加。
▪ 共聚焦：由于照明针孔与探测针孔 相对于物镜焦平面是共轭的，焦平 面上的点同时聚焦于照明针孔与探 测针孔，焦平面以外的点不会在探 测针孔处成像。
▪ 可实现连续扫描，可动态记录变化
——聂拾进
荧光显微镜原理
▪ 荧光原理: 某些物质经一定波长的光(如紫外光)照射后，物质中的分子被激活，吸收能 量后跃迁至激发态;当其从激发态返回到基态时，较大部分则以光能形式辐射出来，由 于能量没能全以光的形式辐射出来，故所辐射出的光的波长比激发光的要长，这种波长 长于激发光的可见光就是荧光。
荧光显微镜的组成
▪ 1、高压汞灯：能发射很强的紫外和蓝紫光足以激发各类物质 ▪ 2、滤色系统:由激发滤板和压制滤板组成
a、激发滤板:提供一定范围的激发光 b、压制滤板:完全阻挡激发光通过，提供相应波长范围的荧光 ▪ 3、反光镜:一般采用平面反光镜 ▪ 4、聚光镜: 用石英玻璃或其他透紫外光的玻璃制成 ▪ 5、物镜和目镜：最好使用消色差物镜和低倍目镜
组织样品中的荧光物质，受到激发 后发出的荧光经原来入射光路直接反向 回到分光镜，通过探测针孔时先聚焦， 聚焦后的光被光电倍增管(PMT)探测收集， 并将信号输送到计算机。
计算机将被探测点显示在计算机屏 幕上，扫描系统在焦平面上扫描，从而 产生一幅完整的共聚焦图像。
激光扫描共聚焦显微镜特点
▪ 成像清晰：在这个光路中，只有在 焦平面的光才能穿过探测针孔，焦 平面以外区域射来的光线在探测小 孔平面是离焦的，不能通过小孔， 造成非观察点的背景呈黑色，反差增
荧光显微镜原理
基本原理：利用一定波长的激发光对样品进行激发，使之产生一定波长的荧光， 从而用于对样品结构或其组分进行定性、定位、定量观察检测。
荧光显微镜工作原理
高压钠灯
滤镜分光
紫外光 蓝光 绿光
激发
存在荧光物 像
荧光显微镜的种类
透射式荧光显微镜：激光光源通过 落射式荧光显微镜：激光从物镜向下落射到标本表 聚光镜穿过标本材料来激发荧光的 面即用同一物镜作为照明聚光器和收集荧光的物镜
激光光源
显微镜光学系统 扫描装置
检测系统
计算机控制系统
▪ 激光扫描共聚焦显微镜由显微镜光学系统，激光光源，扫描装置和检测系统构成，整套仪 器由计算机控制(包括数据采集，处理，转换，应用软件)，各部件之间的操作切换都可在 计算机操作平台界面中方便灵活的运行。
激光扫描共聚焦显微镜工作原理
采用激光束作光源，激光束经照明 针孔，经由分光镜反射至物镜，并聚焦 于样品上，对标本焦平面上每一点进行 扫描。