被有效分离开。

2. （20分）SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的的四个不连续性是什么？浓缩效应是如何形成的？请分析说明。

四个不连续性是：
缓冲液的离子成分不连续
pH值不连续
电位梯度不连续
凝胶层（浓度）不连续
浓缩效应的形成：
1.缓冲液成分及
2.pH的不连续性
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳系统中两种缓冲液的离子成分不连续，浓缩胶为Tris-HCl缓冲系统, 电极缓冲液为Tris-Gly缓冲系统，同时电泳系统中的pH值也是不连续的，浓缩胶pH为6.7,电极缓冲液pH为8.3。

由于Gly的等电点为6.0,所以在电极缓冲液pH为8.3的环境下可以很好地解离并带有负电荷，而在浓缩胶pH值为6.7即与甘氨酸等电点很相近的缓冲环境下，甘氨酸虽然也解离带有负电荷，但解离程度和带负电荷的程度都很弱，而在浓缩胶pH值为6.7的同样环境下，蛋白质的解离度大于甘氨酸，盐酸的解离度更大于蛋白质，于是有解离度：αCl> α蛋> αGly，在浓缩胶的凝胶中Cl－为快离子，Gly－为慢离子。

3.电位梯度的不连续性
电泳开始后，由于快离子泳动率最大，在快离子后面形成一个离子浓度低的低电导区，产生较高的电位梯度，使蛋白质样品被进一步浓缩，蛋白质和慢离子加速移动。

4.凝胶层的不连续性
蛋白质从“－”极向“＋”极移动，样品进入浓缩胶时有一个堆积浓缩效应，随着电泳的进行，样品从浓缩胶进入分离胶，又有一个堆积浓缩效应。

5. （15分）考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量的原理是什么？
染料与蛋白质结合后引起染料最大吸收光的改变，从465变为595nm。

蛋白质染料复合物具有高的消光系统，因此大大提高了蛋白质测定的灵敏度（最低检出量为1微克）。

染料与蛋白质的结合是很迅速的过程，大约只需要2分钟，结合物的颜色在1小时内是稳定的。

一些阳离子等物质不干扰测定，而大量的去污剂如SDS等严重干扰测定，少量的去污剂可通过用适当的对照而消除。

染料结合法简单迅速，干扰物质少，灵敏度高，广泛用于蛋白质含量的测定。