植物生物技术:利用生物系统,活生物体或者其衍生物,为特定用途而生产或改变产品或过程的技术应用;植物生物技术包括:植物组织培养、植物细胞工程、植物基因工程
再分化:植物成熟细胞经历了脱分化之后,即形成愈伤组织之后,由愈伤组织再形成完整植株的过程
细胞全能性:一个完整的植物细胞拥有形成一个完整植株所必须的全部遗传信息
继代培养:组织培养中,培养物(细胞、愈伤组织、器官、试管苗等)培养一段时间后,为了防止培养的细胞团老化、或培养基的养分利用完而造成营养不良及代谢物过多积累毒害等的影响,要及时将其接种到新鲜培养基中,进行继代培养,以使培养物能够顺利地增殖、生长及分化,再生完整的植株体细胞无性系变异:一个体细胞无性系在培养过程中出现的不同于原始无性系的表现
外植体:植物细胞组织培养中,由活体植物体上提取下来的,接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等均称为外植体
细胞悬浮培养:是指将游离的单细胞或细胞团按照一定的细胞密度悬浮在液体培养基中进行培养的方法。
可提供同步分裂的,增值快速的大量细胞,可用于工业化生产
体细胞杂交:体细胞完全不经过有性过程,只通过体细胞融合制造杂种的方法称为体细胞杂交。
在植物中指原生质体融合,为克服植物有性杂交不亲和性,打破物种之间生殖隔离,扩大遗传变异提供了一种有效手段
遗传转化:将外源基因转移到植物体内稳定地整合表达与遗传的过程;建立稳定高效的转化体系是先决条件
基因克隆:从广义上讲,克隆是指一个细胞或一个生物个体无性繁殖所产生的后代群体;通常所说的基因克隆是指基于大肠埃希菌(E. coli)的DNA 片段(或基因)的扩增,主要过程包括目标DNA的获得、重组载体的构建、受体细胞的转化以及重组细胞的筛选和繁殖
组培发展的三个阶段
探索阶段奠基阶段快速发展阶段
体细胞胚胎发生特点
1)具有明显的两极性
2)遗传的稳定性
3)发生数量大增殖率高
4)生殖隔离
细胞悬浮培养中震荡的作用
1)使愈伤组织破碎成小细胞团和单细胞2)使细胞团和单细胞均匀地分布于培养基3)促进空气交换
组培中脱毒苗的检测方法
1)指示植物法
2)抗血清鉴定法
3)电子显微镜鉴定法
4)酶联免疫测定法
离体培养小孢子发育途径
1)营养细胞发育途径
2)生殖细胞发育途径
3)营养细胞和生殖细胞并进发育途径
4)花粉均等分裂途径
分离原生质体的三种常用酶
纤维素酶半纤维素酶果胶酶
细胞增殖的测定指标
1)细胞鲜重:
2)细胞干重测定
3)细胞密实体积
5)细胞计数
载体的条件
1)具备独立复制能力
2)具备多个限制酶切位点
3)具有遗传表型或筛选标记
4)有足够的容量以容纳外源DNA片段5)可导入受体细胞杂种细胞鉴定方法
1)形态学鉴定方法
2)细胞学鉴定方法
经典细胞学
分子细胞学(基因组原位杂交GISH)3)同工酶鉴定方法
4)分子生物学鉴定方法
RFLP RAPD AFLP SSR
植物组织细胞导入外源基因方法
1)农杆菌介导法
2)基因枪法
3)花粉管通道法
4)显微注射法
5)电击法
6)聚乙二醇法
非PCR与PCR依赖的DNA分子标记技术1)非PCR依赖的分子标记
(基于Southern 杂交技术的分子标记):限制性片段长度多态性标记RFLP
原位杂交
2)PCR依赖的分子标记:
随机扩增多态性DNA标记RAPD
DNA扩增指纹印记DAF
简单序列重复标记SSR
随机引物聚合酶链式反应AP-PCR
扩增片段长度多态性标记AFLP
克隆目的基因连接到载体上时筛选重组DNA的方法
1)生物芯片技术
2)cDNA微点阵
3)基因文库的筛选
4)插入式或技术
5)T-DNA标签法
6)转座子标签法
7)图位克隆法
8)电子克隆
9)依据序列同源性克隆基因。