《文件已阅声明表》《Procedure circulation form》文件名称: 神经元特异烯醇化酶检测作业指导书表号: KM-MP03•02•02《文件修改记录页》《Procedure amendment form》表号:KM-MP03.02.03《文件信息表》《Procedure information form》表号:KM-MP03•02•04神经元烯醇化酶（NSE）检测作业指导书（Standard operation procedure for analysis of NSE）1.原理（Test principle）:反应原理“三明治”法，总检测时间：18 分钟。
第一次孵育：20μl 标本和一份生物素抗NSE 特异性单克隆抗体一起孵育，一份钌复合体标记的NSE 特异性单克隆抗体后，反应形成一“三明治”样抗原－抗体复合体。
第二次孵育：加入链酶亲和素包被的微粒，复合体在链酶亲和素和生物素相互作用下形成固相。
将反应液吸入检测池中，检测池中的微粒通过电磁作用吸附在电极表面。
未结合的物质通过ProCell 除去。
在电极上加以一定的电压，使复合体化学发光，用光电倍增器检测发光的强度。
通过检测仪的定标曲线得到最后的检测结果，定标曲线是通过2 定标点和试剂条形码上获得的主曲线生成的。
2.样本收集和储存（Specimen Collection and Storage）:2.1样本收集（specimen collection）：类型（type）：血清（serum）；用量（volume）50μL，仪器加样量（sample volume ）20μL。
2.2拒收标本（specimen rejection）：EDTA抗凝血、严重脂血标本、接受过鼠单克隆抗体者、严重溶血（hemolysis）标本拒收2.3标本储存条件(sample storage conditions)：室温（room temperature）保存6小时； 2-8℃24小时； -20℃3个月；十五天后处理标本。
2.4其他（others）：为避免纤维蛋白对结果的影响，必须确定离心处理前样本已经完全充分凝集。
对于正在接受抗凝剂治疗的病人样本，需要延长凝集时间。
3.试剂(Reagent)：3.1Elecsys NSE 试剂盒, 产品目录号121331133.1.1试剂内组份：试剂包装，100个检测M 链酶亲和素包被的微粒（透明瓶盖）每瓶6.5ml 链酶亲和素包被的微粒：0.72mg/ml，结合力：470ng 生物素/mg 微粒，微粒经防腐处理。
R1 生物素化NSE 特异性抗体（灰色瓶盖）每瓶10ml。
生物素化单克隆抗NSE 抗体18E5 （小鼠）：2mg/L；磷酸盐缓冲液：100mmol/L，PH值7.4；经防腐处理。
R2 钌复合物标记的NSE 特异性抗体（黑色瓶盖）每瓶10ml。
钌复合物标记抗NSE 单克隆抗体（小鼠）：84B10 1.0mg/L；磷酸盐缓冲液：100mmol/L，PH 值7.2；经过防腐处理。
3.1.2未随试剂盒提供的组分Modular Analytics COBAS601 免疫分析仪所需材料:货号12135019190, ProCell M, 1 x 2 L 系统缓冲液货号12135027190, CleanCell M, 1 x 2 L检测池洗液货号03023141001, PC/CC杯, 50杯用于在测定前预热Procell M及Cleancell M。
货号03005712190,ProbeWash M, 12 x 70mL 清洗液，用于在检测完毕后或更换试剂时清洗系统。
货号12102137001,分析杯/分析吸头组合装 M, 48 分析杯x 84 反应管或加液器吸头,废物袋货号03023150001, WasteLiner,废物袋货号03027651001, SysClean 适配器 M货号11298500316, Elecsys SysClean, 5 x100 mL 系统清洗液3.2试剂准备(reagent preparation)：将试剂从冰箱中取出并平衡至室温；不同批号的试剂不能混用；新试剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用。
Put reagent from refrigeratory to room temperature for proper time；New reagent lots must be tested in parallel with old lots before or concurrently with being placed in service to ensure that the calibration of the new lot of reagent has maintain consistent results for patient specimens。
Record the results。
4.仪器（Instrument）：Elecsys Cobas 601要获得最佳的测定结果，请遵照本说明书中有关分析仪的相关指导，并参照分析仪特定检测的操作手册。
5.安全防范（Safety Precautions）：操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消毒擦洗；用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间；遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液清洗，擦拭用的物品应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。
