实验一维生素C的测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)
姓名：杨玉敏学号：130109132 组号：4组
实验日期：2016年/4月/7日实验地点：逸夫楼食品营养实验室7D302
一、测定原理
2,6-二氯酚靛酚滴定法用于测定还原型抗坏血酸。
抗坏血酸分子中存在烯醇式结构（HO—C═C—OH），因而具有很强的还原性，还原型抗坏血酸能还原2,6-二氯酚靛酚染料。
2,6—二氯酚靛酚染料在酸性溶液中呈红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色。
因此，当用2,6—二氯酚靛酚染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，被还原后红色消失成为无色的衍生物，可作为维生素C含量测定的滴定剂和指示剂。
还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化为脱氢抗坏血酸。
当抗坏血酸全部被氧化时，滴下的2,6—二氯酚靛酚溶液则呈红色。
在测定过程中当溶液从无色转变成微红色时，表示抗坏血酸全部被氧化，此时即为滴定终点。
根据滴定消耗染料标准溶液的体积，可以计算出被测定样品中抗坏血酸的含量。
在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量、与样品中所含抗坏血酸的量成正比。
反应式如下：
二、实验仪器与试剂
1.仪器
(1)公用仪器
①组织捣碎机；水果刀；②托盘天平；精密天平；称量纸；卷纸；③1000ml烧
杯；250ml烧杯；500ml、1000ml量筒；④20cm镊子；⑤蒸馏水，蒸馏水洗瓶；
⑥记号笔、标签纸、定性滤纸。
(2)分组及仪器：(12人一组，共4组)
每组仪器包括：
①100ml具塞量筒(或普通量筒)；100mL棕色容量瓶，250mL棕色容量瓶；②10ml 量筒；③5ml、10ml移液管；
④(微量)酸式滴定管；⑤50ml、500ml烧杯；⑥50ml或100ml三角烧瓶；⑦漏斗；漏斗架；
⑧台式离心机；⑨电炉；⑩吸耳球；玻璃棒。
2.原料及试剂
本实验材料是橙子、草酸、抗坏血酸、2,6-二氯酚靛酚、碳酸氢钠，用水均为蒸馏水，试剂纯度均为分析纯。
原料：橙子。
(1)2%草酸溶液:草酸20g溶于700ml蒸馏水中，稀释至1000ml。
(2)1%草酸溶液：取上述2%草酸溶液450ml，稀释至900ml。
（以上全班统一配制）
(3)抗坏血酸标准溶液：
精确称取抗坏血酸20mg，用适量1%草酸溶液溶解后，移入100mL棕色容量瓶中，并以1%草酸溶液定容，振摇混匀，最好临用前配制，冰箱中保存。
1mL 含0.2mg抗坏血酸。
(4)0.02%2,6-二氯酚靛酚溶液：
称取碳酸氢钠52mg，溶解在200mL沸水中。
再称取2,6-二氯酚靛酚50mg，溶于上述碳酸氢钠溶液中。
冷后，过滤于250ml棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。
于冰箱中保存。
临用前按下法标定：
取2mL浓度为0.2mg/ml的抗坏血酸标准溶液于三角瓶中，加1%草酸5mL，摇匀，用配制的2,6-二氯酚靛酚染料溶液滴定至微红色，15s不褪色即为终点，并计算如下：
每1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数=滴定度(T)=C×V
1/V
2。
式中：C----抗坏血酸的浓度(mg/ml)；V
1----抗坏血酸的量(ml)；V
2
----消
耗染料溶液的量(ml)。
三、实验步骤
1.取300～500g新鲜橙子(去皮、去核)，置于1000ml烧杯内，称重，精确至0.01g。
2.将样品倒入组织捣碎机，加入等量2%草酸（W∶V），加盖旋紧，匀浆2～5min。
3.取出匀浆物质。
（以上统一进行）
4.称取10-30g匀浆物质(使其含有V
C
1-5mg)于50ml小烧杯中，精确度1%，编号，记录。
(第一组取10g，第二组取20g，第三、四组取30g)。
5.用少量1%草酸将称取的匀浆物质倒入100ml容量瓶中，并用1%草酸反复洗涤烧杯（3次），其洗涤液一并移入，并用1%草酸定容到100ml。
6.加塞后将匀浆物质与1%草酸充分混合，静置10min。
7.取上述溶液过滤或离心。
8.用移液管吸取5-10ml滤液置于三角烧瓶内，加入10ml1%草酸（2个平行样品）；用移液管吸取5-10ml蒸馏水，加入10ml1%草酸（空白对照）。
(第1-3组取10ml，第4组取5ml)
9.2,6二氯酚靛酚染料滴定至终点（淡粉红色，15s不褪色），记录染料消耗量。
若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可加1ml氯仿，到达终点时，氯仿层呈现淡红色。
10.计算每100g样品中维生素C的含量（ml）及平行样品误差范围，公式如下：
维生素C含量（ml/100g）=[(V`
1-V`
2
)×T/W]×100
式中：V`
1
----滴定样品时耗去的染料溶液的量(ml)；
V`
2
----滴定空白时耗去的染料溶液的量(ml)；
T----1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数；
W----滴定时所取的滤液中，含样品的量(g)。
四、实验结果、数据计算与分析
《食物成分表》（全国平均值）中橙子的VC含量约33mg/100g。
与测定值比较。
实验数据：橙子：300.10g、草酸：20g、抗坏血酸：0.0225g、橙汁：30g、2,6-二氯酚靛酚染料：0.0510g。
V
1
=20ml
V
2
=21.77ml
C=0.225mg/ml
计算得出：每1mL染料溶液相当于抗坏血酸的毫克数
=滴定度(T)
=C×V
1/V
2
=（0.225*20/21.77）mg/ml
=0.207 mg/ml
样本一：7.12ml 样本二：7.25ml
V`
1
=7.185ml
V`
2
=0.25ml
W=0.75g 4.35
计算得出：维生素C含量（ml/100g）
=[(V`
1-V`
2
)×T/W]×100
=
五、注意事项及说明
(1)某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物定容时泡沫太多，可加数滴丁
醇或辛醇消泡。
(2)大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶，因此，抗坏血酸的测
定应采用新鲜样品并尽快用2％草酸溶液制成匀浆以保存维生素C。
(3)样品的提取液制备和滴定过程，要避免阳光照射和与铜、铁器具接触，以免
抗坏血酸被破坏。
(4)整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。
滴定过程一般不超过
2min。
滴定所用的染料不应小于1ml或多于4ml，如果样品含维生素C太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。
(5)本实验必须在酸性条件下进行。
在此条件下，干扰物反应进行得很慢。
2%草酸有抑制抗坏血酸氧化酶的作用。
(6)干扰滴定因素有：样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较
抗坏血酸慢，因而滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动三角瓶，直至呈粉红色，于15s内不消退为终点。
(7)提取的浆状物如不易过滤，亦可离心，留取上清液进行滴定。
(8）市售2,6-二氯酚靛酚质量不一，以标定0.4mg抗坏血酸消耗2mL左右的染料为宜，可根据标定结果调整染料溶液浓度。