1.目的
规范单克隆抗体标记荧光PE (快速标记法)标准操作程序
2.适用范围
适用于本公司抗体标记荧光PE (快速标记法)操作
3.术语和定义
藻红蛋白,简称“PE”。
相对分子质量较大,约为240kD,最大吸收峰为564nm。
4.职责和权限
实验员负责实施本规范,主管负责人监督执行。
5.实验试剂.
5.1溶液配制
5.2其他试剂
6.操作流程
6.1抗体活化
将抗体用0.01mol/L PBS稀释为1mg/mL,加入mL 活化液(体积比为抗体溶液:反应活化液=10:1),旋涡振荡器混匀后,室温避光反应10min。
6.2与PE反应形成共轭物
将抗体混合液(步骤6.1)加入mg PE荧光素中(加入量:抗体与荧光素质量比为1:1),在室温条件下避光反应3小时,反应开始时间:至结束时间:;(或2-8度条件下避光过夜)。
6.3荧光淬灭
向共轭物(步骤6.2)中加入mL 淬灭剂(淬灭剂添加量按抗体体积:淬灭剂体积=10:1添加)。
混匀后,室温孵育30分钟,去除游离的荧光素的荧光效应。
淬灭开始时间:至结束时间:。
6.4层析
将共轭物(步骤6.3)层析柱分离,进一步去除游离的荧光素或抗体。
6.5保存
收集得到的标记抗体(步骤6.4),上机测试后根据效价,用Storage Buffer 按比例稀释后,4℃避光保存,有效期一年。