#5
若≤ 2 种菌生长，对 每种菌进行鉴定和药 敏试验； 若>2种菌生长，报 告“混合菌群” 100,000 cfu/ml
#4
菌落计数
© Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution
真菌培养
重要病原菌：新型隐球菌，人芽囊原虫 ，皮肤癣菌，和 其他真菌（考虑标本来源和病人情况）
#4 #6
接种后7天内每日观察平皿 ，之后每周两次 光滑菌落＝酵母菌 毛状菌落＝丝状真菌
用通气胶带粘贴平皿的侧面 或两边
#5
将标本研于一滴 10%KOH，加盖玻片后 镜检真菌 © Ellen Jo Baron 2008; Use with proper attribution
抽吸物和组织标本的厌氧培养
#3
#6
CO2中孵 育72小时
注意：不要倾倒
#5
滴一滴沉淀 于巧克力平皿和 血平皿
#4
上下吸取 10次以上 混匀沉淀
© Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution
粪便培养
重要的病原菌：沙门菌、志贺菌、弯曲杆菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、产毒性大肠杆菌&难辨梭菌（在 常规的实验室可能检测不出）
用接种环或棉 签挑取4～5个形 态相同的纯菌 落；需要纯培养
#5 #6
在15min内贴 抗生素纸片
3 1 2
#4
将一根新的拭 子浸泡在悬浊 液中，在试管 壁挤去多于的 液体
将拭子按照3个不同 的方向涂抹3遍，MH 平板上形成一层均一 的接种层
#7
轻轻按压纸 片以确保不 会掉下来
#8
35°C 空气中孵育 16-18小时
#3 #2 #1
从两个独立的皮肤位点采血，每瓶 采集10ml
18小时后传进行次代培养 当培养瓶显示细菌生长时进行 革兰染色和传代培养
35°C 空气中孵育5天 每天检查浊度并翻转培养瓶
革兰阳性球菌→接种血 平皿＋奥普托欣试验
#6
对重要病原菌 进行鉴定 和药敏试验 例如：肺炎链球菌 革兰阴性杆菌→接种血平皿和 麦康凯平皿
Urine Culture尿培养
主要病原菌：大肠埃希菌，变形杆菌，克雷伯菌，其他革兰阴性杆菌，肠球菌，腐 生葡萄球菌，纯的金黄色葡萄球菌
a
b
#2 接种血平皿和麦康凯平
皿
a
b
0.001ml接种环
#3 #1 收集中段尿 注意:
GPC
空气孵育24小时
#6
病人 无症状 有症状但不需 卧床 有症状，性生 活活跃的女性 男性 所有 所有 所有
#1
•用酒精消毒伤口 周围皮肤 •最好的标本是吸取物和组织 •最差的标本是拭子
#2
•接种血平皿和麦康凯平皿 •如果是吸取物或组织，进行 革兰染色，将重要结果通知 临床医生
中孵育48小 时
#3
#5
当检出3种或更多病原菌时，报告“混合菌丛”并 描述性列出假单胞菌，金葡菌，变形杆菌，肠道 革兰阴性杆菌等。
杆菌肽
#9
不要报告
咽炎中非致病菌： • • • • • • •
复方 磺胺
金黄色葡萄球菌 肺炎链球菌 流感嗜血杆菌 卡他莫拉菌
α溶血链球菌 所有革兰阴性杆菌 所有酵母菌
#7
PYR阳性可确证 A群链球菌
#6
β溶血菌落， > 0.5 mm, 对复方磺 胺耐药，对杆菌肽敏感＝A群链球 菌（触酶阴性）
© Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution
#6
将菌落接种至Campy琼脂 或使用滤纸法。微需氧环 境下37-42° C 孵育 72 h
Campy琼脂
革兰染色显示弯曲或螺旋形 的杆菌 弯曲杆菌属
氧化酶阳性、湿润 的米色菌落
#5
血平皿上氧化酶阳性的革兰阴性 杆菌需进一步鉴定 将菌落接种TCBS或含0-6％盐浓 度的肉汤中。
© Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution
巧克力琼脂-置于 CO2孵箱
Bru agar – anaerobic 布氏琼脂-厌氧菌
需氧培养时当3或更多的肠道细菌生长，报告“混合细菌生长”，并且描述性 的列举假单胞菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌、肠道革兰阴性杆菌 © Ellen Jo Baron 2009; Use with proper attribution
#4
CO2中孵育 72h
#5
将重要的革 兰染色结果 尽快通知临 床医生
革兰阴性双球菌或球杆 菌→接种巧克力平皿和 血平皿
例如：肺炎克雷伯菌 © Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution
脑脊液（CSF)培养 主要病原菌：B群β溶血链球菌（新生儿），流感嗜血杆菌（2月-2岁儿童）， 肺炎链球菌，脑膜炎奈瑟氏菌
