实验目的 实验原理 实验器材 实验方法 实验结果 注意事项 思考题
实验 4
维生素C含量测定 2,6-二氯酚靛酚法
实验目的
➢学习用2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C的 原理和方法。
➢进一步熟悉，掌握微量滴定法的基本操 作技术 。
实验原理
维生素C具有还原性,利用它的还原性可测定其含量. 还原型维生 素C能被2,6-二氯酚靛酚氧化为脱氢型,染料本身被还原成无色的衍 生物,该氧化性染料在碱性环境中呈蓝色,在酸性环境中呈红色.因此 用2,6-二氯酚靛酚滴定含有维生素C的酸性溶液时,维生素C尚未全 部被氧化时,则滴下的染料立即使溶液变成无色,当溶液中的抗坏血 酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时,滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液 呈淡红色,用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色为滴定终点,根 据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的量。
⑶样品滴定准确吸取样品提取液5ml和草酸15ml,放入50ml锥形瓶中,滴定 方法同2,另取20ml1%草酸作空白对照滴定。样品提取液和空白对照各 做两份。
结果处理
维生素C mg/100g样品=﹙V1－ V2﹚×V×M×100/V3×W
式中： V1为滴定样品所消耗染料的平均毫升数. V2为滴定空白对照所耗用染料的平均毫升数 V为样品提取液的总体积; V3为滴定时所取的样品提取液的毫升数; M为1ml染料所能氧化抗坏血酸的量﹙mg﹚ W为待测样品的重量﹙g﹚。
实验器材
➢材料 新鲜水果或蔬菜
➢ 试剂 1%草酸溶液:草酸1g溶于100ml蒸馏水
中，2%草酸溶液:草酸2g溶于100ml蒸馏水中， 抗坏血酸标准溶液﹙0.1mg/ml﹚用1%草酸溶 液配制，0.05%2,6-二氯酚靛酚溶液。
➢仪器或其他用具 天平，组织捣碎机，容量瓶
﹙50ml﹚，微量滴定管﹙5ml﹚，刻度吸管 ﹙ml, 10ml﹚，锥形瓶﹙100ml﹚ 。
注意事项
1.用2%草酸制备提取液,可有效地抑制抗坏血酸氧化酶, 以免抗坏血酸变为氧化型而无法滴定,而1%的草酸无此作 用。 2.市售的2,6-二氯酚靛酚质量不一,以标定货0.4mg抗坏 血酸消耗费2ml左右的染料为宜,可根据标定结果调整染 料的浓度 3.滴定过程易迅速,一般不超过2min。样品滴定消耗燃料 1～4ml为易如超出此范围,应增加或减少样品提取液用
量。 。
思考题
1. 维生素C具有什么生理功能？ 2. 为了在实验中得到准确的抗坏血酸含量应注 意那些问题？

操作步骤
⑴ 1.2,6-二氯酚靛酚溶液的标定 准确吸取4.0抗坏血酸标准溶液（含0.4mg 抗坏血酸） 于100ml锥形瓶中,加6ml 1%草酸溶液,用2,6-二氯酚靛酚 溶液滴定至淡红色﹙15秒内不退即为终点﹚。记录所用染料溶液的体积， 计算出1ml染料溶液所能氧化抗坏血酸的量。
⑵提取抗坏血酸取新鲜水果或蔬菜25g,加入25ml 2%草酸溶液,打成匀浆,用 两层纱布过滤至100ml容量瓶中,滤饼用少量2%的草酸溶液洗几次,合并 滤液,定容至100ml。