学 院: 专 业: 学号: 姓名:―――――――――――――装――――――――――――订――――――――――――线――――――――――――――题号 一二 三 四 五 六 七 八 总成绩得分得分一、名词解释（共20分，每小题4分）1. 无菌操作：培养基经灭菌后，用经过灭菌的接种工具在无菌条件下接种含菌材料于培养基上，这一操作称为无菌操作。
2. 培养基：是人工配制的能满足微生物生长繁殖和积累代谢产物的营养基质。
3. 假菌丝: 酵母生长旺盛时，出芽形成的芽细胞尚未脱离母细胞又长出了新芽，容易形成成串的细胞。
如果各细胞之间连接处面积小于细胞直径，形成的这种藕节状的细胞串称为假菌丝。
4. 大肠菌群: 大肠菌群系指一群在37℃、24h 能发酵乳糖，产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
5. 细菌菌落总数: 指被检样品通过一定的处理方法，培养一段时间后，每毫升或每毫克样品中所含细菌的菌落数。
由于经过适当稀释的样品中每个细胞可形成一个单菌落，所以菌落数即是细菌活菌总数。
得分二、判断题（共10分，每题1分）1．无菌吸管上端塞入棉花的主要目的是为了防止菌液吸入口中（ A ）。
A.错B.对2．稀释平板计数时，细菌，放线菌，真菌的计数标准是选择每皿中菌落数在30-300个的稀释度进行计数（ A ）。
A.错B.对3．为了满足微生物对微量元素的需要，配制培养基所用的水最好使用自来水（ B）。
A.错B.对4．实验室通常使用血球计数板测酵母菌的总菌数或霉菌的孢子数（ B ）。
A.错B.对5．浸油的油镜镜头可用软的卫生纸擦净（ A ）。
A.错B.对6．稀释平板计数通常采用的是二倍稀释法（ A ）。
A.错B.对7．使用手提灭菌锅灭菌后，为了尽快排除锅内蒸汽，可直接打开排气阀排气（ A ）。
A.错B.对8．镜台测微尺每小格的实际长度是10微米（ B ）。
A.错B.对9．用血球计数板计数时，任数5个大方格(80个小格)的菌数即可（ A ）。
A.错B.对10．测微生物的细胞大小时，需要校正的是镜台测微尺每格的实际长度（ A ）。
A.错B.对15分，每空0.5分）1. 检查乳品和饮料是否含有大肠杆菌(E.coli)等肠道细菌，可采用___伊红美兰____培养基，在这种培养基平板上___能分解乳糖产酸的菌_（大肠菌群）_____会形成具有___金属_______光泽的紫黑色小菌落。
学 院: 专 业: 学号: 姓名:―――――――――――――装――――――――――――订――――――――――――线――――――――――――――2．测定酵母细胞出芽率时，芽体的标准是 小于细胞的1/2 ，如果视野中的芽体数为15个，细胞数为60个，则出芽率为 25% 。
3．请写出以下菌种的拉丁学名: 大肠杆菌 E.coli(Escherichia coli ) ，枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis ，酿酒酵母 S. cerevisiae （Saccharomycescerevisiae ） 。
4．显微镜的光学系统由__目镜______、___物镜___、集光器、彩虹光阑、反光镜和光源组成。
5. 培养基按其来源主要分为 天然 培养基，半合成 培养基和 合成 培养基。
6. 革兰氏染色反应与细菌细胞壁的__成分____和___结构____有关。
革兰氏染色的一般过程主要包括 制片 ，固定, 结晶紫初染1分钟 ， 碘液媒染 ， 95%乙醇脱色30s ， 番红复染30s ，水洗和镜检等步骤。
