环境监测
应按相关国家标准制定完整的验证和环境监测 SOP；
环 境
监测项目、频率及超标结果应有书面程序； 监测项目应涵盖到位，如悬浮粒子、浮游菌、 沉降菌、表面微生物、物理参数（温湿度、换 气次数、气流速度、压差、噪声等）； 环境监测按药品洁净实验室微生物监测和控制 指导原则（附录）进行。
环境监测
与国际标准接轨
从终产品检验向过程控制转变
与GMP的对接
实验室控制系统一般要求
微生物检验技术要求
人员资质及培训要求 设施 无菌及微生物限度检验 等实验区域 教育背景、培训教育
内容
适宜、充分的设施条件 无菌及微生物限度检验等实验区域； 菌种处理、微生物鉴别和阳性对照室； 抗生素微生物检定室； 培养室及其他功能间 。 隔离器、层流柜、灭菌器、过滤器、培养箱 灭菌和消毒方式需经验证合格方可正式使用 按统一操作程序制备菌株保证结果一致性 培养基的制备 、贮藏 、质量控制实验 总数、控制菌、非无菌产品检查频次、内毒素
环 境
实验室的布局和运行 具有开展各类实验独立设置的洁净室；
环 境
相应的功能区域 阳性菌室 培养间 实验结果观察区 准备间 样品间 标准菌种储藏间 阳性物处理间及文档处理等
实验室的布局和运行
无菌室 B级背景下的A级单向流区域或D级保护下 的隔离器条件进行； 微生物限度检查室 不低于受控环境下的B级单向 流区域； A级和B级区域的空气供给应通过终端高校空气过 滤器（HEPA）。
环 境
清洁、消毒和卫生
理想的消毒剂 可杀死广泛的微生物；低毒、无害；不腐蚀或污染设备 ；有清洁剂的作用；稳定、起效快；不易被有机物灭活 ； 残留少； 价格低。 主要消毒剂类型 酚类；季铵盐类；次氯酸钠；二氧化氢；过氧化氢；过乙 酸及过乙酸/过氧化氢混合物；戊二醛/甲醛；醇类等。 70%酒精喷雾
金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌
培 养 基
-促生长能力 -抑制能力 -指示能力 -测试菌株 CMCC 与对照培养基进行比较
监管及实施中常见问题
培养基的重要性？ 配制方法及效期的确认？ 质量控制？ 操作规范性？
应有对试剂进行接收、检查和贮存的程 序； 试 剂 关键试剂在开启和储存过程中，对每批 试剂的适用性进行验证； 管理控制 供货商的评估、质量检测、台帐等 保存和记录相关信息。
选择：根据检验目的选择适宜方法。
检 验 方 法
确认：药典方法、标准方法应进行方法 适用性确认； 验证：新方法使用前进行替代方法的验 证（附录-指导原则）； 注意对商业系统的试剂盒等检测方法和 数据的确认。
方法适用性
检 验 方 法
检验程序或产品发生变化影响检验结果 时，应重新适用性实验。 无菌检查采用的方法和条件应与方法适 用性实验确认的方法一致。 无菌试验中若需使用表面活性剂、灭活 剂、中和剂等，应证明其有效性，且对 微生物无毒性。
检验方法的验证 （validation of compendial procedures ）
检 验 方 法
方法的确认
（verificationd of compendial procedures ）
方法的转移
（transfer of analytical procedures）
2015CP：药品微生物检验替代方法验证指导原则
外部能力验证：CNAS、各系统组织的活 动…
监管及实施中常见问题
实际重视程度？ 遵守规范的意识？ 人员及设备配置？ 培训实效？
培养基的制备 处方、配制、方法、验证、贮存等一般要求 配制培养基、商品化培养基
培 养 基
配制记录、生产记录等要求
培养基的无菌保证和质量保证
除菌方法、验证、 质量保证等要求
强调pH值范围、容器材质 对培养基质量的影响
（一般为玻璃容器）。
培养基的贮存 标示、贮存等一般要求 配制培养基、商品化培养基
标记（信息）等
培 养 基
贮藏、注意事项
温度（高压容器中、0℃及以下）、固体培养基融化 再用（一般水浴或流通蒸汽，1次，8h内）。
培养基的作废及处理原则性要求。
培养基的质控 建立质量控制程序 常规检控pH、适用性试验
框架
样品 设备 环境 菌种 试剂 培养基 人员
相关的教育背景； 上岗前培训、考核； 生物安全方面培训，保证安全； 不断地继续培训，保证知识与技能不断 地更新； 熟悉、规范理解和执行； 能力评估-通过质量控制、能力验证等； 培训、考核等档案。
人 员
能力评估
人员比对
人 员
内部质量控制
留样再测 标准菌株等
环 境
2010版GMP：非最终灭菌产品各工序关键操作环境应为B级背景下 的A级。 无菌检查的洁净环境不得低于生产关键区的洁净环境要求 ！
实验室的布局和运行 生物二级试验室 《实验室生物安全通用要求》GB194892008的规定。 生物安全通用准则》
环 境 WS 233-2002 《微生物和生物医学实验室
环 境
实验室的布局和运行
环 境
实验室的布局和运行
环 境
实验室的布局和运行
环 境
实验室的布局和运行
环 境
实验室的布局和运行
环 境
实验室的布局和运行
