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肝癌中肝细胞生长因子受体的表达及意义

性质,以及钼靶对致密型乳腺,由于脂肪成分较厚,对腺体结构显示较差,造成钼靶诊断率降低,而超声对它具有较高的分辨率,能明显提高PCM 的诊断准确率。

MRI 由于软组织分辨率高,对乳腺内部结构分辨率高,脂液性物质是PCM 特征性表现[6],脂液性物质在T1WI 呈高信号,在T2WI 呈高信号,在STIR 脂肪抑制像上呈低信号,较具特征性。

而MRI 不足之处是对钙化显示不佳。

因此,在临床上,对PCM 钼靶征象不典型或鉴别困难时,利用超声及MRI 联合诊断,能明显提高诊断准确率,对诊断特别困难的病例,应行针吸细胞学检查。

3.4治疗目前手术切除病灶是唯一有效的治疗方法,而手术的选择应根据钼靶的表现,有时超声、MRI 及CT 也是一种补充,尤其是MRI 及MSCT [7]对分期有很大的帮助PCM 若能完全切除,基本不会复发[参考文献][1]罗志琴.浆细胞性乳腺炎钼靶X 线诊断(附15例分析)[J].放射学实践,2006,21(4):356-357.[2]周毅,马丽华,黄其敏.浆细胞性乳腺炎的X 线诊断分析[J].中国医学影像技术,2000,16(3):216-217.[3]闫少宁,平学军.浆细胞性乳腺炎的钼靶X 线表现[J].宁夏医学杂志,2007,29(8):706-707.[4]唐文,何山,郑轲,等.浆细胞性乳腺炎的临床研究[J].中华实用诊断与治疗杂志,2008,22(11):810-811.[5]张梅,杨斌,李萍.高频超声联合钼靶X 线诊断浆细胞性乳腺炎[J].医学研究生报,2011,24(4):390-394.[6]谭文莉,陆孟莹,黄学菁,等.MRI 在浆细胞性乳腺炎分期中价值[J].临床放射学杂志,2011,30(4):492-495.[7]马海峰,王嵩,王夕富,等.浆细胞性乳腺炎MSCT 细化分型在临床治疗计划中的应用[J].上海医学影像,2009,18(4):280-282.[收稿日期]2011-09-26*[作者简介]黄海静,女,汉族,生于1982年4月,江苏省南通市人,检验师,研究方向:临床检验学。

南通大学学报(医学版)Journal of Nantong University (Medical Sciences)2012∶32(1)C-Met 蛋白是一分子质量为190ku 的异二聚体,由细胞外50ku 的α亚基和跨膜的145ku β亚基通过二硫键连接而成。

C-Met 受体包括3个功能不同的结构域,即胞外区、跨膜区和胞内区。

α亚基肝癌中肝细胞生长因子受体的表达及意义黄海静1*,吴月平2,蔡卫华2(江苏省南通市第三人民医院1检验科,2肝胆外科,南通226006)[摘要]目的:研究肝细胞生长因子受体(c-Met)在肝癌患者组织及血浆中的表达,探讨c-Met 在肝癌发生、发展所起的作用。

方法:对肝癌及慢性肝炎患者进行调查,并且设立正常对照组,应用酶联免疫吸附法检测各组血浆c-Met 水平;应用半定量RT-PCR 法和免疫组织化学法分别检测各组肝组织中的c-Met mRNA 及c-Met 蛋白的表达。