在操作过程中， 最关键的步骤是 脱色 。
经革兰氏染色后, 大肠杆菌被染成 红 色， 八叠球菌被染成 紫 色。
7. 显微测微尺主要由 目镜 测微尺和 镜台 测微尺组成， 在进行细胞大小测定之前, 目镜 测微尺要先进行标定。
8. 在细菌生理生化实验中, 三糖铁高层琼脂中含有的糖主要有葡萄糖, 蔗糖, 乳糖三种糖。
其中， 葡萄糖 是另外两种糖含量的1/10倍， 其斜面含有指示剂酚红, 它在pH 小于6.8时为黄色，大于8.4时为红色，伤寒沙门氏菌在该培养基中生长一定时间后, 其斜面的颜色为 红 色，大肠杆菌为 黄 色。
9. 利用麦氏计数板计数时， 在麦氏计数板一个滴加稀释10倍的样品, 按对角线方位, 左上, 右上, 左下, 右下四个大格的细胞数分别为64个, 100个, 80个, 96个. 则每毫升菌液中所含的酵母细胞数为 1.36×108。
得分四、选择题（共20分 每题1分）1. 微生物实验室对培养皿的灭菌常采用（ C ）。
A．间歇灭菌，两次， 100 ℃，每次 1 小时B. 常压灭菌， 100 ℃， 1小时C. 干热灭菌， 140 ℃， 3-4小时D. 巴斯德灭菌， 60 ℃， 1小时2. 霉菌菌丝观察主要利用（ C ）作介质。
A.无菌水B.生理盐水C.乳酸苯酚油D.二甲苯3. 肉汤培养基用来培养（ C ）。
A.酵母菌B.霉菌C.细菌D.放线菌4. 在使用显微镜油镜时，为了提高分辨力，通常在镜头和盖玻片之间滴加（ C ）。
A.二甲苯B.水C.香柏油D.无菌水5．高压蒸汽灭菌的工艺条件是（ A ）。
A.121℃/20minB.115℃/20minC.130℃/20minD. 170-180 ℃/20min6. 明胶液化实验，明胶的水解是由于细菌所产生的（ C ）的作用。
A. 脂肪酶B. 纤维素酶C. 蛋白酶D. 淀粉酶7. 新玻璃器皿在清洗之前，应先将其浸泡在（ C ）中数小时，然后再用自来水清洗干净。
A. 10%氢氧化钠溶液B. 浓盐酸溶液C. 2%盐酸溶液D. 浓硫酸溶液8. 下列霉菌中有足细胞的霉菌为（ D ）。
A. 毛霉B. 青霉C. 根霉D. 曲霉9．半固体培养基的主要用途是（ C ）。
A.检查细菌的运动性B.检查细菌的好氧性C.A.B.两项D.都不对10. 使用手提式灭菌锅灭菌的关键操作是（ A ）。
A.排冷气彻底B.保温时间适当C.灭菌完后排气不能太快D.A-C学 院: 专 业: 学号: 姓名:―――――――――――――装――――――――――――订――――――――――――线――――――――――――――11．酵母菌水浸制片的关键操作是（ C ）。
A.菌丝要分散B.菌丝首先要用50%的乙醇浸润C.盖盖玻片不能有气泡D.A-C12．干热灭菌过程中如发现干燥箱出现故障，里面冒出黑烟，应采取（ B ）。
A.立即打开箱门 B.立即关掉电源 C.泼水降温 D.A-C13．下列哪些微生物，产生的抗生素种类最多（ B ）。
A ．细菌 B ．放线菌 C ．霉菌 D ．病素14． 在细菌总数的测定中，样品10-1稀释度制作的平板上的菌落数为多不可计，10-2稀释度制作的平板上的菌落数为200个，10-3稀释度平板上的菌落数为50个，则该样品的菌落总数应报告为（ A ）A ．2.0×104B ．5.0×104C ．3.5×104D ．4.0×10415．下列培养基中， 哪种培养基不是培养酵母常用的培养基（ D ）。
A. 麦芽汁培养基 B. 马铃薯葡萄糖琼脂培养基 C. YEPD 培养基 D. 牛肉膏蛋白胨培养基16．常用的消毒酒精浓度为（ A ）。
