D T L .,
b. 温度： 5-40℃
※ pH＞7.0时请在5-25℃内使用。
c. 缓冲盐溶液浓度 A ≤L500mM
R ※ 盐浓度较高时注意盐I 析的情况。 H C L E C ≤ 90% I d. 水相比例 A D
※柱子从含正己烷的体系切换到甲醇、乙腈或其他极性溶剂体系，强烈 L E 建议使用100% IC 异丙醇进行过渡。（AY-H/AY-3使用100%乙醇过渡）
O L NO
( S E GI
A R I CH
DA
※除异丙醇外，其他醇类在乙腈中的含量必须在15%之内，否则会损坏 色谱柱。
14
3.多糖涂敷型反相手性柱
L O N 正己烷 ：乙醇 H C TE=70:30
E I OG
N I H (C
正己烷：异丙 醇=90:10
13
2.3多糖涂敷型正相手性柱-模式切换
传统非极性模式
正己烷/异丙醇 正己烷/乙醇
极性模式
乙醇 CO ) A 甲醇 N I H C 乙腈
D T L .,
H ※可使用100%甲醇或100%乙腈 的极性流动相。注意的是，柱子一旦使 C E 用了该极性模式，建议一直使用 L T 该模式。
H C E B.仪器当前流动相中含有一些会破坏柱子的溶 剂（如乙酸乙酯、二氯甲烷和四氢呋喃等），仪 T L 器先不接柱子，接上两通 A R I H C 1. 用异丙醇或乙醇冲洗所有管路 （至少60ml） L E -> 置换掉对柱子有损伤的溶剂 C I 2. 用实验所需流 约30ml） DA 动相冲洗所有管路（ -> 置换醇
10
Shipping solvent: n-Hexane/2-propanol LO solvent mixture (90/10,v/v)
S E GI
I H (C
O C ) NA
D T L .,
2.1多糖涂敷型正相手性柱-使用前
※ 溶剂切换
请在连接色谱柱前，按下述要点彻底做好溶剂切换LTD , . 根据HPLC系统中不同的流动相，采用不同的冲洗方法清洗所有管路， O C ) 示意图如下（注意放在溶剂瓶中的吸滤头部分） NA
多糖
柱子描述：例如AD-H，5μm硅胶表面涂敷有直链 淀粉-三（3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯） 直链 淀粉
H C L E C I A D
× O 涂敷 OL 丙酮、氯仿、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、 N H C 乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃等 E T L A IR
S E GI
I H (C
O C ) NA
正己烷：乙醇： 二乙胺 =70:30:0.1
H C 注：规格为4.6*250mm 柱，20倍柱体积约为60mL； L E C 冲洗时柱压 ，3μm低于10MPa，5μm低于5MPa，10μm低于3MPa； I A D 注意醇的黏度大，之后用正己 烷/醇体系冲洗时应先低流速将醇置换后才能升高
流速。
L A IR
Protein-based
Reverse Phase
CHIRALPAK® AD-3R/AD-RH CHIRALPAK® AS-3R/AS-RH CHIRALPAK® AY-3R/AY-RH CHIRALPAK® AZ-3R/AZ-RH CHIRALCEL® OD-3R/ODRH/OD-R CHIRALCEL® OJ-3R/OJ-RH CHIRALCEL® OZ-3R/OZ-RH CHIRALCEL® OX-3R/OX-RH
定量环 所有溶剂入口 泵与进样阀之间
H C L E C I A D
泵
L A IR
H C TE
O L NO
S E GI
I H (C
进样阀与柱子之间 检测器
进样阀清洗液
柱子与检测器之间
11
2.1多糖涂敷型正相手性柱-使用前
※ 溶剂切换
1. 用水冲洗仪器所有管路（至少60ml） -> 除去有机相和缓冲盐溶液 2. 用异丙醇或乙醇冲洗所有管路 （至少60ml） -> 置换水 3. 用实验所需流动相冲洗所有管路（约30ml） -> 置换醇 A.仪器当前流动相是水相流动相（如水/缓冲液-乙腈/甲醇等），仪器先不接柱子，接上两通
– 仪器设定保护柱压
D T L .,
6/79
添加物的残留效应
O C ) NA D T L .,
H C L E C I A D
L A IR
H C TE
O L NO
S E GI
I H (C
如何避免“残留效应”
残留物在普通流动相中可长时间地稳定保留
I H • 解决方案: C ( S E – 用醇洗涤可除去大部分的碱性残留物 I G O L – 用酸洗涤也可除去碱性残留物 O N H C – 用碱洗涤可除去酸性残留物 E T H C L E C I A D L A IR
D
E C AI
