优化手性化合物的分离方法时，如何增加分离选择性？正相手性色谱柱上增加分离度的方法有：降低流动相中醇的含量、降低柱温、更换流动相中醇的种类、更换手性柱。
建立手性化合物的分离方法时，选定了正相手性柱之后，如何选择流动相？流动相首选正己烷和异丙醇的混合溶液，根据样品的酸碱性决定是否添加酸碱性添加剂。
如果是中性样品则不需要添加添加剂，如果是酸性样品需要添加三氟乙酸或乙酸，如果是碱性样品需要添加二乙胺，添加剂的量一般为0.1 %。
流动相中醇的含量一开始可以使用30%，根据样品出峰的快慢和分离度再调整醇的含量。
流动相中醇的种类一般使用异丙醇，也可以使用乙醇。
建立手性化合物的分离方法时，如何选择手性柱？根据文献或者参考大赛璐公司的《应用指南》中结构类似物的分离方法，选择手性柱；另外可以寄少量消旋品，大赛璐公司能免费为您选择分离最佳的手性柱。
手性柱使用完了之后如何清洗保存？正相手性色谱柱如果使用正己烷和醇类的混合流动相之后，只需要用正己烷/异丙醇=90/10(v/v)的保存溶液冲洗30 min即可。
反相手性色谱柱如果使用了水溶液和乙腈的混合流动相之后，只需要用水/乙腈=70/30(v/v)的保存溶液冲洗30 min即可。
CROWNPAK® CR(+)柱流动相中甲醇含量有要求吗？CROWNPAK® CR(+)柱流动相中甲醇含量为0％-15%，甲醇的含量一旦超过15%，CROWNPAK® CR(+)柱会被损害。
正相手性柱进了水后，柱子会不会损坏？正相手性色谱柱（例如AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H）一旦进了水，柱压会升高，但是只要柱压不超过柱压上限，柱子就不会损坏。
只需用无水乙醇低流速(0.1-0.2 ml/min)将水全部充分置换出来，再用正相流动相低流速(0.1-0.2 ml/min)将乙醇全部置换出来就能继续使用该正相手性色谱柱。
样品的保留时间漂移，可能是哪些原因，如何解决？1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定。
2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等。
3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡。
该情况在MA（+）柱上出现较多。
4、酸碱性的样品，有时在中性条件下能分开，峰形尚可，但保留时间会漂移；加入相应的酸碱添加剂即可。
5、流动相污染。
溶于流动相中的少量污染物可能慢慢富集到色谱柱上，从而造成保留时间的漂移。
需清洗色谱柱，流动相和样品溶液尽量现用现配。
（小极性样品的溶解）正相方法分析布洛芬时，有时峰形难看甚至达不到基线分离，什么原因？如何解决？该方法为Hexane/IPA=99/1，极性很小；若样品不是溶解在流动相中，则结果很可能达不到基线分离。
采用流动相溶解即可。
通常手性分析时，若流动相为H/I，H/E体系，且Hexane不超过85%，则溶解样品时可用流动相，也可用100%醇直接溶解。
谱图通常差别不大。
但是对小极性样品和流动相，尤其hexane超过90%时，一定注意用流动相溶解。
新柱CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE与原来的大赛璐手性柱有什么区别？CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE是将多糖衍生物共价键合在硅胶上，而大赛璐原来的手性柱固定相都是将多糖衍生物涂敷在硅胶表面的。
正因为是共价键合，所以CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE柱能使用任何液相流动相，比如四氢呋喃、氯仿、丙酮、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯等。
CHRALPAKIA/IB/IC/ID/IE与大赛璐原有的正相柱相比，扩大了溶剂选择的范围，增加了新的分离选择性，在原来大赛璐手性色谱柱上分不开的化合物有可能在CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE上得以分开。
键合型手性柱CHRALPAK IA/IB/IC/ID/IE的再生方式？在再生前请先冲洗手性柱，以防止残留物对于再生效果的影响。
IA柱修复方法：先用EtOH小流速冲洗30min，再用DMF，小流速冲洗3小时，然后EtOH过渡，验柱。
若效果不好，再用EtOH 冲洗30min，然后THF冲洗2小时。
IB柱，IC柱修复方法：用乙酸乙酯冲洗30min-120min，在室温下保存2天或更久。
验柱。
CHIRALPAK® AD-H、CHIRALPAK® AS-H、CHIRALCEL® OD-H、CHIRALCEL® OJ-H四款最常用正相色谱柱的区别是什么？区别是固定相的种类不同。
CHIRALPAK AD-H、AS-H的硅胶表面涂敷的是直链淀粉衍生物；CHIRALCEL OD-H、OJ-H的硅胶表面涂敷的是纤维素衍生物。
CHIRALPAK AD-H的硅胶表面涂敷的是直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)；CHIRALPAK AS-H硅胶表面涂敷有直链淀粉-三[(S)-α-甲基苄基氨基甲酸酯；CHIRALCEL OD-H硅胶表面涂敷有纤维素-三[3,5-二甲苯基氨基甲酸酯]; CHIRALCEL OJ-H硅胶表面涂敷有纤维素-三[4-甲基苯甲酸酯]。
