四、实验步骤
1. 取具玻璃塞和橡皮塞的500mL广口瓶各1只，分别编号 1#、2#；
种子
1#
2#
•实验装置图
2. 分别称取10g煮死种子和浸种活种子， 以纱布包裹，悬挂在橡皮塞下方； 3. 向两瓶内各加入Ba(OH)2溶液20mL，立 即封口，室温放置。
种子
1#
2#
•实验装置图
4.
不时轻摇两瓶，1h后，拔 除瓶塞，各加酚酞指示剂 2滴，立即以塑料袋（保 鲜膜）分别封口；
+ 0.5 % TTC →30℃，60 min → 检查
100半粒,煮沸5 min 注意：胚为红色的为具活力种子。 4、作业：计数活种子数，计算活种子的百分率。
实验一 植物种子生活力的快速测定 (TTC法、染料染色法)
[实验步骤]
二、红墨水染色法 1、原理 生活细胞的原生质膜对物质吸收有选择性，而死细胞的无此功能，红墨水颗粒可以进入。 2、材料：玉米、小麦（吸胀种子） 3、方法 种子100粒，沿中心线纵切为二，做如下处理： 100半粒
2、测定呼吸速率的常用方法

红外线CO2气体分析仪(IRGA) CO2可以吸收特定波段的红外辐射。当被检 CO2气体通过IRGA的气室时，可使红外辐射减少或 增加，且变化幅度取决于CO2的浓度。这种变化可 被IRGA的检测器所检定，且以电讯号的形式输出， 由记录仪所记录。
•氧电极法
3、小篮子法
4、叶绿素提取液荧光现象观察

取试管3：

从与入射光垂直的方向观 察；
再在透射光方向观察叶绿 体色素溶液的颜色； 记录叶绿素体色素溶液颜 色有何不同 ，分析原因。


5、铜代叶绿素反应

向试管4中逐滴加入浓盐酸，并不断摇匀，至颜色变化， 观察并记录现象；
向变色后的叶绿素溶液中加入少量醋酸铜，并在酒精灯上 缓缓加热，观察并记录颜色的变化。 分析原因。
均不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇、 丙酮等有机溶剂提取。

极性大小： 叶绿素b>叶绿素a>叶黄素>胡萝卜素
根据相似相溶原理，在有机溶液中的溶解度：
叶绿素b<叶绿素a <叶黄素<胡萝卜素
叶绿素的卟啉环

叶绿素分子头部的金属卟啉环中心均为Mg2+。 在弱酸作用下，叶绿素分子中的镁可被H + 取 代而形成褐色的去镁叶绿素，后者遇铜则可形 成绿色的铜代叶绿素。 铜代叶绿素很稳定，在光下不易被破坏，故常 用此法制做植物的原色标本。
[实验目的]

了解种子活力测定生产意义 掌握重要种子活力测定方法和评价标准 理解TTC/染料法测定种子活力的原理
[实验原理]

TTC法

当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原 时，可产生红色的三苯甲腙（TTF），胚染成红色； 如果种胚死亡则不能染色，种胚生 命力衰退或部分丧失生活力则染色较浅或局部被染色。

染料染色法

有生命力种子胚细胞的原生质膜具有半透性，有选择吸收外界物质的能力，一般染料不 能进入细胞内，胚部不染色；而丧失生命力的种子，其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸 收能力，染料可以自由进入细胞内，使胚部染色。
实验一 植物种子生活力的快速测定 (TTC法、染料染色法) [实验材料及药品]




BaCO3 +H2O BaC2O4 +2H2O
以酚酞指示滴定终点。

1mL的1/44mol/L草酸溶液中的草酸与1mg的CO2等摩 尔数。
空白和样品二者消耗的草酸溶液的mL数差值 = Ba(OH)2溶液吸收的CO2 mg数 = 种子呼吸作用释放的CO mg数

三、实验材料与试剂
•材料 小麦种子（浸种）和煮死的种子的小麦或 绿豆种子； •试剂 0.05mol/L的Ba(OH)2； 1/44mol/L的草酸； 酚酞指示剂。

(6)浸种催芽法

先将100粒种子用水浸约两小时吸胀，放于湿润草纸上，盖以湿润草纸，置 于氧气充足，室温10-20℃环境中，让种子充分发芽；再以发芽的种子粒数除 以100，乘以100%，求得发芽率。

这种测定方法虽然准确，但需要8天时间。
实验一 植物种子生活力的快速测定 (TTC法、染料染色法)


