高效液相色谱仪验证方案类别：编号：部门：页码：共16页，第1页版次：☐新订☐替代：起草部门：年月日审核：年月日审阅会签：批准：年月日实施日期：年月日复印数：批准：分发至：目录1．概述 (3)2．验证目的 (3)3．验证依据及验证范围 (3)4．验证工作小组 (3)5．验证方案审批 (3)5.1验证方案起草 (3)5.2验证方案会签 (3)5.3验证方案批准 (3)5.4验证方案实施 (3)6．验证的准备 (4)6.1文件资料的确认 (4)6.2售后服务 (4)6.3关键性仪表及消耗性备品备件 (4)6.4安装检查 (4)6.5计算机的安装情况检查 (5)6.6安装确认结论及批准 (5)7．安装验证内容 (5)7.1评价设备性能、质量、适用性是否符合采购质量标准要求 (5)7.1.1评价仪器的安装条件是否符合GMP及供应商提议的要求 (5)7.1.2起草标准操作规程 (5)7.1.3仪器校正 (5)7.2 运行确认（也即功能试验） (5)7.2.1 测试项目和认可标准 (5)7.2.2 验证所需的材料 (5)7.2.2.1 玻璃仪器设备 (5)7.2.2.2 试剂、标准溶液 (5)7.2.2.3 其它辅助设备 (5)7.2.3 软件系统安全性确认(必要时) (5)7.2.4 运行确认的实施 (6)7.2.5 运行确认评价及结论 (7)8.性能确认(适用性预试验) (7)9.拟订再验证项目及周期 (7)10.验证结论 (7)1.概述高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱法。

注入供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号，得到测定结果。

由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。

高效液相色谱仪是根据质量控制的目的和要求，在调研的基础上，公司于年月购置的精密仪器，其生产厂为，主要用于样品的分析测试。

由组成。

应用软件为，版本号。

2.验证目的按照 GMP 的要求，需要对该仪器进行安装确认、运行确认、性能确认，以确定目前的实验室环境能否满足该仪器的正常操作和使用，仪器是否具有良好的检测性能，能否满足验证可接受标准和我们日常分析测试工作的需要。

3.验证范围及验证依据3.1本方案适用于对精密仪器室高效液相色谱仪的验证。

3.2本方案验证依据3.2.1 GB/T21187-2007 高效液相色谱仪检定规程3.2.2 高效液相色谱仪操作规程4.验证工作小组组长姓名职务/职称部门成员5.验证方案审批5.1 验证方案起草起草部门签名日期设备动力部年月日质量部年月日5.2验证方案会签部门签名日期质量部年月日设备动力部年月日5.3验证方案批准批准人签名日期质量部年月日5.4验证方案实施实施部门职责设备动力部负责仪器的安装确认。

质量部负责仪器的运行确认、性能的确认。

6.验证的准备6.1 文件资料的确认下列文件资料是否齐全，是否符合GMP要求序号文件/资料编号存放地1 设备采购定单2 原版操作说明书安装手册和维修手册（如必要）3 仪器操作规程SOP4 仪器使用、维修记录5 中华人民共和国国家计量检定规程 JJG694-20076 仪器档案（如必要）7 中国药典（2010版）附录8 标准物质证书9 验证方案结论：检查人检查日期复核人复核日期6.2售后服务维修单位：联系电话：地址：传真：联系人：检查人日期6.3关键性仪表及消耗性备品备件：见附件2检查人日期6.4安装检查对照使用说明书要求安装，确认环境、电源等符合要求。

检查内容要求方法结果环境室内不得存放与实验无关的易燃、易爆和强腐蚀性的物质，无强烈的机械震动和电磁干扰。

目测环境温度15℃～35℃温湿度仪测环境相对湿度35%～75% 温湿度仪测安装位置仪器应平稳而牢固地安置在工作台上按要求安装电压220V±22V 电压仪测频率50Hz±0.5Hz接地接地良好接地电阻表测定电源线与插孔吻合按要求安装气体管路气体管路应适用。

按要求安装冷却水流量充足、稳定目测检查人日期6.5计算机的安装情况检查项目安装的主要软件文件格式安装位置数据文件保存位置密码复杂性工作站安装6.6安装确认结论及批准结论：所有物品与检查清单相符，实验室电、气设计安装合理，实验室环境良好，符合仪器安装要求。

气、电及管路连接符合供货方的要求。

仪器安装检查人日期批准人日期7．安装确认7.1评价设备性能、质量、适用性是否符合采购质量标准要求：见附件3。

7.1.1评价仪器的安装是否符合GMP及供应商提议的要求查阅设备采购定单、操作手册等，列出设备安装、使用所需条件，包括温度、湿度、通风条件、电路等。

检查仪器安装与使用所处的环境条件，是否符合上述要求。

检查结果记录于附件4。

7.1.2起草标准操作规程(可验证后补充)标准操作规程维护保养规程校正规程7.1.3仪器校正由厂商技术人员现场安装、调试，进行运行确认前的校正。

8.运行确认（功能试验）8.1 测试项目和认可标准根据中华人民共和国国家计量检定规程JJG694-2007、中国药典（2010版）附录确定。

如无相关标准，参考仪器说明书确定。

8.2 验证所需的材料8.2.1 玻璃仪器设备计量玻璃仪器需彻底清洗并经检定，一般玻璃仪器要保证洁净。

8.2.2 试剂、标准溶液a) 甲醇（色谱纯）；纯化水（0.45nm微孔滤膜过滤）b) 丙酮（色谱纯）；c) 0.25mg/ml的去氨加压素对照品；d) 流动相：0.3%丙酮-水；甲醇：水（20:80）。