A R I CH
O N H EC
S E GI
I H (C
O C ) NA
D T L .,
1.大赛璐手性柱一览表
Immobilized Type
CHIRALPAK® CHIRALPAK® CHIRALPAK® CHIRALPAK® CHIRALPAK® CHIRALPAK® IA/IA-3 IB/IB-3 IC/IC-3 ID/ID-3 IE/IE-3 IF/IF-3
O C ) NA
D T L .,
2.多糖涂敷型正相手性柱
Normal Phase
CHIRALPAK® CHIRALPAK® AD-3/AD-H/AD AS-3/AS-H/AS CHIRALPAK® AY-3/AY-H CHIRALPAK® AZ-3/AZ-H CHIRALCEL® OD-3/OD-H/OD CHIRALCEL® OJ-3/OJ-H/OJ CHIRALCEL® OZ-3/OZ-H CHIRALCEL® OX-3/OX-H
D T L .,
5/79
手性柱压力
长期超压会引起柱头塌陷，反压上升，柱效下降 • 原因：
O C ) A 压过高。 –流动相或样品溶液过滤不彻底，固体颗粒堵塞管路或柱头，会引起柱 N I H –样品中成分在柱头析出或强烈吸附，会引起柱压升高。 C ( S E –流速过快，会引起柱压过高，特别是当使用粘度高的溶 剂（如IPA, EtOH，流速应控制在 I G 0.1-0.3 ml/min） O L O N H C E T • 解决方法： L A围，请仔细参照相应的《色谱柱说明书》。 – 每种柱子有特定的承压 范 R I H品溶液。 – 彻底过滤流动相及 样 C L E – 样品预处理 C I A – 更换流 D 动相时，或者刚把柱子刚接上仪器的时候，逐步增加流速
涂敷
Reverse Phase
CHIRALPAK® AD-3R/AD-RH AS-3R/AS-RH CHIRALPAK® AY-3R/AY-RH CHIRALPAK® AZ-3R/AZ-RH CHIRALCEL® OD-3R/ODRH/OD-R CHIRALCEL® OJ-3R/OJ-RH CHIRALCEL® OZ-3R/OZ-RH CHIRALCEL® OX-3R/OX-RH ×
纤维素Leabharlann D T L .,正相
√ 正己烷、异丙醇、乙醇、甲醇、乙腈 × 水
9
2.1多糖涂敷型正相手性柱-使用前
1.明确柱子当前保存的溶剂
新柱请注意使用说明书“column description”部分 例如 CHIRALPAK® AD-H柱
Column description:
O N H C E T 剂 2.明确仪器当前使用的溶 L A R I 根据《多糖涂敷型手性柱使用注意事 项-中文补充版》 “1.4 溶剂切换”做好相应的溶 H C 剂过渡。 L E C I A D 3.明确柱子将要使用的溶 剂
C.仪器当前流动相是传统的非水流动相（如正己烷、异丙醇和乙醇），仪器先不接柱子，接上 两通，直接用实验所需流动相冲洗所有管路（约30ml）即可
12
O L NO
S E GI
I H (C
O C ) NA
D T L .,
2.2多糖涂敷型正相手性柱-使用后
实验完成后，先用不加添加剂的同比例流动相冲洗柱子（20倍柱体 积），再用出厂保存溶剂冲洗保存（20倍柱体积）。如样品在流动相中 D T L , 的溶解度小或较难洗脱，建议使用比流动相洗脱极性大的溶剂或 100%乙 . O C 醇先冲洗，再用出厂溶剂冲洗保存。 ) A 例如，ADH使用完正己烷：乙醇：二乙胺=70:30:0.1 S
4/79
常见使用故障—溶剂错误 2
Daicel正相手性柱的流动相和样品溶液不能使用水溶液
I H C 损，只需要使用色谱 不过，若不小心导入微量的水，柱子不会彻底受 ( S E I 级无水乙醇低流速将水置换出来。 LOG O N H C E T L A R I H C L E C I A D
O C ) NA
H C L E C I A D
L A IR
N H C TE
G O L O
S E I
Special I H (C CROWNPAK
O C ) NA
CHIRALPAK® AGP CHIRALPAK® HSA CHIRALPAK® CBH
®
D T L .,
CR(+)/CR(-) CR-I(+)/CR-I(-) QN-AX/QD-AX ZWIX(+)/ (-) WH/MA(+) OP(+)/OT(+)
丙酮、氯仿、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、 乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃等
CHIRALPAK®
H C L E C I A D
H C E T 反相 L A IR
O L NO
S E GI