用 Ｔ ｙｂ Ｎ ｏｏｏＤ Ａ抽 提试 剂盒抽 提 经消 化 的组织 。离 心分 离 ， 室
基金项 目： 吉林省科技厅资助课题 （０ ６ ７ ９ ２００ １）
．
通讯作者 ： 刘
伟 （９ ９ ） 男 ， １６ ． ， 博士 ， 副教授 ， 主要从 事胸外科 临床 的研
究。
变为 Ｇ ２ Ｓ ７４ 。外显子 １ ９和外显子 ２ １同时 Ｅ Ｆ Ｇ Ｒ基 因突变 ４例
腺 癌 的 石 蜡 包 埋 组 织 标 本 １３例 ， 中男 ： ＝７ ： １ Ｎ 分 ３ 其 女 ２ ６ 。Ｔ Ｍ 期 （Ｉ一Ⅳ ） Ｉ期 （ Ｎ Ｍ。 ５ ： Ｔ ２ 。 ） ５例 ，Ｉ （ Ｎ Ｍ。１ Ｍ。 Ｉ期 Ｔ。 ， ３ ｒ ）
例； 外显子 ２ ０检测 到 Ｅ Ｆ Ｇ Ｒ基 因 突变 ２例 ； 外显 子 ２ １检 测到 ＥＦ Ｇ Ｒ基 因突变 ８例 ； 显子 １ 外 ９和外显子 ２ １同时 Ｅ Ｆ Ｇ Ｒ基 因 突变 ４例 ， 外显子 １ ９同时 ２处 Ｅ Ｆ Ｇ Ｒ基 因突变 的 ２例 。在外显 子１ ９所检测到 ３ ２例 Ｅ Ｆ Ｇ Ｒ基 因突变 中共有 ９种 不同的突变形
中在 １ ９外显子的缺失和第 ２ １外显 子的 Ｌ５ Ｒ点突变 ， ８８ 与文 献 报道相似 。 实验证实有功能的突变 Ｅ Ｆ Ｇ Ｒ是一种糖 蛋白的跨膜受体 ，
是 酪 氨 酸 激 酶 生 长 因 子 受 体 家 族 的 成 员 。 一 旦 Ｅ Ｆ 胞 外 部 ＧＲ
分 与配体相结合 ， 就会在细胞表面形成受体 同源 二聚体 或异源 二 聚体 。Ｅ Ｆ Ｇ Ｒ最常见 的异 源二聚体化 类型是 Ｈ ｒ 。该 二聚 ｅ－ ２
式 ， 常 见 核 苷 酸 缺 失 起 始 位 为 ２２ ５ ２ 最 ３ （３例 ） ２２ ８ ８例 ） 和 ３ （ ， 而 核 苷 酸 缺 失 终 止 位 为 ２２ ９ ２ ４ （ ７例 ） 。在 外 显 子 ２ 所 检 测 到 ｌ １ ２例 Ｅ Ｆ Ｇ Ｒ基 因 突 变 中 ， 位 点 为 ２５ ３位 的 Ｔ 由 Ｇ取 代 ， 其 ７ 导
终 达 到 抑 制 肿 瘤 增 殖 、 移 、 管 生 成 等 一 系 列 肿 瘤 细 胞 生 物 转 血
脂糖 电泳 ， 检验 Ｄ Ａ 质量 。Ｐ Ｒ方 法扩 增 Ｅ Ｆ Ｎ Ｃ Ｇ Ｒ基 因外显 子
１ 、９ ２ ８ １ 、Ｏ和 ２ ， 物 序 列 分 别 为 １ 上 游 ：ｇｇ ｇａｃｇｅｔ １引 ８ ｇｅ ｇａａ ａａａ ￣ — ａａ ， 游 ：ｇａｔｃｃａｅｅ ａ ；９ 上 游 ：ｔ ｇ ｇｇｅａｃｇ 下 ｇａ 下 ｔ ｇｔ ｃａａａｔ ｇ １ ｇ ｔ ｃ ａｔ ｔ ａｃｅａａ ， ｅｇ 游 ：ｃａｔａ ｇｅｇｔｅ２ ｇｃｇａｔｅｔｔｅ ；０上游 ：ｔ ｃｃｅ ｃｔｇｃ ，０下 游 ：ａ ｔ ｔ ｃｃ ｃａｔ ａ ｔ ａ２ ｔ ｇ ｅｔ ｇｔ — ｇｇｃｇｃｅｇｔ； １ 上 游 ： ｔａｅｇｇｇ ａａｅ， １ 下 游 ： ａ— ｇａａｇａｔａ ２ ｔ ｇｃｇａｅｇｔ ｃｔｔ ２ ｔ ａｇ
探讨原发性肺腺癌： 表皮生长 因子受体 （ Ｇ Ｒ） Ｅ Ｆ 基因突变特点 ， 及其 与临床特征 （ 性别 、 临床 分期 、 吸烟情况 ） 的关系 。方法 １３例 ３ 使用 Ｅ Ｆ Ｇ Ｒ酪 氨酸激酶抑制剂 治
