霉菌总数检测操作规程
1 原理
根据霉菌生理特性，选择适宜霉菌生长而不适宜细菌生长的培养基，采用平板计数法测定霉菌总数。

2 试剂与仪器
2.1 所用器具
三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针、移液器
2.2 仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅
2.3 所用试剂和培养基
高盐察氏培养基
取高盐察氏培养基109g，加入蒸馏水1L，搅拌加热至完全溶解，分装三角瓶，115℃高压灭菌30 min，备用。

3、操作步骤
3.1配制0.85%生理盐水
称取氯化钠8.5g溶于1000mL蒸馏水中。

3.2 锥形瓶加入生理盐水90mL，试管中加入生理盐水9mL，121℃灭菌30min。

（三角烧瓶个数与样品数量一致，试管数量与稀释次数相关）。

3.3 将1000μL枪头、培养皿、5mL枪头、称量勺、带6颗玻璃珠具塞试管，121℃灭菌30min。

（注意计算数量）
3.4 枪头、培养皿置于烘箱103℃烘干。

（1-3步需提前一天完成）
3.5 对称量房间进行紫外灭菌30分钟，关灯静置60 min。

以无菌操作取样品10g于含90mL 生理盐水三角烧瓶中，于振荡器上振荡30min，制成1:10的均匀稀释液。

3.6 吸取1:10稀释液10mL注入带玻璃珠的试管，置微型混合器上混合3min。

3.7 用1000μL枪头吸取1:10稀释液1mL，沿管壁慢慢注入含有灭菌生理盐水9mL的试管中，于振荡器上混合均匀，制成1:100的均匀稀释液。

3.8 另取一只1mL灭菌吸管，按照上述操作方法，作10倍递增稀释，如此每递增稀释一
次，更换一支灭菌吸头。

3.9 选择3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，吸取该稀释的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个培养皿。

3.10 稀释液移入培养皿后，及时将凉至46℃±1℃的高盐察氏培养基（可放置46℃±1℃水浴锅内保温）注入培养皿约15mL，小心转动培养皿使试样与培养基充分混匀。

3.11 待琼脂凝固后，倒置平皿于28℃±1℃恒温培养箱内培养3天后开始观察，培养观察一周。

计算平板内菌落总数目，菌落总数乘以稀释倍数，即得每克试样所含霉菌总数。

4 霉菌总数计算方法
做平板菌落计数时，可用肉眼观察，如菌落形态较小可借助放大镜观察。

在计算出各平板菌落总数后，求出同稀释度的两个平板菌落的平均值。

4.1 霉菌总数的报告形式
菌落总数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法修约。

为了缩短数字后面的零数，也可以用10的指数表示。

（见表1）
4.2霉菌总数计数的报告
4.2.1 平板霉菌总数的选择
选择菌落总数在10~100之间的平板进行霉菌总数测定，每一稀释度使用两个平板菌落的平均数。

两个平板其中一个平板有较大片状菌落生长时不宜采用；若片状菌落不到平板的一半，而另一半菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全平皿霉菌总数。

4.2.2 稀释度的选择
①应选择平均菌落总数在10~100之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之（见表1中例次1）
②若有两个稀释度，其生长的菌落总数均在10~100之间，则视两者之比如何来决定。

若其比值（高稀释度数值：低稀释度数值）≤2，应报告其平均值；若＞2则报告其中较小的数字（见表1中例次2及例次3）。

③若所有稀释度的平均菌落总数均大于100，则应按稀释度最高的平均菌落总数乘以稀释倍数报告之（见表1中例次4）。

④若所有稀释度的平均菌落总数均小于10，则应按稀释度最低的平均菌落总数乘以稀释倍数报告之（见表1中例次5）。

⑤若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释度报告之（见表1中例次6）。

⑥若所有稀释度的平均菌落总数均不在10~100之间，其中一部分＞100，或者小于10时，则以最接近10或100的平均菌落总数乘以稀释倍数报告之（见表1中例次7）。

例次稀释液及菌落总数稀释液
之比
稀释度选择
霉菌总数
/[CFU/g（mL）]
报告方式
/[CFU/g（mL）] 10-110-210-3
1 多不
可计
80 8 —
取平均菌落总数在10~100之间
的稀释度
8000 8.0×103
2 多不
可计
87 12 1.4
10~100之间，比值（12000：8700）
≤2，报告平均值
10350 1.0×104
3 多不
可计
95 20 2.1
10~100之间，比值（20000：9500）
＞2，报告较小的数值
9500 9.5×103
4 多不
可计
多不
可计
110 —
所有稀释度的平均菌落总数均
大于100，报告稀释度最高的数
110000 1.1×105
5 9 2 0 —所有稀释度的平均菌落总数均
小于10，报告稀释度最低的数
90 90
6 0 0 0 —所有稀释度均无菌落生长，则以
＜1乘以最低稀释度
＜1×10＜10
7 多不
可计
102 3 —
所有稀释度的平均菌落总数均
不在10~100之间，报告最接近
10或100的数
10200 1.0×104注：CFU/g（mL）与个/g（mL）相当。