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Northern杂交 检测对象为RNA RNA。 1、检测对象为RNA。 Southern杂交不同的是 杂交不同的是： 2、与Southern杂交不同的是：1）不需 要限制性核酸酶切； 要限制性核酸酶切；2）变性方法不是碱 变性，而是采用化学试剂变性法。 变性，而是采用化学试剂变性法。 3、主要用于检测某一组织或细胞中已知 的特异mRNA的表达水平， mRNA的表达水平 的特异mRNA的表达水平，或比较不同组 织或细胞的同一基因的表达情况。 织或细胞的同一基因的表达情况。
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基因探针 ——分子杂交技术 分子杂交技术
基因探针
基因探针，即核酸探针，是一段带有检测标记， 基因探针，即核酸探针，是一段带有检测标记， 且序列已知的， 且序列已知的，与目的基因互补的核酸序列 (DNA或RNA)。 或

分子杂交技术的分类
根据其检测对象不同， 根据其检测对象不同，可分为
检测对象 Southern杂交 杂交 Northern杂交 杂交 Western杂交 杂交 DNA RNA 蛋白质 探针 核酸 核酸 抗体

基本操作程序
结果检测 杂交 印迹
将样品在凝胶 上分离， 上分离，然后 将样品通过 影印” “影印”的方 式转移到固相 支持物上（ 支持物上（如 滤膜）。 滤膜）。
可以与dCTP 可以与dCTP连接成 dCTP连接成 地高辛地高辛-dCTP
原理： 原理： 地高辛 + 抗地高辛抗体 （带有荧光素或酶的标记） 带有荧光素或酶的标记）
杂交 预杂交：将结合了DNA分子的滤膜先与特定的预杂 预杂交： 液进行预杂交，也就是将滤膜的空白处用鱼精DNA 或牛奶蛋白封闭起来，防止在杂交过程中滤膜本 身对探针的吸附。 杂交： 杂交：在一定的温度和溶液条件下，将标记的探 针与滤膜混合，如果滤膜上的DNA分子存在与探针 同源的序列，那么探针将与该分子形成杂合双链， 从而吸在滤膜上。

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转移的方法
毛细管虹吸法、电转移法、 毛细管虹吸法、电转移法、真空转移法

探针的制备 一、探针的合成 PCR、化学合成等方法 二、探针的标记 同位素：3H、35S、32P等 非同位素：地高辛、生物素、荧光素等

地高辛： 地高辛：

杂交炉
安装杂交管
洗膜：经过一定的洗涤程序将游离的探针分子除 去。

检测与分析
1、放射自显影：适用于放 放射自显影： 射性同位素标记的探针 化学发光检测 2、比色或化学发光检测： 比色或化学发光检测： 适于非同位素标记的探针 通过放射自显影或生化检 测，就可判断滤膜上是否 存在与探针同源的DNA DNA分子 存在与探针同源的DNA分子 及其分子量。 及其分子量。
将已印迹有样 品的滤膜与带 有放射性标记 或其它标记的 探针进行杂交。 探针进行杂交。
通过放射自显 影或显色反应， 影或显色反应， 判断样品中是 否有与探针同 源的分子。 源的分子。

Southern杂交
检测样品DNA的处理 的处理 检测样品 电泳分离及变性处理 转移并固定到滤膜上

Western杂交
1、基本原理和基本过程与Southern 、基本原理和基本过程与 杂交基本相同 杂交基本相同 2、检测对象为蛋白质（或酶） 、检测对象为蛋白质（或酶） 3、SDS-PAGE电泳分离 、 电泳分离 4、用“抗体 抗原”免疫反应或 抗体-抗原 抗原” 、 “DNA-protein”结合反应鉴别滤膜 ” 上的蛋白质。 上的蛋白质。
0.4M NaOH 凝胶
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转移并固定到滤膜上
通过毛细管虹吸法，将凝胶上的 通过毛细管虹吸法，将凝胶上的DNA转移到硝 转移到硝 酸纤维素膜或尼龙膜上。 酸纤维素膜或尼龙膜上。最后通过紫外线照射 固定在滤膜上。 将DNA固定在滤膜上 固定在滤膜上

探针的制备及杂交
检测与分析

检测样品DNA的处理
提取检测样品的基因组DNA 提取检测样品的基因组 用限制性内切酶对其进行酶切，至大小不同的DNA片段 用限制性内切酶对其进行酶切，至大小不同的 片段

电泳分离及变性处理
琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段 片段 琼脂糖凝胶电泳分离 变性处理 通常DNA变性的方法：热变性、酸碱 变性、化学试剂变性 在0.4M NaOH碱性条件下变性 碱性条件下变性