不同种类的多糖衍生物决定了这些手性柱的分离对象各不相同，既相互包含，又相互补充。
CHIRALPAK® AD-3柱和CHIRALPAK® AD-H柱和CHIRALPAK® AD是什么区别？CHIRALPAK® AD-3、CHIRALPAK® AD-H柱和CHIRALPAK® AD的填料种类是一样的，表面涂敷的都是直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)，手性选择性基本相同。
只不过填料的粒径不一样，CHIRALPAK® AD-3是3μm，CHIRALPAK® AD-H是5 μm，CHIRALPAK® AD是10 μm。
CHIRALPAK® AD-3的柱效最高。
CHIRALPAK AD-H柱和CHIRALPAK AD是什么区别？CHIRALPAK AD-H柱和CHIRALPAK AD的填料种类是一样的，表面涂敷的都是直链淀粉－三(3,5－二甲苯基氨基甲酸酯)，手性选择性基本相同。
只不过填料的粒径不一样，CHIRALPAK AD-H 是5 μm，CHIRALPAK AD是10 μm。
CHIRALPAK AD-H能代替CHIRALPAK AD并且CHIRALPAK AD-H柱效更高。
正相手性色谱柱中保存液是什么？正相手性色谱柱AD-H/AD-3、AS-H/AS-3、OD-H/OD-3、OJ-H/OJ-3中的保存液是正己烷/异丙醇=90/10(v/v)。
其它手性色谱柱的保存液请查阅使用说明书上的说明。
正相手性色谱柱使用前需要注意什么？将正相手性色谱柱AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H接上液相色谱仪之前先要保证液相色谱系统中的所有管路均为正相流动相。
如果液相系统里面是反相溶液，比如水/乙腈=50/50(v/v)。
那么需要先用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路（包括所有溶剂入口、六通阀、检测器等），然后用正相流动相冲洗液相的所有管路，最后再接上正相手性色谱柱；如果液相系统的反相流动相中含有缓冲盐，要先用纯水冲洗HPLC系统，然后用无水乙醇或者无水异丙醇冲洗液相的所有管路，最后用正相流动相冲洗。
正相手性色谱柱的柱压范围是多少？正相手性色谱柱（例如：AD-H、AS-H、OD-H、OJ-H）中的柱压绝对不能超过9.8 MPa，最好不超过5 MPa。
所以建议在实际使用过程中，在液相仪器上设置泵的保护压力为6 MPa，这样一旦系统的压力超过6 MPa，泵就会自动停止运行，保护手性柱不受高压破坏。
蛋白质柱AGP的使用条件和限制？∙IPA含量最好低于25%，其他有机相含量最好低于15% λ∙建议使用温度：20℃-25℃λ∙ pH范围：4-7 λ∙缓冲盐溶液浓度不超过100mM λ∙AGP的负载量不大，通常情况下配置样品浓度0.05-0.5mg/ml，进样量1µl-20µl比较合适。
不同样品，可以适度调整。
负载过大时将导致分析结果不准确，表现为分离度显著下降和柱效降低。
使用手性柱时若柱压过高，会对柱子有影响吗？另外，柱压过高是什么原因造成的呢？有什么解决办法吗？？长期超压会引起柱头塌陷，反压上升，柱效下降。
原因：λ∙流动相或样品溶液过滤不彻底，固体颗粒堵塞管路或柱头，会引起柱压过高。
λ∙样品中成分在柱头析出或强烈吸附，会引起柱压升高。
λ∙流速过快，会引起柱压过高，特别是当使用粘度高的溶剂，如IPA, EtOH，流速应控制在0.1-0.3 ml/min解决办法：λ∙每种柱子有特定的承压范围，请仔细参照相应的《色谱柱说明书》。
λ∙彻底过滤流动相及样品溶液。
λ∙样品预处理λ∙更换流动相时，或者刚把柱子刚接上仪器的时候，逐步增加流速λ∙仪器设定保护柱压化合物在手性柱中的“残留效应”经常会对影响手性柱的分离度和出峰时间等，该如何处理？如何冲洗？残留物在普通流动相中可长时间地稳定保留1.用醇洗涤可除去大部分的碱性残留物2.用酸洗涤也可除去碱性残留物3.用碱洗涤可除去酸性残留物推荐分开使用酸性条件手性柱和碱性条件手性柱手性柱谱图中异构体的分离度下降了，可能是什么原因，该怎么办？分离度下降的原因有可能是色谱柱以外的色谱条件发生了变化，或者色谱柱受损柱效发生了变化。
首先查看是否是因为温度、流动相成分等外在因素发生了变化导致分离度下降，如果排除了各种外在因素就有可能是分析柱本身的柱效下降导致的。
如果分离度在短时间内急剧下降伴随柱压上升，可能是有强极性溶剂损害了柱子；如果分离度在长时间内慢慢下降，可能是柱头受污染或柱头塌陷，需要更换保护柱或者更换分析柱。
手性柱谱图中的峰出现裂分，可能是什么原因，该怎么办？峰裂分的原因有可能是色谱柱以外的色谱条件发生了变化，或者色谱柱受损柱效发生了变化。
有时样品溶液浓度太高，进样量太大也会裂缝，这种情况只需减少浓度进样量即可。
如果排除了各种外在因素，那么色谱柱本身的原因可能是柱头被污染，或者柱压太高导致柱头塌陷。
柱头污染的话，可以按照说明书采用不同的溶剂溶剂冲洗色谱柱，最好是反方向冲洗；或者更换保护柱。
如果是压力太高导致柱头塌陷，那么除了增补填料，基本没有其他方法补救了，只能更换色谱柱。
基线不稳定可能是哪些原因，如何解决？1.仪器刚从反相置换到正相系统时，基线会不稳定，只需要多平衡一会儿即可。
2.检测器污染。
卸下检测器，更换透镜；或者取出透镜，用甲醇、异丙醇、水或其他溶剂（根据该仪器平时的使用情况而定）超声清洗。
安装时注意透镜的方向，一面是平面，一面凸透。
3.确认使用的两元（或三元四元）流动相彼此互溶性良好。
4.确认正使用的流动相和仪器之前刚用过的流动相彼此互融；若不互融，需要选择合适的溶剂过渡。