实验二 植物呼吸速率的测定——小篮子法
一、实验目的与要求

掌握小篮子法测定植物种子呼吸速率的原 理与步骤；
比较活种子与死种子的呼吸速率。

二、实验原理
1、植物的呼吸作用 定义：是植物体吸收氧气，将有机物
转化成二氧化碳和水并释放能量的过 程。

葡萄糖+6O2 6CO2 +6H2O+能量 意义： 代谢的中心 有机物转化的枢纽 能量的主要供应渠道

（三）叶绿素的光学性质
叶绿素与类胡萝卜素都具有光学活性，表现出一定 的吸收光谱，可用分光光度计精确测定。

叶绿素的荧光现象

叶绿素溶液在透射光下呈绿色，而反射光下呈红色的现 象。
三、实验材料与试剂

实验材料：

绿色植物叶片 UV-1700分光光度计；天平；剪刀；打孔器 ；研钵；移液管；漏斗；量筒；培养皿；滤 纸；95%乙醇；石英砂；CaCO3；醋酸铜
根系POD活性的测定）------------------------------------12学时
实验五 改良半叶法测定植物光合速率（选做）--------4学时
实验六 谷类种子萌发时淀粉酶活性的测定（选做） --4学时
实验一 植物种子生活力的快速测定 (TTC法、染料染色法)



种子生活力：是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的 生命力。没有生活力的种子是死亡的种子，不能萌发。 种子寿命：种子从发育成熟到丧失生活力所经历的时间。 种子寿命既与植物种类有关，也与贮藏条件（种子含水量、 贮藏温度）有关。
密闭容器中加入一定 量碱液[一般用Ba(OH)2]， 并悬挂植物材料，则植 物材料呼吸放出的 CO2 可为容器中Ba(OH)2所吸 收，然后用草酸滴定剩 余的Ba(OH)2，从空白和 样品二者消耗的草酸溶 液之差，可计算出呼吸 释放的CO2量
具体反应式：
Ba(OH)2+CO2 Ba(OH)2+H2C2O4
+5%红墨水→室温, 60 min→检查
100半粒煮沸5 min 注意：胚部着色（红色）很浅或不着色者为生活种子，胚与胚乳着色程度相当者为死种子。 4、作业：计数活种子数，计算活种子的百分率。
实验一 植物种子生活力的快速测定 (TTC法、染料染色法)
实验一 植物种子生活力的快速测定 (TTC法、染料染色法)


6 、叶绿素定量测定
稀释叶绿素
取5号试管醇提取液5ml转入50ml容量瓶中（或更大， 视浓度而定），再加入乙醇定容至50ml。
测量光吸收
利用722分光光度计或UV1700分光光度计，分别测定 叶绿素提取液在645nm和663nm下的吸光度。
实验原理

叶绿素提取液中同时含有叶绿素a和叶绿素b， 二者的吸收光谱虽有不同，但又存在着明显的 重叠，在不分离叶绿素a和叶绿素b的情况下同 时测定叶绿素a和叶绿素b的浓度，可分别测定 在663nm和645nm（分别是叶绿素a和叶绿素b 在红光区的吸收峰）的光吸收，然后根据 Lambert-Beer 定律，计算出提取液中叶绿素 a 和叶绿素b的浓度。 A663=82.04Ca+9.27Cb （1） A645=16.75Ca+45.60Cb （2）

一、植物生理学实验的基本要求

重视培养学生的实际操作技能，不片面追求实验数据的准 确性，培养学生实事求是的科学态度。对一些不能开设的 实验，通过演示实验的方式，拓宽学生视野，完善实验内 容。
学生都应参加实验实习环节，选作部分实验，了解植物生 理的主要测试技术，在教师的指导下，独立或团队操作， 完成实验内容并用所学的知识，综合分析，写出实验报告， 解释有关现象并讨论实验结果。实验课程单独考核，单独 记成绩。
植物生理学实验
西南科技大学生命科与工程学院
一、植物生理学实验的基本要求

植物生理是实践性很强的学科，学生必需通过实验、 实习才能加深对理论课的理解，并为后续专业课的学 习打好基础，同时，通过实验、实践可以提高学员观 察问题和解决问题的能力，提高学员的动手能力及独 立思考、分析问题的能力； 在实验课中要通过实例论述论证，让学生认识到实验 的重要性，培养学生对实验课的兴趣；系统介绍植物 生理的一般研究方法和基本技术；
[实验要点]
1、种子要先软化； 2、种子要沿种胚纵切为两半； 3、显色时要使漂浮的种子全部浸入试剂中； 4、TTC见光易分解，需在暗条件下保温染色； 5、结果观察主要是看胚部的颜色变化。
实验一 植物种子生活力的快速测定 (TTC法、染料染色法) [实验结果分析]

比较两种种子活力的高低 比较分析两种方法测定结果的差异 植物种子活力测定的其它方法
正常性种子：水稻、玉米、小麦等种子（1-3年）
短寿命： 柳树种子（12h）
长寿命： 莲子（400年） 贮存条件：低温、低湿，保存时间长
实验一 植物种子生活力的快速测定 (TTC法、染料染色法)
[种子生活力检测评估方法]



(1) 还原力：呼吸→NADH → 还原TTC，胚呈红色。 (2) 原生质着色：活种子不易着色，原生质膜具有选择透性。 (3) 呼吸释放CO2，pH下降，酸碱指示剂显色。 (4) 细胞中的荧光物质：紫外照射发蓝、蓝紫色荧光。 (5) 外观目测法：用肉眼观察玉米种胚形状和色泽。凡种胚凸出或皱缩、 显黑暗无光泽的，则种子新鲜，生活力强，可作生产用种。