8.2.3仪器a) 戴安20高效液相色谱仪；b) 用于药品预处理和衍生的各种玻璃仪器和设备。

8.3软件系统安全性确认打开计算机开关，待屏幕运行 Windows xp 操作系统以后，由可以授权操作该仪器的检验员设定登陆用户名、密码，重新启动系统。

再让其他不知被授权人员登陆，尝试输入用户名和密码，尝试能否进入计算机系统，连续尝试 5 次。

不知用户名和密码的操作人，应无法登陆计算机系统。

结论：检查人：日期：8.4 运行确认的实施8.4.1仪器各单元开机性能确认a)泵及进样器：打开电源开关，泵及进样器进行自检，并显示主画面。

b)检测器：打开电源开关，检测器灯打开，并进行自检6min，氘灯在三个内置波长257nm、521nm、656nm处校准，若偏差小于±1nm，自检通过，若大于1nm，出现自检错误提示。

8.4.2泵流量设定值误差和流量稳定性误差的确认a)测试条件：流动相：超纯水；色谱柱：4.6mm×250mm；温度：室温。

b)测试方法：启动仪器，以水作为流动相，待压力稳定后，在流动相出口处用称重过的10ml容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收收集五分钟流出的流动相，精密称定，每个流速测定三次，记录测试温度，按下列计算流量设定值误差S1和稳定性误差S2。

S S = (Fm -Fs) / Fs×100%S R =（Fmax-Fmin）/Fm×100%式中：S S为泵流量设定值误差（%）；S R为流量稳定性误差（%）；Fm=（W2-W1）/(ρ•t),为流量实测值（ml/min）；W2—容量瓶+流动相（g）；W1—容量瓶的质量（g）；Fs—流量设定值3ρ—实验室温度下水的密度（g/cm ）；t—收集流动相的时间（min）；Fm—同一组测量值的算术平均值（ml/min）；Fmax—同一组测量中流量最大值（ml/min）；Fmin—同一组测量中流量最小值（ml/min）。

c）测试标准：流量设定值F（ml/min）0.500 1.000 1.500测量次数 3 3 3 收集流动相时间（min）25 15 10允许误差S S5% 3% 3%S R3% 2% 2%8.4.3梯度准确度的确认a)测试条件：流动相：0.3%丙酮-水检测波长：254nm流速：1.000ml/min 柱温：30℃。

b)测试方法：按下表设置梯度洗脱顺序，以两通代替色谱柱连接管路，先用超纯水冲洗系统，待基线平稳后开始执行梯度程序，画出梯度变化曲线，测定三次，取各梯度级高度的平均值，由曲线图测量100%B（C）梯度级平均高度各梯度级实际体积%，每个梯级的理论体积%和实际体积%之差即为梯度准确度，以最大差值为梯度准确度误差。

梯度洗脱表时间A通道（C通道）：超纯水B通道（D通道）：0.3%丙酮水溶液0.00min 100% 0%3.00min 100% 0%6.00min 0% 100%9.00min 0% 100%9.01min 20% 80%12.00min 20% 80%12.01min 40% 60%15.00min 40% 60%15.01min 60% 40%18.00min 60% 40%18.01min 80% 20%21.00min 80% 20%21.01min 100% 0%24min 100% 0%c)测试标准：梯度准确度误差≤±1%。

8.4.4检测器波长准确度的确认以水流过流通池做一空白扫描，然后以手动的方式将去氨加压素对照品用水稀释10倍后注入流通池，扫描210nm-400nm波长范围内的吸收情况，得到去氨加压素溶液在紫外—可见光区的吸收光谱曲线。

记录其在215nm、275nm、300nm、320nm、附近波长处的最大或最小吸收波长，分别找出各点最大或最小波长与标准波长之差即为波长示值误差；重复测定三次，各点最小与最大之差即为波长重复性误差。

检测器波长的示值误差ζ1和重复性误差ζ 2波长215nm附近（max）275nm附近(min) 300nm附近(max) 320nm附近(min)实测波长标准波长272nm 302nm 320nm 360nm测定次数 3 3 3 3示值误差ζ 1重复性误差ζ 28.4.6基线漂移和极限噪声的检定a) 测试条件：流动相：甲醇-水（20:80）对照品：0.25mg/ml咖啡因对照溶液色谱柱：C18色谱柱检测波长：320nm进样量：20µl 流速：1.000ml/min柱温：37℃b)测试方法：将仪器各部分连接好，开机，记录基线30-40分钟，计算基线漂移和噪声。

c）测试标准：基线噪声：≤±1.0×10-4AU；基线漂移：≤±1.0×10-4AU/hr。

8.4.7检测器线性的确认a)测试条件：流动相：甲醇-水（20:80） 对照品：（5、10、25、50、100）µg/ml 咖啡因对照溶液 色谱柱：C18色谱柱 检测波长：320nm 进样量：20µl 流速：1.000ml/min 柱温：37℃ b)测试方法：5个浓度对照品置于不同进样瓶中，各进一针，记录峰面积，求个对照品浓度与峰面积的相关系数 c ）测试标准：相关系数r ≥0.999 8.4.8最小检测浓度的确认 a)测试条件：流动相：甲醇-水（20:80） 对照品：1×10-7g/ml 去氨加压素对照溶液 色谱柱：C18色谱柱 检测波长：320nm 进样量：20µl 流速：1.000ml/min 柱温：37℃ b)测试方法：以流动相冲洗系统至基线平稳后，进样，记录色谱图，由色谱图峰高及基线噪音，按下式计算最 小检测浓度C2N × C H式中：C —最小检测浓度，g/ml N —基线噪音峰度，mAU C —标准溶液浓度，g/ml H —标准溶液色谱峰高，mAUc ）测试标准：≤1×10-8g/ml 咖啡因溶液。