实验用品
器材: 一次性采血针、消毒液、消毒棉签、 洁净载玻片 、推片
试剂: Wright's（瑞氏）染液
【操作】 1 ．采血 2 ．制作涂片 3 ．干燥涂片 4 ．标记涂片 5 ．染色 6 ．观察结果
皮肤采血法（毛细血管采血法）
部位：WH推O 荐中指或无名指尖内侧为宜 ，耳垂采 血受温度影响大；半岁以下拇指或足部，特殊人 员视情况而定。 采血步骤及注意事项：应严格实行一人一针制； 穿刺的深度的适当，切忌用力挤压，以免混入组 织液，影响检验结果。用消毒干棉球擦去第一滴 血，以后流出的血液可以使用。
血涂片制备与染色
【目的】 掌握血涂片的制备和染色方法。
【原理】 将一小滴血液均匀涂在玻片上，呈单层 紧密分布，制成薄血片。用含天青 B和伊红的 Romannowsky类染料进行染色。细胞中的碱性物质 如RBC中的血红蛋白及嗜酸性粒细胞胞质中的嗜酸 性颗粒等与酸性染料伊红结合染成红色；细胞中 的酸性物质如淋巴细胞胞质及嗜碱性粒细胞质中 的嗜碱性颗粒等与碱性染料亚甲蓝结合染成蓝色； 中性粒细胞的中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝 均可结合，染成淡紫红色。
? 染色环境偏酸：则红细胞和嗜酸性颗粒偏红，白细胞核 呈浅蓝色或不着色，染色过酸 pH<3.5 时，则呈现一片红色， 白细胞中除嗜酸性颗粒外均不着色。
? 染色环境偏碱：则所有细胞呈灰蓝色，微偏碱者红细胞 暗红、白细胞颗粒深暗。嗜酸性颗粒可染成暗褐色甚至黑 紫色或蓝色。中性颗粒也偏粗染成紫黑色，血膜过厚的地 方呈绿色。
? 染ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ不能过少，以防蒸发沉淀。
? 冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防止染料 ? 沉着。冲洗时间也不能长。
? 染色过淡，可复染。
? 染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色。
【染色结果评价】
? 正常情况：血膜外观呈淡琥珀色。在显微镜下红细胞染
成粉红色，在厚薄均匀处略有碟状感。白细胞胞质中的颗 粒能显示出各种细胞的特有色彩，细胞核染紫红色，核染 色质结构清楚。
勿冲洗再加 瑞氏染色Ⅱ液 5-8 滴后将Ⅰ液和 Ⅱ液充分混匀静置 10分钟
直接流水冲洗至无浮色 （切勿先倒掉染液 ）
涂片经水洗干燥后用油镜 分类计数 100个白细胞
123
四李
[ 瑞氏染色原理]
细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲 和作用，各种细胞成分化学性质不同，对各种染料的 亲和力也不一样。因此，用本染料液染色后，在同一 血片上，可以看到各种不同的色彩，例如血红蛋白， 嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染 粉红色，称为 嗜酸性物质 ；细胞核蛋白和淋巴细胞胞 浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色， 称为嗜碱性物质 ；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝 均可结合，染淡紫色，称为 中性物质 。
注意：血滴大，速度快、角度大 ---- 血膜厚 一张良好血涂片的标准是：厚薄适宜、头体尾分 明、细胞分布均匀、边缘整齐、两侧及两头留有 空隙，血膜长度约 4厘米。
片涂血良不
4. 标记
涂片干燥后用铅笔在血涂片的头 部写上姓名和编号
123
四李
5. 血涂片染色
涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液 5-8 滴 覆盖整个血膜 1分钟
6. 血涂片的观察
低倍镜观察 1. 染色情况( 满意、偏酸、偏碱） 2. 细胞分布情况 油镜下分类计数：体尾交界处。 油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。（共计
数100个白细胞）
123
四李
体尾交界处
理理想想区区域域
细胞重叠
细胞太稀
各类成熟白细胞的形态学：
? 中性粒细胞（Ne）：在瑞氏染色血涂片上呈圆形，直 径10～13μm，胞浆染粉红色，核形一叶（杆状核）至 五叶不等，以三叶者多见，染成深紫红色，胞浆中有 许多细小均匀紫红色颗粒。
染色步骤
? A、待涂片在空气中完全干燥 后，滴加数滴Wright's染液 盖满血膜为止，染色 1 min 。
? B、滴加等量或稍多的缓冲液， 混匀，染色 5-10 分钟。
? C、用流水冲去染液，吸水纸 吸干，镜检。
【质量控制】
? 血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落 .
? 染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关，一 般染液淡、染色时间长些效果好。
? 嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性粒细胞稍大，胞核多 为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红 色，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色 时呈桔红色，有折光性。
? 嗜碱性粒细胞（Ba）：胞浆中含有大小不等的嗜碱 性颗粒，瑞氏染色时呈兰黑色。于光学显微镜下常 见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因 功能活动而脱颗粒所致；核呈淡紫红色常看不清， 呈杆状或分叶状。
涂片技术 是制备血液样品最常用的技术。 将血液样品制成单层细胞的涂片标本，染色后可 对血液中各种细胞形态进行形态观察、细胞计数、 细胞大小测量等工作。
血涂片制备
推片 血液
载玻片
一张满意的血涂片应厚薄均匀
头
体
尾鲜明
四李
涂片干燥后用铅笔在血涂片的头 部写上姓名和编号
B123
方法与步骤1：采血，挤出第二滴血置于载玻片的右侧
图 瑞氏染色原理示意图
瑞氏- 吉姆萨染色
【原理】 将瑞特染料和吉姆萨染料按一定比例混合
后对细胞进行染色，其染色原理同瑞特和吉姆 萨染色法，但染色效果更佳，因为其综合了瑞 士和吉姆萨染色法的优点。
【方法学评价】
瑞氏染液和吉姆萨染液对细胞进行染色时有 各自的显色特征，前者对细胞质和颗粒着色较好， 后者对细胞核结构显示清晰。因此将二者结合， 能取长补短、集中优势，用该混合染液对血细胞 进行染色，其细胞核、细胞质和细胞内颗粒均着 色鲜艳，对比鲜明。瑞氏 - 吉姆萨混合染色法是临 床上广泛使用的方法。
? 淋巴细胞（Ly ）：胞体呈圆形，直径介于6～15μm之间， 在成人血涂片中以小淋巴细胞为多见，直径6～9μm， 核大呈深紫色致密而浓染，胞浆量极少；大淋巴细胞 胞浆量较多，呈清澈的淡蓝色，可见少量嗜苯胺蓝颗 粒，胞核圆或椭圆，常偏向细胞一侧，染色较深。
2. 再取另一张边缘光滑的双凹片，斜置于血滴的前缘，先 向后稍移动轻轻触及血滴，使血液沿玻片端展开成线状。
两玻片的角度以 30-45 °为宜，轻轻将双凹片向 前匀速推进，即涂成血液薄膜。
30~45°
3. 成片，干燥
一张满意的血涂片应厚薄均匀
头
体
尾鲜明
四李
[ 血涂片质量评价]
均匀、厚薄、头体尾、边缘、两侧