有限稀释法
计数
105/ml 104/ml
103/ml
5-20/孔
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7. 单克隆抗体的制取
体内—腹腔接种
注射特定 抗原蛋白
体外—培养罐法
培养骨髓瘤细胞
B淋巴细胞
骨髓瘤细胞 融合
多种杂交细胞
专一抗体检验阳性
克隆上述杂交细胞
分开不同杂交细胞，克隆专 一抗体，检验阳性细胞
注射到小鼠体内
体外培养
单克隆抗体
陷细胞可以在此培养基中生存。是常用的骨髓杂交瘤细胞选择性培
养基。
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5. 抗体分泌细胞的筛选
对筛选方法的要求： 多——大量样品一次检测； 快——迅速取得检测结果； 准——检测结果可靠性高； 灵——检测方法灵敏度高。 常用筛选方法： ELISA、IFA等
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6. 克隆化过程
方法：有限稀释法 克隆建立的标准：连续两次以上100%阳性孔 饲养细胞：同品系小鼠腹腔、胸腺、脾细胞
2.骨髓瘤细胞的准备
细胞株处于良好的生长状态 细胞株保持HGPRT缺陷状态
HGPRT：次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶
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3. 细胞融合
致敏淋巴细胞
骨髓瘤细胞 50%PEG 1 mL 培养液 10 mL
离心 1000rpm 10 min
37 °C摇动、由慢 渐快1min、静止 1.5min
离心 1000rpm 7min
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2. 单克隆抗体的特点 优点 ： （1）理化性状高度均一、结构、氨基酸顺序、特异性等 一致 （2）生物活性单一、灵敏度高 （3）与抗原结合的特异性强，适用于以标记抗体为特点 的免疫学分析方法 （4）便于人为处理和质量控制，来源容易，可以在体外 “永久”地存活并传代 （5）可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗
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局限性 ： （1）固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范 围 （2）反应强度不如多克隆抗体 （3）制备技术复杂、费时费工、价格较高
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三、单克隆抗体技术的应用
1.检验医学诊断
（1）病原微生物抗原抗体的检测：乙肝表面抗原试纸
（2）肿瘤抗原的检测
（3）免疫细胞及其亚群的检测 （4）激素测定：早孕检测试纸、女性排卵检测试纸 （5）细胞因子的测定 （6）其他：吗啡类毒品检测试纸等
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思考：
1、如何大量生产单克隆抗体？
2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？
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谢谢
祝：同学们学习进步
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抗体工程制药
单克隆抗体的制备
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掌握：单克隆抗体的概念和特点、制备原理， 制备方法及基本过程 熟悉：单克隆抗体技术的应用 了解：单克隆抗体的发展
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主要内容
1.单克隆抗体的发展 2.单克隆抗体的概念和特点 3.单克隆抗体技术的应用
4.单克隆抗体的制备过程
3
没有单克隆抗体前人类所遇见的问题
银屑病
手口足病
2.蛋白质的提纯
3.肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术
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四、单克隆抗体制备过程
致敏淋巴细胞的准备
骨髓瘤细胞的准备
细胞融合 选择性培养 抗体分泌细胞的筛选 克隆化过程
单克隆抗体的制取
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1.致敏淋巴细胞的准备
动物选择：品系、年龄、性别、健康状态 抗原接种：方式—体内、体外 剂量—0.5-100g 次数—视抗原而定 间隔—视抗原而定 佐剂—视抗原而定 收集时间：末次接种后72 h
加入HAT培养液悬 浮细胞，置于培养 孔内
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4. HAT选择性培养
HAT是用于筛选具有次黄嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)或胸苷激酶
(TK)活性缺陷细胞的培养基。含有次黄嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)、胸
苷(T)和甘氨酸。在氨基蝶呤(二氢叶酸类似物)存在下，这种酶缺陷 的细胞不能通过核苷酸合成旁路合成次黄嘌呤和胸苷。HPRT和TK缺
1984年获得诺贝尔医学和生理学奖。
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二、单克隆抗体的概念及特点
1.概念 （1）抗体：是机体在抗原刺激下产生的能与该 抗原特异性结合的免疫球蛋白。 （2）单克隆抗体（monoclonal antibody ）：(简 称单抗 )，由经过特定的抗原处理过的效应B细 胞和骨髓瘤细胞杂交得到的杂交瘤细胞产生的具 有特异性识别某抗原上的某一个特定抗原决定簇 的抗体。
亚急性湿疹
癌症
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用于诊断鉴定人的血型类别
犬瘟热病毒单克隆抗体
用于寻常型银屑病亚急性湿疹
Байду номын сангаас
用于复发或耐药的滤泡性中 央型淋巴瘤 5 单克隆抗体药物
一、单克隆抗体技术发展
Georges J.F. Kohler Cesar Milstein
1975年将产生抗体的淋巴细胞与肿瘤细胞融合, 成功建立了单克隆抗体技术。