解放军药学学报 2010年 10月 20日 第 26卷 第 5期 Pharm J Chin PLA, VO l. 26, NO. 5, O ctober 20, 2010
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烷 、三乙胺 、冰醋酸为分析纯 ; 纯化水 ; 空白人血浆 (本院血库提供 ) 。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 [ 124 ] Agilent ZORBAX SB 2C18 ( 150 mm ×4. 6 mm , 5μm )色谱柱 ,以三乙胺 2冰醋酸 2水 2 乙腈 (1∶1∶65∶35, pH = 6)为流动相 ,检测波长 : 254 nm ,流速 : 1. 0 m l/m in,柱温 : 30℃,进样量 : 20μl。 2. 2 溶液的制备 ( 1)对照品溶液 精密称取伏 立康唑原料药 51. 98 mg于 50 m l量瓶中 ,用乙腈溶 解并定容至刻度 ,即得 1039. 68 μg /m l的原料药贮 备液 ,置冰箱 2℃冷藏保存 ,备用 。 ( 2)内标溶液 精密称取双嘧达莫 2. 50 mg于 25 m l量瓶中 ,用乙 腈溶解并稀释至刻度 ,得浓度为 100. 0 μg /m l的内 标溶液 ,置冰箱 2℃冷藏保存 ,备用 。 2. 3 血浆样品的预处理 取血浆 0. 5 m l于 5 m l EP管中 ,加 100. 0μg /m l的内标溶液 10 μl,加 0. 1 mol/L NaOH溶液 250 μl,混匀后再加乙酸乙酯 2环 己烷 ( 4 ∶1 ) 的混合溶液 2. 5 m l, 旋涡振荡 2 m in, 2000 r/m in离心 10 m in,将有机相 2 m l于 40℃氮气 吹干 , 200μl乙腈复溶 , 20μl进样分析 。 2. 4 方法的专属性 分别取空白血浆 、空白血浆加 对照品加内标溶液 、血浆样品各 20 μl,按 2. 1 项下 色谱条件测定 ,结果表明 ,空白血浆中内源性杂质不 干扰血浆中伏立康唑的分析 。伏立康唑和双嘧达莫
积相比 ,计算绝对回收率 ,结果见表 2。
表 2 血浆中伏立康唑测定方法的绝对回收率 ( x ±s, n = 5)
加入量
测得量
平均回收率
RSD
(μg /m l)
(μg /m l)
(%)
(%)
1. 04
0. 99 ±0. 02
4. 16
4. 1732
7. 92 ±0. 15
检测人血浆中药物有效治疗浓度的方法具有积极的 意义 。
1 材料
1. 1 仪器 LC210A 高效液相色谱仪 (日本岛津公 司 ) ; Z252医用低速离心机 (中国安新县白洋离心机 厂 ) ; MVS21旋涡混合器 (中国北京金紫光科技发展 有限公司 ) ; TTL 2DC 多功能氮吹仪 (中国同泰联科 技发展有限公司 ) 。 1. 2 试药 伏立康唑分散片 (规格 : 200 mg,辉瑞制 药有限公司 , 批号 : 080212 ) ; 伏立康唑原料药 (纯 度 : 98. 9% ,北京万全制药 ,批号 : 070907) ;双嘧达莫 原料 药 (纯 度 : 98. 6% , 上 海 第 六 制 药 厂 , 批 号 : 070503) ;乙腈为色谱纯 ;氢氧化钠 、乙酸乙酯 、环己
[ Abstract] O bjective To establish an high performance liquid chromatography method for the determ ination of voriconazole in human p lasma. M ethods The analytes in p lasma were extracted by acetoacetate and hexamethyl2 ene. U sing dipyridamole as the internal standard, voriconazo le was separated on Agilent ZORBAX SB 2C18 ( 4. 6 mm ×150 mm , 5 μm ). The mobile phase consisted of a m ixture of triethylam ine, acetic acid, water and acetonitrile (1∶1∶65∶35) at a flow rate of 1. 0 m l/m in. The detection wavelength was 254 nm , and the colum n temp reture was 30℃. Results Voriconazole was well separated. The calibration curve was linear in the range of 0. 1210μg /m l, w ith a co rrelation coefficient of 0. 9981 ( n = 6). The average recovery was 93. 55% and the relative standard deviation (RSD ) was below 2%. The intra2day and inter2day RSD was less than 15%. The lim it of detection (LOD ) was 0. 1μg /m l for voriconazole. Conclusion The method is accurate and simp le when used for the determ ination of vori2