6.校准（Calibration）：6.1校准品：Elecsys Cobas 601原装校准品。
要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存于2-8℃可稳定到有效期。
Stop using overdue calibration material 。
Use it within expiration date，storage in 2-8 ℃。
复溶：用复溶专用加样枪准确吸取4mL去离子水于瓶中，溶解静置30miu，混匀并用有盖小子弹头分装600μL/个，标明配制日期，校准品批号，配制人以及有效日期，Label confecting date ，calibration lot 。
person who confected，expiration date 。
于－20℃冻存备用。
－20℃ storage6.2当下列任何一种情况出现时，请重新校准：（If one of the two happened，recalibration）1.试剂批号改变（reasgent lot changes）2.同一批号的试剂盒在分析仪上使用超过1个月（28天）。
3.同一试剂盒在分析仪上使用超过7天4.根据质控需要进行校准（Recalibration based on quality control problem）6.3步骤：1)进入CALIBRATION，点击STATUS，选取相应的项目及所需的定标方式（BLANK、2POINTS或FULL、SPAN），点SAVE。
2)按在CALIBRATOR画面下设置好的标准物放置位置（可将带条码的定标瓶直接从低值到高值放到定标架上）装载好相应的定标液，点START，再点START按键，仪器开始定标。
3)看定标结果：进入CALIBRATION，点击STATUS，点击相应的项目，点CALIBRATIONRESULT，就可看到不同项目的定标结果。
7.操作过程：(Procedural Steps)7.1 将从标本组取回的带有编号的血清标本离心取血清.将待测血清加入相应的样本管。
7.2输入样本，进入Workplace，点Test Selection。
7.3输入常规样本，选Routine，选择样本类型、输入序列号或样本号，可选择稀释倍数，选择项目，只编缉一个样本则点击SAVE键即可，7.4如批量输入做相同项目的样本，则点Repeat，输入最后一个样本的序列号，点Start，在相应的样本类型里输入该批样本起始号，回车，再点Start。
7.5输入急诊样本，选Stat，输入架号、位置号、样本编号，选择项目，Save，将标本放入急诊进样位，点Start，再Start；7.6手动重测标本，选择需重做的样本号，点Rerun rack Assignment，编辑重做样本架号位置号，选择项目，点Save，点Start，再Start。
7.7结果查询：进入Workplace，点Data Review，选择要看的样本号，可看到该样本所做的项目和结果。
7.8结果传输：进入Workplace，点Data Review，选择要传输的实验号，按Sent to host,再按sent,结果即可传输。
8.质量控制(Quality control)：Elecsys PreciControl Tumor Marker 1和2试剂和其它适合的试剂均可作为测定时的质控液。
在测定时，对于不同浓度范围的标本，每24小时内必须进行一次质控测试。
每次更换试剂盒或进行定标后也须进行质控测试。
每个实验室须根据各自的情况确定合适的质控间隔和范围。
测定值必须处于规定的范围内。
NSE最大允许误差ALE 为25%，室内质控CV为3.46（低）、4.01%（高），偏移为3.81%,过程稳定性<2%.根据公式:△SEc=（ALE-Bias）/CV-1.65利用计算软件可得, 低值选择的质控规则: 13s/(41s) N=2; 高值选择的质控规则13s/(41s) N=2,当质控失控时，应按照《室内质量控制程序》处理9.计算(Calculations)：分析仪自动计算得出每份标本的测定浓度（单位可为ug/L 或ng/mL）。
10.参考范围（Expect Values）：15.7–17.0 ng/ml11.方法的局限性（Method Limitations）：12.1精密度（Precision）:12.1 Mean SD CV批间(L) 12.11 0.618 5.1%(H) 98.1 5.03 5.13%批内 14.2 0.3602 2.54%12.2灵敏度（Sensitivity）： 0.05 ng/ml12.3特异性（Specificity）：不可用于检测其它体液标本；接受过鼠单克隆抗体者，标本不可测定；严重溶血（hemolysis）标本不可测定；羊膜穿刺诊断使血标本结果升高。
12.4分析测试范围（AMR）：0.050-370 ng/mL当结果超过AMR时，需要稀释，如果需要手工稀释，按以下标准稀释材料（dilution material）:NSE diluent最大稀释倍数（dilution times）:1:212.5病人结果报告范围（CRR）：0.050-740 ng /mL当结果超过AMR时，需要稀释，如果需要手工稀释，按以下标准稀释材料（dilution material）: NSE diluent最大稀释倍数（dilution times）:N/A12.6干扰物质（Interfering Substances）：胆红素影响（bilirubin）：样本中胆红素的浓度直至200mg/L，在实验允许的精密度范围内对结果没有影响。