（见附录B），报告每g（mL）样品中大肠菌
群的MPN值。
4、注意事项
► ►
MPN表中的阳性管是LST管数。 对产酸但未看到气泡的发酵，用手轻打动试管 ，如有气泡沿管壁上浮，应考虑可能有气体产 生，应作进一步试验。
►
固体样品1g经10倍稀释后加入1ml，其样品只
有0.1g，故应按0.1g计，不应按1ml计。
任务Байду номын сангаас检验自来水/过滤水中的含菌量
1、实验目的： 掌握常用培养基的配制方法 掌握高压蒸汽灭菌锅、天平等实验仪器的使用方法 学习无菌操作技术
2、实验原理： 培养基的概念 加热灭菌的方法（笔记本）
检验自来水/过滤水中的含菌量
3、实验器材： 实验试剂：稀酸、稀碱、营养琼脂培养基 实验仪器：天平、电炉、高压蒸汽灭菌锅、培养箱 实验器皿：250mL锥形瓶、100mL量筒、培养皿、 大试管、玻璃棒、 其他辅助材料：报纸、纱绳、pH试纸 4、实验过程： 准备→配制→灭菌→加样→培养→观察
器材与试剂 样品，无菌水， 营养琼脂培养基，吸 管，平皿等。

1、步骤
2、结果
3、计算

肉眼观察，可用放大镜，可标记 必要时分区计数，菌落成片者作废 计算公式：
4、注意事项

无菌操作
标记
何时更换吸管


吸吹混匀
琼脂培养基保温

生化安全常识
三、大肠菌群测定
大肠菌群的概念：在一定培养 条件下能发酵乳糖、产酸产气 的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性 无芽胞杆菌。
菌落总数和大肠菌群
主要内容

样品的采集与送检 菌落总数测定


大肠菌群测定
无 菌 取 一、样品的采集和送检 样

采样瓶：洗净、包扎、灭菌


自来水：烧灼或酒精擦拭龙头，放水5-10min
水源水：距水面10-15cm 送检时间：<=2h(常温) ，<=4h(冷藏)
检
样
固体样品：在电子天平上称取25g
检验自来水/过滤水中的含菌量
准备实验材料 250mL锥形瓶、100mL量筒、大试管、玻璃棒、电炉、 培养皿、报纸、纱绳、天平、灭菌锅、pH试纸、药品 准备热水→称量→加热溶解→定容→调pH →分装→灭菌 →冷却至46℃ →倒平板→ 保温实验 每2位同学配制一份200mL的营养琼培养基和一份10mL蒸 馏水，分别装于250mL锥形瓶和大试管中，灭菌后使用。 以自来水、没灭菌的过滤水和已灭菌的无菌水作为样 品；取3个平皿，每个平皿中分别加入1mL上述样品 灭菌后的培养基冷却至46℃左右，马上倒入已加入1mL 样品的3个平皿中，转动平皿使样品和培养基混合均匀 制作好的平皿，冷却凝固后，标上记号（区分所加 样品），倒置放于36℃的培养箱中培养48小时。 配制培养基
1、步骤
初发酵试验



每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液 （液体样品可以选择原液） 每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST ）肉汤，每管接种1mL 36±1℃培养24±2h，观察倒管内是否有气泡产 生 24 h±2 h产气者进行复发酵试验，如未产气则继 续培养至48 h±2 h，产气者进行复发酵试验。未 产气者为大肠菌群阴性。
培养基分装、灭菌
样品按无菌操作加入平皿中
倒入培养基
36℃保温培养
检验自来水/过滤水中的含菌量
5、实验结果报告 48小时（2天）后，到实验室观察平皿中微生物 的生长情况。计数并记录每个平皿中生长出来的菌 落的数量，填写在报告中。观察记录后，需要把所 有平皿清洗干净。
样品：自来水 样品：过滤水 样品：无菌水
菌落总数 （个 /mL） 若过滤水菌含量高于自来水，或无菌水样品中
出现菌落，请思考问题产生的原因。
+ 225mL0.85%灭菌生理
盐水
固体样品存放罐
液体样品：直接取用
固体样品称量

用镊子取酒精棉擦手，点燃酒精灯； 打开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后， 按“去皮”键，当显示屏上的数字显示为“0”时，可开始 称量。
去 皮 键
二、菌落总数测定
概念：菌落总数是指食品检样 经过处理，在一定条件下培养 后，所得1g或1mL检样中所含 微生物菌落的总数。
2、结果
产气情况
注意： 样液加入培养基后不能振 摇试管。
复发酵试验

用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1
环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中

36±1℃培养48±2h，观察产气情况。 产气者，计为大肠菌群阳性管。
3、计算

按确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表