采用 Ｐ Ｒ扩增 和基 因测序 ， 测 １３例原发性肺腺癌 Ｅ Ｆ Ｃ 检 ３ Ｇ Ｒ外显子 １ ，９，０和 ２ ８１ ２ １的突变情况 ， 同时分析其 突变与临床特 征的关系 。结 果 中检测到 Ｅ Ｆ Ｇ Ｒ基因突变 ５ ０例 （ ７６ ，０ １３ Ｅ Ｆ ３ ． ％ ５／ ３ ），Ｇ Ｒ基因突变与性别和吸烟史相关 ， 与临床分 期无关 。结论
Байду номын сангаас
后ＥＦ Ｇ Ｒ变异体 的磷酸化程度更高 ， 持续 时间更长。Ｐｅ 等 ａｚ
发 现 携 带 Ｌ ５ Ｒ 的 Ｈ ２ Ｓ细 胞 对 ｇｆｉ ｂ的敏 感 性 比 野 生 型 ８８ ３５ ｅｔ ｉ ｉｎ 细 胞 高 ｌ０倍 ；ｅ ｔ ｉ 但 抑 制 Ｅ Ｆ 自我 磷 酸 化 ， 抑 制 ０ ｇｆｉ ｂ不 ｉｎ ＧＲ 还 ＥＦ Ｇ Ｒ下 游 分 子 Ｅ Ｋ ／ Ｒ １２和 Ａ Ｔ激 酶 的 磷 酸 化 。Ｅ Ｆ Ｋ Ｇ Ｒ基 因共
１ 材 料 与 方 法
１３ 统计学方法 ．
２ 结 果
Ｓ Ｓ １． Ｐ Ｓ ３０软件进行 检 验。
２１ Ｅ Ｆ ． Ｇ Ｒ基 因突变 特点 １１ 材 料 ． 收集吉林大学第一 医院Ｎ ￣ 科手术切 除原发性 肺 Ｊ ，ｂ
在 １３例 肺癌标 本 中 ， ３ 共检 测到
Ｅ Ｆ 基 因突变 ５ ＧＲ ０例 （ ７ ６ ，０ １３ 。 其 中 外 显 子 １ 测 ３ ．％ ５／３ ） ８检 到Ｅ Ｆ Ｇ Ｒ基 因 突 变 ２例 ； 显 子 １ 检 测 到 Ｅ Ｆ 外 ９ Ｇ Ｒ基 因 突 变 ３ ２
２ ８个外显子 ． 中编码 酪氨酸激 酶区 的是 第 １ 其 ８～２ １外显子 。
表 １ Ｅ Ｒ 基 因 突 变 特 点 ＧＦ
对ＥＦ Ｇ Ｒ基 因突变的数据分析表明 ， 管突变部位分散在整个 尽 酪氨酸激酶编码区 ， ８ ％ 的突变集 中在第 ｌ 但 ９ ９外显 子 的缺 失
和 第 ２ 外 显 子 的 Ｌ ５ Ｒ点 突 变 。 本 次实 验 中突 变 也 主 要 集 ｌ ８８
体化改变 受体 的构象 ， 导致受体胞 内结构 的特定 酪氨酸残基
自身磷酸化 ， 活其 下 游信 号 途径 ， 激 将外 界 信 号转 导 至细 胞
内 ， 种 变 异 的基 因被 转 染 到 细 胞 后 ， 高 了 细 胞 对 Ｅ Ｆ的 这 提 Ｇ
分 散 开 ； 管 于 磁 性 台 架 ３ 使 磁 珠 聚 集 ， 除 上 清 液 ， 入 置 ０Ｓ 去 加
变， 通过信号 转导控制肿瘤生长 ， 并与新 生血管生 成 、 肿瘤 的侵
袭和转移等有 密切 的关 系 Ｊ 已知 Ｅ Ｆ 。 Ｇ Ｒ的 突变是 治疗 非 小
细 胞 肺 癌 的 重 要 因素 ， 多 医 药 公 司 研 究 出 了 Ｅ Ｆ 酪 氨 酸 激 很 ＧＲ 酶 抑 制 剂 （ｙ ｓ ｅｋｎｓ ｎｉｉ ｒ， Ｋ ） 药 物 ， ｇｆｉｉ ｔｒ ｉ ｉａｅｉｈｂｔ ｓＴ Ｉ 的 ｏｎ ｏ 以 ｅｔ ｂ和 ｉｎ
温， 吸上清约 １０ Ｉ 转入新 Ｅ ｐｎ ｏ ０ ｌ ｘ ｐ ｅｄ ｒ 中。样 品上清液 中加 ｆ管 入 ７ ０ｔ 溶解吸 附液 ，０ 磁珠 ， 涡混合 器震 动 １ ｉ ， ５ ｌ ｘ ４ ｌ 旋 ０ｍ ｎ 置 管于磁性 台架 ３ ｓ使磁珠聚集然后去 除上 清液 ，ｐ ｅｄ ｒ管 中 ０ Ｅ ｐｎ ｏ ｆ 添加 ９０ ｔ 洗净液 ， ０ ｌ ｘ 使用旋涡混合器剧烈震荡 ５Ｓ使磁珠均匀 ，