A.75% B.50% C.90% D.95% 17．在下列微生物中（ B ）属于革兰氏阳性细菌。
A. 大肠杆菌 B ．金黄色葡萄球菌 C ．痢疾杆菌 D ．黑根霉18．半固体培养基的琼脂加入量通常是（ A ）。
A. 0.8%-1.0%B.0.2-0.5%C.0.1-0.3%D.2% 19.“PDA ”表示( A )。
A.马铃薯葡萄糖培养基B.高氏培养基C.肉汤培养基D.察氏培养基 20．进行简单染色使用的染色液通常是（ D ）。
A.复红B.蕃红C.结晶紫D.A-C 均可得分五、问答题（共35分）1. 简要描述微生物菌种保藏的原理及常用方法?(4分)答：保藏菌种的基本原理，是使微生物的代谢活动，降到极低程度，处于休眠状态。
（1分）一般采用低温、干燥和隔绝空气来达到此目的。
（1分）菌种保藏的方法包括：（2分）（1）斜面低温保藏法（2）矿物油（液体石蜡）斜面保藏法（3）沙土管保藏法（4）液氮保藏法。
（5）真空冷冻干燥保藏法2．以大肠杆菌和产气肠杆菌为例，说明其在VP实验与MR实验中的结果为什么刚好相反？（6分）答：多数细菌能分解葡萄糖，但分解葡萄糖的途径和产物不完全相同（1分）。
例如大肠杆菌和产气肠杆菌能分解葡萄糖产生丙酮酸，若继续代谢还能生成其它有机酸和醛，醇等化合物（1分）。
其中，大肠杆菌所产生的酸能使培养液的pH值降到4.2或更低，可使甲基红指示剂变成红色，并至少持续4天之久（1分）。
和MR试验一样，V-P试验也是检验微生物利用葡萄糖产酸的能力。
产气肠杆菌利用葡萄糖产生丙酮酸后，可进一步使一部分丙酮酸脱羧生成中性的乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在强碱环境中，能被空气中的氧气氧化，生成双乙酰，双乙酰与蛋白胨中的精氨酸的胍基作用生成红色化合物。
此即为V-P试验阳性。
当在试管中加入萘酚时，可以促进反应的进行（2分）。
对于一种微生物，MR试验阳性，V-P反应一定阴性，反之亦然。
（1分）3．以青霉和曲霉为例, 说明小室培养的操作过程。
（5分）答：曲霉和青霉的小室培养接种：取一培养皿，内放一层吸润20%甘油（可以用水代替）的滤纸，放U形玻棒。
（1分）取一干燥无菌的载玻片和盖玻片，于载玻片的一边滴加融化的PDA（或察氏培养基），点种孢子，并将盖玻片盖与其上（2分）；要求中央的培养基直径不大于0.5cm，盖、载玻片间距离不高于0.1mm。
（1分）然后将制好的载片放入培养皿中的玻棒上，盖好皿盖，30℃正置培养。
可以在学 院: 专 业: 学号: 姓名:―――――――――――――装――――――――――――订――――――――――――线――――――――――――――培养不同时间直接置干燥系物镜下观察（1分）。
4．酵母测定死亡率的原理，方法及计算公式。
（6分）答：死亡率测定的原理：活的微生物，由于不停的新陈代谢，使细胞内氧化还原值低，且还原能力强（1分）。
当某种无毒的染料进入活细胞后，可以被还原脱色；当染料进入死细胞后，这些细胞因无还原能力或还原能力差而被着色（1分）。
在中性和弱酸性条件下，活的细胞原生质不能被染色剂着色，若着色则表示细胞已经死亡，故可以此来区分活菌和死菌（1分）。
方法：取0.05%美蓝液一滴，置载玻片中央，然后取酵母液少许加入美蓝液中混匀，染色2~3分钟，加盖片，于高倍镜下进行观察，并计数已变蓝的细胞（可计5~6个视野的细胞总数）。
（2分） 计算公式：（1分）5．硝酸盐利用试验结果观察时，若使用淀粉液、HCl 、KI 和锌粉检测结果，简述检测过程。