植物细胞固定化的技术

按其支持物可分为两大类： 1.包埋式： 琼脂、琼脂糖、藻酸盐、聚丙烯酰胺


2.吸附式：
尼龙网、聚氨酯泡沫、中空纤维
植物细胞的大规模培养
植物细胞大规模培养方法

悬浮培养
固体化培养

悬浮培养

是一种使组织培养物分离成单细胞接种于液体培
养基中，在保持良好的分散状态下培养并不断扩增
的方法。

在进行细胞培养时，需要提供容易破裂的愈伤组织
进行液体振荡培养，愈伤组织经过悬浮培养可以产
生比较纯一的单细胞 , 而紧密不易碎的愈伤组织就 不能达到上述目的。
悬浮培养
悬浮培养优点：

增加培养细胞与培养液的接触面积，改善营
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养供应

避免细胞代谢产生的有害物质在局部积累而
对细胞自身产生毒害

保证氧气的充分供应等。
悬浮细胞培养的类型有：

成批培养：只有一定的气体交换，营养物质耗尽，细胞和产物一次 性收获。

连续培养：新鲜培养液连续添加，用过的培养液平衡排出，营养物

特点：细胞固定，而培养液循环流动
细胞固定化意义（优点）：

1）细胞生长较慢，有利于次生代谢物的积累。
2）易控制化学环境、收获次生代谢产物。 3）细胞经包埋后受剪切力损伤小。 4）有利于进行连续培养和生物转化。



植物细胞培养的应用

植物细胞含有人类所需的成分，包括 初生代谢物 （蛋白 质、碳水化合物、脂肪等）和 次生代谢物 （多酚类、香 精油、生物碱、树脂等），传统提取分离这些物质由于 资源短缺和需求量的加大，难以满足需求，通过细胞培 养生产植物产品成为解决的有效途径。

1、相差显微镜观察法
细胞质环流，正常细胞核 2、FDA（荧光素双乙酸酯）染色法
由于荧光素不能自由的穿越细胞质膜，而能在活细胞中 积累，但死细胞、破损细胞不能积累。


3、伊凡蓝染色法
不被染色的为活细胞
固定化培养：

将游离的细胞包埋在多糖或多聚化合物制 备成的网状支持物中，培养液呈流动状态， 进行无菌培养的一种技术。
质不断补充，细胞保持在增值最快的对数生长期

封闭式：回收流出的细胞于培养系统中，细胞数目增加 开放式：流出的细胞不回收于培养系统中，但进行细胞收获 半连续培养：新鲜培养液每隔一段时间添加，用过的培养液平衡排 出，营养物质不断补充


细胞培养同步化：
1、物理法
1）体积分选 2）冷处理法 2、化学法
1）饥饿法
2）抑制法
影响悬浮细胞生长的因素：
起始愈伤组织的质量
接种细胞密度 培养条件：方式、温度 继代周期
细胞生长情况分析测定方法：
1、细胞计数：单位体积细胞浓度；
2、细胞体积：培养物离心后测定细胞层所占的体积； 3、细胞鲜重或干重：过滤或干燥后称重 4、有丝分裂指数：有丝分裂细胞占总细胞的百分数
细胞活力测定