α-多肽→互补于受体细胞→半乳糖苷酶 蓝色色噬菌斑←分解X-gal(IPTG)
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13λ噬菌体载体是主要用于cDNA构建， 也经常用于外源目的基因的克隆。
注意：λ噬菌载体作为载体，其重组噬菌体 DNA大小只能： 36kb ~ 51kb。
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体外包装：λ噬菌体载体 + 尾部蛋白 + 头部蛋白
头部基因 （琥珀突变型）
转录复制 蛋白质合成
体外包装的重组DNA比 裸露的DNA导入受体细 胞的效率高100-10000倍
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1.M13噬菌体作为载体优越性
（1）单链DNA噬菌体的复制，是以双链环形的DNA为 媒介的，这种复制形式的DNA简称RFDNA。
（2）不论是RF DNA还是ss DNA，它们都能转染 感受态的大肠杆菌寄主细胞。
（3）单链DNA噬菌体颗粒的大小，是受其DNA的大小
制约的，因此不存在包装限制问题。
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