定期环境监测，增加换气次数及减少人员干预； 控制人员和物品的移动，适当控温湿度；
环 境
良好的清洁和卫生处理，定期清洁消毒，监测清洁剂和消 毒剂的微生物污染，确认在有效期内使用，A、B级区域应 使用无菌处理的清洁剂和消毒剂； 化学消毒剂应证明其消毒效果，定期更换种类以防止产生 耐受菌株； 紫外线不可替代化学消毒； 熏蒸仍是降低死角的微生物污染有效的方法，并应对残留 水平进行验证。
对菌种的理解？ 经验与技术？ 操作规范性？
实验室的布局和运行 基本原则 最大可能防止微生物污染； 防止对人和环境的危害； 合理划分区域、 避免交叉污染、 提高监测可靠性。
环 境
实验室的布局和运行 要求 设计和建筑材料的适用性； 独立的空气机组或空气净化系统以及其 更换、维护和记录； 温度、湿度、照度、压力、噪声、洁净 度应符合相关要求； 划分为相应的洁净区域和活菌操作区 （生物安全柜等）如检测区。
确认 确认分四个阶段： 一设计确认（DQ） 一安装确认（IQ） 一运行确认（OQ） 一性能确认（PQ）
设 备
20102010-04
42
监管及实施中常见问题
未按照质量 规程进行 管理
仪器检定：周期、资质、期间、 标示、记录等； 规程不合理或未制定。

关键设备（包括净化检测仪器设
备等）； 人员资质等。
样品的确认和处理
样品的传递、接收、储存和识别管理程序； 根据规定尽快开检；
样 品
有数量、包装、标签、温度等问题，应尽快与委 托方沟通，以确定是否开检； 防止外包装污染扩散，外部消毒不应影响样品完 整性； 不可忽视内包装； 污染样品应灭菌丢弃。
监管及实施中常见问题
样品污染的不均一性？ 样品包装及外观的重要性？ 原辅料的检验？ 样品来源？
清洁、消毒和卫生 建立清洁、消毒等SOP及检测结果记录；
环 建立污染处理SOP。 境 对消毒剂的要求
低毒高效，无腐蚀； 应对消毒剂的微生物污染进行监控； A级和B级洁净区应使用无菌的消毒剂 和清洁剂。
清洁、消毒和卫生 消毒剂的选择 – 接触时间 – 拟杀灭的微生物种类 – 效力确认 – 毒性 – 残留 – 使导致样品受到污染的位置 – 可以靠近但不要接触样品
中国药典 接种法、薄膜过滤法的方法适用性针对环 节：
设备的维护
定期维护和性能验证并记录， 使用前要重新检查或校准；
设 备
专人管理，特殊设备应持证上岗； 使用自动记录设备; 发生偏差应进行评估并采取纠正措施； 定期清洁和消毒； 清洁灭菌SOP； 特殊设备专用，防止交叉污染。
校准、性能验证和使用监测
校准日期、维修日期和重新校准日期；
设 备
温度测量装置对实验结果有直接影响，要求可靠 质量并确保精确度； 校准应遵需国家或国际标准； 容量测定设备、玻璃器具检定； 离心机的校准； 高效过滤器等专业人员安装、更换，验证； 一次性使用容器的质量控制。
相关文件及要求 美国药典(USP) Microbiological Test 欧洲药典(EP) Microbiological Test(14.K) 微生物检查法 药品检查合作组织（PIC/S） Inspection of Quality Control Laboratories 质量控制实验室检查 GMP2010版 实验室控制系统 GMP 实施指南 微生物检查法
发现污染的调查应该从人、机、料、 法、环各个方面进行调查。
环 境
（1）环境监测数据（粒子、浮游菌、沉降碟等） （2）对人员的监测结果 （3）高效过滤器的完整性检测数据 （4）层流台性能数据（气流流速、压差记录等） （5）区域监控数据（空气流向、工作台面气流方 向速度） （6）人员培训情况，操作资质和能力 （7）干扰模拟的执行情况 （8）无菌室用具和其他相关物品的灭菌储存情况
样品采集
微生物实验室若负责抽取实验室的原
样 品
始样品，应保证样品抽取受控； 随机抽样原则； 抽样的消毒不得危害样品中微生物； 抽样容器的唯一性标志。
样品储存和运输 样 品
样品应在合适的条件下贮存，保证样 品完整性和不改变性状； 尽量减少微生物种群变化,运输中保 持原有储存条件或采取必要措施； 相关记录。
药品微生物实验室质量管理指导原则
及其实施中常见问题探讨
山东省食品药品检验研究院 国 明
相关文件及要求 Guidance for industry: Sterile Drug Products Produced by Aseptic Processing-Current Good Manufacturing Practice 工业指导原则：无菌工艺生 产的无菌产品cGMP指南 Guide to Inspections of Microbiological Pharmaceutical Quality Control Laboratories 药品质量控制微生物实验室检查指南 WHO good practices for pharmaceutical microbiology laboratories（WHO Technical Report Series, No. 961, 2011，Annex 2）