现代生物技术包括四个方面：
（1）基因工程：生物遗传物质——核酸的分离、提取、 体外剪切、拼接重组以及扩增与表达等技术。
（2）细胞工程：细胞（也包括器官或组织）的离体培 养、繁殖、再生、融合及细胞核、细胞质及染色体与 细胞器（如线粒体、叶绿体等）的移植与改建等操作 技术。
（3）酶工程：利用酶，借助固定化、生物反应器和生 物传感器等新技术、新装置，高效优质地生产特定产 品的技术。
第三章
细胞工程技术概念
细胞 : 生物有机体形态结构和生命活动的基本单 位。
细胞工程：以细胞作为研究对象，运用细胞生物学、 分子生物学等学科的原理与方法，按照人们的意志设 计改造细胞的某些遗传性状，培育出新的生物改良品 种或通过细胞培养获得自然界中难以获得的珍贵产品 的新兴生物技术 细胞培养、细胞融合、细胞重组和遗传物质转移等
三、现代生物技术在医药领域的应用
（—）在疾病诊断与治疗中的应用
1. 单克隆抗体与疾病诊断
妊娠试验
已有几十种。
FDA批准上市的McAb产品 2. “生物导弹”
McAb接抗癌药物 →体内McAb只与该肿瘤细胞特异 性结合→抗癌药物专一、靶向到肿瘤细胞 小鼠的免疫球蛋白 McAb免疫球蛋白分子中含有人免疫球蛋白分子片段
血清在培养液中的主要作用：提供
①维持细胞生长所需的激素和生长因子 胰岛素、生长激素、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子 ②细胞贴壁或铺展所需的细胞因子， 纤维粘连素、铺展因子、胎球蛋白等；
水解乳蛋白 胶原
乳白蛋白的水解产物
动物真皮（豚鼠、牛）或大鼠尾腱来源的组织提取
物
胚胎浸液 鸡胚和牛胚
2. 合成培养基
根据天然培养基的成分，人工设计模拟合成 特点： 一定化学组成 主要组分：氨基酸、维生素、糖、无机盐、 其他一些辅助因子。 RPMI-1640、DMEM、TC199、Eagle’s MEM等。 只能维持细胞的生存(基础培养基) 须补充部分天然培养基， 血清 一般为10％～20%。
（4）发酵工程（微生物工程）：给微生物提供最适宜 的发酵条件以生产特定产品的技术。
生物技术的依据和出发点：生物有机体的种种机 能，是生物在生长、发育与繁殖过程中进行物质合成、 降解和转化的能力（即利用其新陈代谢的能力）， 反应器、代谢反应、酶、特定的遗传基因 核心基础：基因工程和细胞工程“工程菌株”或 “工程细胞株” 使酶工程或发酵工程生产出更多、 更好的产品，发挥出更大的经济效益。 酶工程和发酵工程 现代生物技术产业化，特别是 发展大规模生产的最关键环节。
第一节 细胞培养技术
细胞培养： 生物体内某一块组织，用酶消化法分散成 单个细胞，接种至特定的培养容器中并给予必要的生 长条件，使其在体外生长繁殖的技术。
细胞生长所需的培养条件： 1. 足够的营养，
糖、氨基酸、维生素、无机盐等；
2. 生长环境，合适的温度、pH值、无菌条件。
一、动物细胞培养
动物细胞的培养： 先在无菌条件下用消化酶将组织
3）生产的生物药物可综合利用
代谢物和菌丝体;诱变选育良种;加入前体培养法
Hale Waihona Puke 4）体内酶的转化作用，使复杂、难反应能专一、迅速
3. 植物来源
植物中的蛋白质、多糖、脂类、核酸等
生物大分子的研究和利用 4. 化学合成 氨基酸、多肽、核酸降解物及其衍生物、维 生素、激素 结构改造以高效，长效和高专一性
5. 现代生物技术产品
预防
诊断 疾病的制品
治疗
二、分类
（一）按来源和制造方法
1. 动物来源 动物脏器 资源丰富
家畜： 猪、马、牛、羊
家禽： 鸡、鸭
海洋生物：海带、鲨鱼、海蛇
2. 微生物来源 优点：
发酵法
1）微生物及其代谢物资源丰富、开发潜力大
2）培养、繁殖快、产量高、成本低，
便于大规模工业生产，
不受原料、运输、保存、季节和资源供应影响
7. 重组疫苗与单抗制品： 重组乙肝表面抗原疫苗（酵母）、乙肝基因疫苗 （重组乙肝表面抗原疫苗、CHO细胞）、艾滋病疫苗和 肿瘤疫苗等。 己开发的 McAb有 72种，多用于治疗难治性疾病如 预防移植物急性排斥、免疫性疾病和肿瘤等。
8. 基因药物：
应用于基因治疗目的的DNA片段重组药物。 基因治疗: 将外源基因导入机体以达到治疗疾病目的。 遗传性疾病、肿瘤、艾滋病、囊性纤维变性、糖 尿病和心血管病等。
分散成单个细胞，用培养基制成细胞悬液，使其在体 外合适的条件下生长繁殖的技术。 细胞培养的对象 组织培养的对象 器官培养的对象 单个的细胞， 组织块（0.5～1mm）， 器官的一部分或整个器官。
（－）动物细胞培养特征
动物细胞分类： 贴壁依赖性细胞 贴壁 大多数动物细胞
非贴壁依赖性细胞 悬浮 血液淋巴细胞、肿瘤细胞、 杂交瘤细胞、转化细胞系 兼性贴壁细胞 附壁或悬浮
基因工程 7.5升大肠杆菌发酵 5mg , 成本几十美分。
（二）快速、精确
试剂盒
有效的早期诊断（ 遗传病、病毒引起的