肺炎克雷伯菌
#4
CO2中孵育 48小时
流感嗜血杆菌 © Ellen Jo Baron 2007; Use with proper attribution
咽部标本培养
杆菌肽
#1
拭子
拭子擦取咽部和 扁桃体。不要碰 触舌头和面颊。
主要病原菌：A群β溶血链球菌。 选择性报告：溶血隐秘杆菌
& SXT 纸片
#2
•革兰阴性杆菌在血平 皿和麦 康凯平皿上均 生长良好 •革兰阳性球菌仅在血 平皿上生长良好
GNR
50,000 cfu/ml 75,000 cfu/ml
尿培养的评估标准 标本类型 清洁留取或留置管留 取 清洁留取 清洁留取 清洁留取 从导尿管中直接留取 外科或膀胱吸取 有争议 有意义的病原菌 CFU/ml 100,000 1-2 种病原菌。>2 种视为污染 100 纯培养的肠杆菌科菌 1000 潜在病原菌 100 个所有种类的潜在病原菌 任何数量（肉汤增菌，厌氧菌） 任何酵母菌
CO2孵育72h
T—M培养基上寻找淋球菌， 血平皿上寻找酵母# 1 营养肉汤中
孵育过夜
D. 女性的阴道拭子
#2
血平皿上次代培养检测 B群链球菌
非病原菌
#1
血平皿上寻找 酵母菌， T-M培养基上寻 找淋球菌
# 1 革兰染色辅助诊断细菌 性阴道病
将拭子在玻片上滚 动制成一个细胞厚 度的涂片；寻找 “线索细胞”
脓 / 吸出物 / 组织
痰
生殖道标本
咽
脓 痰 咽 尿
尿
药物敏感性
体液－特别是滑液 如果清亮且无脓，床旁直接注入血培 关节液中的吞噬细胞很活跃，可 （关节液） 养瓶 在几小时内杀死细菌
血培养
主要病原菌：沙门菌、布氏杆菌、其他革兰阴性杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌 以下菌应视为非病原菌(除非>1次血培养分离出)：芽孢杆菌属、凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌、棒状革兰阳性杆菌
#9
孵育过后，用直尺 或游标卡尺测量抑 菌圈的直径，以用 毫米为单位 6mm＝无抑菌圈
# 10
参照CLSI的标 准解读不同菌 对不同药物的 药敏结果
#2 #1
•用酒精消毒皮肤后或者在手术时 采集标本 •将抽吸物或组织置于厌氧转运小 玻璃瓶中 •拭子不能用于厌氧培养 •将体液置于血培养瓶和ACD管中
#3
•细胞离心机离心 体液
#5
卡那霉素 万古霉素 粘菌素
重要厌氧菌进行鉴定&药敏试验
#4 #6
接种平皿、革兰染色和厌氧菌专门 的药敏试验
•在CO2孵箱中将 BAP & Mac 孵育 48小时 •在厌氧环境中孵 育5天（不要暴露 于空气中48小 时）
#3 #1
粪便标本采集后30 分钟内进行接种或 置于cary-blair运输 培养基中
接种血平皿，麦康凯平皿，Hektoen 或DCA，若怀疑弧菌则还接种TCBS 平皿。37 ° C 空气孵育48h
#2
选择血性或脓性的部 分进行接种
#4
麦康凯、HEK或DCA平皿上不利用乳 糖的革兰阴性杆菌需进一步鉴定。
生殖道标本培养
主要病原菌：淋病奈瑟菌，滴虫，酵母菌&女性的细菌性阴道病综合征，孕妇携带的B群β溶血链球菌
A. 女性的子宫颈或肛拭子
B. 男性的尿道拭子
#1
血平皿& Thayer-Martin平皿
# 1 接种Thayer-Martin培养基&革兰染色
T-M培养基上的淋球菌
血平皿上的酵母菌
#2
CO2中孵育48小时
主要致病菌: 金黄色葡萄球菌、化脓链球菌、其他ß-溶血链球菌、铜绿假单胞菌、其他革兰阴性杆 菌、 梭状芽孢杆菌、 梭菌属、拟杆菌属、其他厌氧菌 非致病菌: 凝固酶阴性葡萄球菌、少量棒状革兰阳性杆菌 .如果为组织，在无菌的小盘上将 其捣碎，然后在含硫肉汤中将其 研磨成匀浆 •将研磨后的组织接种于BAP, Mac, Bru, BBE, CM肉汤, & LKV (可选择) •革兰染色&将重要结果报告 给医生
血
脑脊液
标本类型
血 脑脊液 粪便
运输培养基
直接将标本注入含 SPS 的血培养基 无－室温保存
备注
从两个不同的部位采集足量的两 份血（每份血最少 10ml） 大于 1ml 需要离心
粪便
生殖道标本
如果运输时间超过 2 小时，使用 Cary-Blair 培养基（培养沙门菌 & 志 甘油缓冲的盐水最适于霍乱弧菌 贺菌） 如果运输时间超过 2 小时，使用含碳 可 在 床 旁 直 接 接 种 于 Thayer的 Amies 或 Stuart’s 培养基 Martin 培养基 如果运输时间超过 8 小时，使用 Amies 或 Stuart’s 培养基 无－肺炎链球菌在 2 小时内死亡 A 群链球菌在干燥环境下生长良好。 或使用 Stuart’s 培养基 如果运输时间超过 2 小时，冷藏保存 可以使用特制的硼酸管 冷藏保存不会检出肺炎链球菌