河北世翔生物有限公司
乳酸菌检验方法
前言
1.本检验方法针对公司各种形式（固态、液态）的乳酸菌菌微生物添加剂；
2.本标准的制定依据GBT 23181-2008 、SNT 1941.1-2007、GB 478935-2010等
国家标准制定；
3.本标准由研发部起草，经公司总经理批准，公布之日起实施。

一、检验前的准备
1.培养基及其试剂
1.1盛有若干玻璃珠的无菌水225ml，
1.2MRS琼脂培养基：
牛肉膏10g
蛋白胨10g
酵母膏5g
121℃，灭菌15-20min
1.3培养皿12个，试管12个，涂布棒1个，用报纸包扎后灭菌
1.4打开超净工作台，用消毒水或者酒精喷洒，工作台台面，打开紫外灯杀菌30分钟，打开风机，5分钟后，打开照明
二、取样
按照GB/T14699.1进行取样：用灭菌的铲子，选取有代表性的样品适量放入取样袋中，标注好取样日期，批次备用；液体取样使用灭菌的试管，在火焰保护下进行，完成后放入低温冰箱储藏。

三、检测步骤
1. 以无菌操作称取试样25g（ml），加入225ml有玻璃珠的无菌水中，放在摇床上，200r/min，摇动30min，制成1：10的初始菌悬浮液。

取1：10的初始菌悬浮液0.5ml，加入4.5ml无菌水，经充分混匀后，制成1：100的稀释液。

依次方法依次稀释到1：108
2.选择107 、108 二个稀释度，用移液枪分别吸取0.1ml，接种到3个营养琼脂平板上，使用涂布棒尽可能小心快速地涂布接种液于琼脂表面，涂布棒不得接触平皿边缘，涂布好的平皿改好，置室温中放置15min使接种物完全被琼脂吸收。

翻转上述平皿置于36±1℃培养箱中培养48±2h。

从样品稀释到涂布完成要求在15分钟内完成。

3.培养后，选取菌落数在30到300个之间的平板计数，低于30 CFU 平板记录具体菌落数，大于300 CFU 的可记录为多不可计。

每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。

若平板中有较大片状菌落生长时，则不宜计数；若片状菌落步不到平板的一半，而其余一半分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2以代表全皿菌落数。

当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。

四、计数
1.若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）中菌落总数结果。

2.若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算
3. 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。

4.若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

5. 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍数计算。

6.若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU～300 CFU之间，其中一部分小于30 CFU或大于300CFU时，则以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。