(内标 )的保留时间分别约为 9. 5、6. 7m in,各峰分离 度均大于 2,理论塔板数均大于 2000。见图 1。 2. 5 线性关系考察 精密量取伏立康唑贮备液 ,用 乙腈 分 别 稀 释 成 浓 度 为 5. 20、51. 98、103. 96、 207. 92、415. 84、519. 8 μg /m l 的 系 列 伏 立 康 唑 溶 液 。取系列伏立康唑溶液各 10μl,分别加入空白血 浆 0. 5 m l,再分别加入内标溶液 10μl,混匀 ,按 2. 3 项下处理血浆样品 ,进样检测 ,以伏立康唑和双嘧达 莫峰面积的比值 ( F)对血浆浓度 ( C ) 进行线性回归 得回归方程为 : F = 2. 30 C - 0. 02, r = 0. 9981, n = 6 结果表明 ,伏立康唑在 0. 1 ～10 μg /m l浓度范 围内呈良好线性关系 。定量限浓度为 0. 1μg /m l。 2. 6 精密度试验 取空白血浆加入一定量的伏立 康唑溶液 ,配成 1. 04、4. 16、8. 32 μg /m l浓度系列 , 按 2. 3项下的方法处理进样 ,分别于日内和日间进 样测定 ,计算日内和日间误差 。结果用本法所测得 日内和日间平均精密度的 RSD 分别为 2. 37%和 1. 96% ( n = 5) ,表明该方法重复性较好 。
作者简介 : 张华峰 ,副主任药师 。研究方向 :临床药理 。 Tel: ( 010) 66928501 作者单位 : ① 100142 北京 ,空军总医院药学部 ; ② 563003 贵州 遵义 ,遵义医学院药学系药剂班 通讯作者 : 戴 博 , Tel: ( 010) 66928501; Email: daibo1982 @ hotmail. com
0. 50%和 2. 12%。说明血浆样品在室温放置和冰 冻保存的条件下 ,均有很好的稳定性 。 2. 9 样品测定 10例临床患者首次口服 200 mg伏立 康唑分散片 ,于给药后 1 h 取静脉血 4. 0 ml,分离血浆 , 按 2. 3项下制备血浆样品 ,照 2. 1项下色谱条件测得血 浆中的伏立康唑的浓度为 1. 13～1. 57μg/ml。
H igh Performance L iqu id Chroma tography D eterm ina tion of
Vor iconazole in Human Pla sma
ZHANG Hua2feng① , DA I Bo① , SONG Q ing① ,WAN G Xin② Department of Pharm acy , A ir Force General Hosp ital, Beijing 100142, China
2. 8 稳定性考察 取血浆样品 ,照 2. 3 项下处理 , 进样 20μl,测定伏立康唑在血浆中室温放置 24 h、 冻存 7 d及反复冻融 2 次的稳定性 。结果表明 ,伏 立康唑在上述条件下均稳定 , RSD 分别为 5. 25%、
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高效液相色谱法测定人血浆中伏立康唑含量
张华峰 ① ,戴 博 ① ,宋 青 ① ,王 鑫 ②
[摘 要 ] 目的 建立高效液相色谱法测定人血浆中伏立康唑的含量 。方法 血浆样品经乙酸乙酯 2环己烷萃取 ,以 双嘧达莫为 内 标 , 采 用 A gilent ZORBAX SB 2C18色 谱 柱 ( 4. 6 mm ×150 mm , 5 μm ) 为 分 析 柱 , 以 三 乙 胺 2冰 醋 酸 2水 2乙 腈 ( 1∶1∶65∶35)为流动相 ,检测波长为 254 nm ,柱温为 30℃,流速为 1. 0 m l/m in。结果 伏立康唑及内标双嘧达莫的色谱峰 分离良好 ,伏立康唑在 0. 1～10μg /m l范围内线性关系良好 , r = 0. 9981 ( n = 6 ) ,平均方法回收率为 93. 55% , RSD 小于 2% ,日内日间 RSD 均小于 15% ,定量限为 0. 1 μg /m l。结论 本方法简便快速 ,准确灵敏 ,适用于人血浆中伏立康唑的血 药浓度监测 。 [关键词 ] 伏立康唑 ;高效液相色谱法 ;血药浓度 [中图分类号 ] R927. 2 [文献标志码 ] A [文章编号 ] 100829926 (2010) 0520446203 [DO I] 10. 3969 / j. issn. 100829926. 2010. 05. 026