结果:肝癌患者血浆中的c-Met 水平明显高于慢性肝炎患者和正常人群(均P <0.05)。

肝癌组织中的c-Met 水平明显高于慢性肝炎组织和正常肝组织(均P <0.05)。

结论:c-Met 在肝癌组织及血浆中呈高表达,可能与肝癌的发生、发展有关。

[关键词]肝癌;肝细胞生长因子受体;酶联免疫吸附法;逆转录多聚酶链式反应;免疫组织化学[中图分类号]R735.7[文献标志码]A [文章编号]1674-7887(2012)01-0035-03The study for the expression of hepatocyte growth factor receptor in the serum and tissuesin patients with hepatic carcinomaHUANG Haijing 1*,WU Yueping 1,CAI Weihua 2(1Department of Clinical Laboratory ,2Department of HepatobiliarySurgery ,the Third Hospital of Nantong ,Nantong 226006)[Abstract]Objective :To study the expression of hepatocyte growth factor receptor(c-Met)in the serum and tissues in pa -tients with hepatic carcinoma ,explore the role of c-Met in the tumorigenesis and progression of human hepatic carcinoma.Methods :Study the patients with hepatic carcinoma or hepatitis ,and establish normal control group ,measure the plasma c-Met concentrations in them by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).The expression of c-Met mRNA and protein were detected in liver tissue of them by using semi-quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR)and immunohistochemistry respectively.Results :The plasma c-Met concentrations in patients with hepatic carcinoma was high -er than those in hepatitis and normal control group(P <0.05).The expression level of c-Met in hepatic carcinoma was higher than those in hepatitis and normal hepatic tissue(P <0.05).Conclusion :The expression of c-Met in the serum and tissues in pationts with hepatic carcinoma was high ,c-Met may be involved in the tumorigenesis and progression of hepatic carcinoma.[Key words]hepatic carcinoma ;hepatocyte growth factor receptor ;enzyme-linked immunosorbent assay ;reverse transcrip -tion-polymerase chain reaction ;immunohistochemistry35··南通大学学报(医学版)2012∶32(1)和β亚基的胞外区作为配体识别部位识别并结合肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF),而胞内区具有酪氨酸激酶活性。

HGF与c-Met结合后使酪氨酸激酶活化,导致受体发生自身磷酸化,从而产生多种生物学效应[1-2],促进细胞的运动,促进细胞间的黏附作用,促进新生血管的形成。

大量的实验研究[3-4]表明,HGF/c-Met的表达与人类多种肿瘤的发生、发展及预后有关。

1材料和方法1.1组织标本收集2007年7月-2010年6月南通市第三人民医院肝胆外科收治的肝癌40例,其中男20例,女20例,年龄30~36岁,平均49岁;南通市第三人民医院传染科肝活检标本38例;正常对照组标本15例。

所有组织立即送检验科-80℃保存。

40例肝癌病例均经过病理证实。

38例肝活检标本均经过病理证实为慢性肝炎,15例正常对照组标本为肝良性肿瘤切除时为暴露肿瘤而切除的正常肝组织。

1.2血液标本收集上述40例肝癌患者静脉血;南通市第三人民医院传染科50例慢性肝炎患者静脉血,其中男25例,女25例,年龄20~60岁,平均41岁;50例健康体检者静脉血,其中男25例,年龄20~60岁,女25例,平均45岁,作为正常对照组(每例各收集10mL)。

1.3主要实验试剂检测人血清c-Met浓度的ELISA试剂盒购自上海晶美生物工程有限公司。

总RNA提取试剂盒(Tiangen公司),Bu-Script RT KIT (Biouniquer公司),BU-Tap2×Master PCR Mix(Bi-ouniquer公司),兔抗人C-MET多克隆抗体(Santa Cruz公司)。

1.4引物RT-PCR引物由上海英骏生物技术有限公司合成提供。

C-Met引物序列如下:引物1:5’-TGTGCGTTC CCCATCAAATATGT-3’,引物2:5’-GTCCCAGCCA-CATATGGTCA-3’,引物3:5’-GAAGTCATAGGAA-GAGGGCATT-3’;内参照物β-actin引物:5’primer: 5’-CTCCGCAGGGTGTGATGGTG-3’,3’primer:5’-AGAAGGGCGTGCTGAGAAGTTGA-3’。

C-Met及β-actin引物扩增产物长为674bp及307bp。

1.5应用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测按照说明书配制不同浓度的标准样品、c-Met酶标单克隆抗体工作液。

分别将标本和不同浓度的标准样品按照顺序加入反应孔,室温孵化2h。

抽吸后洗涤,加入c-Met酶标单克隆抗体,室温孵化2h。

抽吸洗涤,加入显色液,避光、室温孵化30min。

测OD值,c-Met浓度与OD450成正比,绘制标准曲线求出标本中的c-Met浓度。

1.6RT-PCR总RNA的提取用总RNA提取试剂盒对肝癌组、慢性肝炎组及正常对照组分别进行总RNA的提取。

把提取的RNA逆转录合成cDNA。

以cDNA为模板进行PCR扩增反应。

聚合酶链式反应:在PCR专用Ep管中依次加入下列试剂:DNA模板、2×Tap Master Mix、引物1(10μM)、引物3(10μM)、ddH2O。

将上述混合液置PCR仪(PTC-200型)上,在93℃预变性5min,进入循环扩增阶段:94℃30s→55℃30s→72℃30s,循环30次,再以第1次PCR 产物为模板,用引物1,引物2进行第2次多聚酶链式反应:94℃30s→55℃30s→72℃30s,循环30次,PCR产物电泳检测,紫外灯下观察并记录结果。

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