１０Ｉ 灭菌水 ， 涡混合 器剧烈震荡 １ ｉ ； ０ ｌ ｘ 旋 ０ｍ ｎ 聚集 磁珠 ， 后将 然
含 有 Ｄ Ａ 的上 清 液 回 收 至 新 的 １５ ｌ ｐ ｅｄ ｆ管 中 ；． ％ 琼 Ｎ ． ｍ ｐｎ ｏ Ｅ ０８
ｅｏｎ ｒ ｔｉ ｌ ｉ ｂ为代表 ， 在非小细胞肺癌 ， 特别 是在肺腺 癌 的治疗 中显 示 出很好 的抗肿瘤 的疗 效 。Ｅ Ｆ Ｇ Ｒ的基 因突 变作为使 用 药 物是 否有效的一个 重要 因素。直到 最近 的研究 发现 ， Ｇ Ｒ的 Ｅ Ｆ 基 因突变 仍存 在于外显子 １ ２ ， 同外显子 的突变将导致构 ８～ １ 不 象变化 ， 变 和 增 强 蛋 白 的 活 性 ， 改 同样 增 强 对 Ｔ Ｉ的 敏 感 Ｋ 性 －３ Ｋ 通过与 Ａ Ｐ竞 争结合 Ｅ Ｆ ６。Ｔ Ｉ Ｔ Ｇ Ｒ胞 内酪氨酸 激酶 区 ， 阻止酪氨 酸残 基磷 酸化 ， 而 阻止 Ｅ Ｆ 从 Ｇ Ｒ信 号 通路 的传 导 ， 最
尹 光 浩 等 中 国人 原 发 性 肺 腺 癌 Ｅ Ｆ Ｇ Ｒ基 因 突 变 分 析
第 ４期
中 国人 原 发 性 肺腺 癌 Ｅ Ｆ Ｇ Ｒ基 因突变 分 析
尹光 浩
［ 摘
刘 伟 吴 勇 刘 国津 （ 吉林 大 学 第一 医院胸 外科 ， 吉林
要 ］ 目的
长春
１０ ２ ） ３ ０ １
将 组 织 切 片 放 入 １５ｍｌ Ｅ ｐｎ ｏｆ 中 ； 入 １ｍｌ 甲 苯 ， ． 的 ｐｅ ｄｒ 管 加 二 微 微 摇 动 ， 液 ３次 ， 时 间 约 １ ； 不 同 浓 度 乙 醇 梯 度 水 换 总 ２ｈ 用
化， 离心 ， Ｔ 用 Ｅ浸 洗 １次 ，０ｍｉ， ３ ｎ 离心 弃 上清 。一 次加 入 Ｔ Ｅ
代 的为 ｌ例 ， 导致第 ８ １ ６ 位框 架氨 基酸变 为 Ｌ ６ Ｑ。在外显 子 ８１ ２ ０所 检测 到 ２例 Ｅ Ｆ Ｇ Ｒ基 因突变位 点为 ２３ １位 的 Ｇ由 Ａ取 ６ 代， 导致第 ７ ７位框 架 氨基酸 变 为 Ｑ ８ Ｑ ８ ７ ７ 。外显 子 １ ８检 测 到 的 ２例均为 ２１０位 的 Ｇ被 Ａ取代 ， 得第 ７４位框架 氨基酸 ７ 使 ２
ｃｇｔ ｇｃ ａａｔ ａｃ ｔ ｔ ｃｃ。具体操作方法按 照试剂盒 （ ａａａ 说明书进 ｃｇ ｃ Ｔ ｋｒ）
行 。最 后 在 Ａ Ｉ７ ０测 序 仪 上 机 测 序 。 Ｂ３ ３
活动 。本研究通过 检测肺腺癌患 者 Ｅ Ｆ Ｇ Ｒ的突 变情况 ， 以及与 临床特征之 间的关 系 ， 为筛选最 合适的病人 进行有 针对性 的靶 向治疗提供依据 ， 以避免不合理 用药。
２ ０Ｉ ，０ Ｓ Ｓ２ ｌ蛋 白酶 Ｋ（０ｍ ／ １３ ｌ３ ℃ 过 夜 ； ０ ｌ１％ Ｄ ０Ｉ ， ｘ ｘ １ ｇ ｍ ） ，７ 使
致 ＥＦ Ｇ Ｒ第 ８ ８位 框架 氨 基 酸 由亮 氨 酸变 为精 氨 酸 （ Ｔ — ５ ｃＧ
Ｃ Ｇ，８ ８ 的为 １ 例 ， ８ １外显子的 ２８ ８位 点 Ｔ由 Ａ取 Ｇ Ｌ ５ Ｒ） １ 第 ６ ２
基础研究。
４４ ４
中 国 老 年学 杂 志 ２ ０ ０ ９年 ２月第 ２ ９卷