疾病和癌症等）。
McAb检查妇女妊娠
比用抗血清法检查提高了灵敏度，怀孕后 8 天得知， 准确率100％
（三）低耗、高效
“酶”催化化学效应，无需高温、高压和强酸碱等 → 大大降低能耗的成本、能耗。 例：L-苹果酸生产（生物技术） 产氨短杆菌 →收集菌体→固定化细胞→ →L-苹果酸
将人免疫球蛋白重链C区基因转入小鼠受精卵，发 育成转基因小鼠，用特定抗原免疫 → 得人型化 McAb 。 3. 基因治疗 “基因打靶”技术
将外源基因定点整合到细胞基因组的某一确定位 点上，因而能对缺陷基因进行原位修复。
4.生物技术的各个环节 聚合酶链反应及其他不断涌现的分子生物学新技术 将得到广泛应用。
3. 基因诊断
核酸分子杂交技术
80年代中期 聚合酶链反应（polymerase chain reaction, PCR）体外扩增基因的方法
产前和症状前基因诊断:苯丙酮尿症、珠蛋白合成障碍性 贫血、假肥大型肌营养不良、甲型血友病、乙型血友病、 成年型多囊肾、慢性进行性舞蹈病等遗传病
4. 基因治疗 因单一结构基因即编码蛋白质的基因缺陷 所引起的遗传病。
2．传代培养（或继代培养，subculture）
将细胞悬液转接分装到≥两个瓶中培养
传代培养。
分裂次数：正常细胞有限 一 般 人 正 常 细 胞 可 传 代 50 ～ 60 次 有 限 细 胞 系 （finite cell line）， 传代过程中可无限制生长繁殖的细胞系 连续细胞 系（continuous cell line）或已确立的细胞系 肿瘤细胞
（三）动物细胞培养的营养条件
1. 培养基 1）天然培养基 成分复杂、来源有限
血清、水解乳蛋白、胶原、胚胎浸液等。
动物血清：
主含蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素、其他对维 持细胞生长繁殖和保持细胞生物学活性不可缺少的未 知因子，促进细胞贴壁、中和有毒物质以保护细胞。 缺点：来源困难，成分不确定，使得细胞生长过程不 易检测控制。
原理：延胡索酸→ L-苹果酸
成本比化学合成降低几十倍。 人生长激素（治疗侏儒病） 一个患者每年需用量 50个死人的垂体中提取
基因工程生产
价格为1／4提取，不需依赖死人脑。
（四）副产物少、不良反应小、安全性好
疫苗的生产
常规方法
用血液，成本高，可带来病毒感染的危险性。
现代生物技术
用大肠杆菌
如乙肝疫苗，凝血因子等→大大改进使用的安全性。
在细菌、酵母菌、昆虫细胞、哺乳动物细胞等不同的 细胞内能得到高效表达的载体
将不断地构建成功，大幅提高基因工程的生产效率。 生物技术后处理工程和蛋白质工程 将迅速发展有目的地修饰、改造乃至重新组建
第二章
第一节
一、概念
生物药物与生物技术 药物概述
生物药物(biopharmaceutics)
利用生物体及其成分 综合利用生物学、生物化学、微生物学、生物组织免 疫学、物理化学、药学原理、方法加工制造的
二、生物技术药物的主要类型
1. 细胞因子干扰素类：IFN-、 IFN-β和IFN-。 IFN-有 lb， 2a， 2b等 2. 细胞因子白介素类和肿瘤坏死因子类： IL-2和突变型白介素-2；TNF-和TNF受体。
3. 造血系统生长因子类：
粒细胞集落刺激因子（ G-CSF ）、巨噬细胞集落 刺激因子（ M-CSF ）、巨噬细胞粒细胞集落刺激因子 （ GM-CSF ）、红细胞生成素（ EPO ）、促血小板生 成素（TPO)、干细胞生长因子（SCF）等。
治疗 : 导入正常基因 →校正缺陷基因引起的 DNA代谢 异常及细胞突变→使之恢复正常功能。
（二）未来医药卫生领域中的生物技术展望
1. 转基因动物生产的“转基因药物” 1978年 把人tPA基因转入小鼠受精卵发育成转基因小鼠 并证明在其乳汁中能得到tPA 美国DNx公司的“制药工厂” 环球基因药物公司 基因酶公司 英国药物蛋白公司 转基因猪 转基因奶牛 转基因山羊 转基因绵羊
基因工程技术生产的
重组活性多肽
活性蛋白质类 基因工程疫苗 McAb 多种细胞生长因子
利用转基因动、植物生产的生物药物 利用蛋白质工程技术改造天然蛋白质 创造自然 界没有的而功能上更优良的蛋白质类生物药物
第二节
一、概念
生物技术药物
生物技术药物 （基因工程药物 ， Biotech Drugs ） : 以 DNA重组技术（包括基因工程技术、蛋白质工程技术） 生产的蛋白质、多肽、酶、激素、疫苗、单克隆抗体和 细胞生长因子类药物。
二、现代生物技术的优越性
（一）不可取代性
植物品种改良
杂交育种
生长、发育快，体重速
基因工程改良品种基因资源的来源可不受限制 牛(猪) 生长激素基因鱼 增
人血红蛋白基因 猪体内 生产人的血红蛋白，分离， 可作为人血液的替代物。 生长激素释放抑制因子（抑制生长激素不合时宜的 分泌， “肢端肥大症” 的特效药） 50万个羊脑 5mg样品，化学法 300多美元/5mg