自身免疫病中多种自身抗体的检测及分析【摘要】目的：通过对自身免疫病患者常用自身抗体的综合检测、分析，评价其在自身免疫病中的意义及价值。
方法：选取临床上已确诊为自身免疫病患者216例作为疾病组（其中SLE患者102例，RA患者54例，MCTD患者18例，SS患者16例，PSS患者16，PM/DM患者10例），健康体检者30例作为对照组，抽取血液，分离血清，分别采用间接免疫荧光法、欧蒙免疫印迹法和ELISA法检测ANA、抗ds DNA、ENA多肽谱、RF。
结果：6种自身免疫性疾病中，RF的阳性检出率以类风湿性关节炎（RA）患者为最高（74.2%），干燥综合症（SS）患者次之（62.5%），而多发性皮肌炎（PM/DM）患者中未检出；ANA在6种自身免疫病患者中均有较高的阳性检出率，以系统性红斑狼疮（SLE）患者为最高（94.1%），混合性结缔组织病（MCTD）患者次之（88.9%），RA患者最低（33.3%）；抗ds DNA则只在2种自身免疫病患者中检出，其中SLE患者阳性检出率最高（80.4%），而RA患者较低（3.7%）；6种自身免疫病患者中，ENA多肽谱的各种抗体的检出率差别较大，其中，抗SSA/R0均有检出，但阳性率不高（均低于40.0%），而抗Histones只在SLE患者中有检出，抗Scl70只在系统性硬皮病（PSS）患者中有检出，抗J01则只在PM/DM患者中有检出，但抗U1snRNP 则在MCTD患者中检出率较高（88.9%），抗Centromere均无检出。
结论：自身免疫病患者同时检测多种自身抗体有助于疾病的特异性诊断和筛查。
【关键词】 RF； ANA；抗ds DNA； ENA多肽谱；自身免疫病［ABSTRACT］Objective: To evaluate the significance of multiple autoantibody detection and analysis in the process of diagnosing and screening autoimmune diseases. Methods: 216 cases of autoimmune diseases were compared with 30 health volunteers. 102 out of these cases are SLE, 54 are RA, 18 are MCTD, 16 are SS, 16 are PSS and 10 are PM/DM, Autoantibody including ANA, anti ds DNA, ENA antibodies and RF were detected. Results: Among six kinds of autoimmune diseases mentioned above, RA has the highest positive rate of RF (74.2%) followed by SS (62.5%). On the contrary, in PM/DM, RF was detected as negative. SLE has the highest positive rate of ANA (94.1%) followed by MCTD (88.9%) and RA (33.3%). Anti ds DNA was only detected in SLE and RA with a positive rate of 80.4% and 3.7%, respectively. The positive rates of ENA antibodies in autoimmune diseases are obvious different among each other. Conclusion: Detection of multiple autoantibodies is a useful way of diagnosis and screening autoimmune diseases.［KEY WORDS］ RF； ANA； Anti ds DNA； ENA antibodies；Autoimmune diseases自身免疫病是一类原因复杂、临床表现多样、严重危害人类健康的疾病，多为慢性病，任何年龄、性别均可发病，以女性为多见；常累及多器官、多系统，反复发作、慢性迁延［1,2］。
自身免疫病主要是由于机体的正常结构成分被相应的抗体或具有免疫效应细胞作用后引起的器质性、功能性障碍疾病，其主要原因可能是由于自身免疫所致，因此，自身免疫病患者体内往往存在多种自身抗体，而这些自身性抗体也成为自身免疫诊断的重要依据［3］。
这些自身性抗体种类比较多，最常见的如抗核抗体(antinuclear antibody, ANA)、类风湿因子（RF）、抗ds DNA、ENA多肽谱等，随着病情的发展变化，这些自身性抗体也随之而变化；同时，有些自身抗体不仅仅存在于一种自身免疫性疾病当中，也可存在于几种自身免疫性疾病中［4,5］。
因此，这些自身抗体在自身免疫性疾病的诊断、鉴别诊断和疗效评价等方面有着重要的意义。
通过对216例自身免疫病患者（包括SLE、RA、MCTD、SS、PSS和PM/DM 6种）的常见自身抗体（ANA、RF、抗ds DNA、ENA多肽谱）进行检测，并对其结果进行综合分析，以探讨其在自身免疫性疾病中的意义与价值。
1 材料与方法1.1 材料选取本院经临床诊断确诊为系统性红斑狼疮（SLE）患者102例，类风湿性关节炎（RA）患者54例，混合性结缔组织病（MCTD）患者18例，干燥综合症（SS）患者16例，系统性硬皮病（PSS）患者16例，多发性皮肌炎（PM/DM）患者10例；另外选取30例健康体检者作为对照组。
空腹抽血，分离血清，备用。
1.2 方法1.2.1 RF检测采用采用ELISA法采用事先用包括RF IgG、RF IgA、RF IgM抗原包被孔，将受检样品、阴阳性对照标本和酶标抗体及终止液按一定程序加入包被孔内，反应终止时，通过定量检测包被孔内有色物质的含量来检测RF IgG、RF IgA、RF IgM的含量。
试剂为德国欧蒙（杭州）医学实验诊断有限公司生产，采用全自动酶标仪。
1.2.2 ANA检测采用间接免疫荧光法将患者血清以1∶100、1∶250、1∶500、1∶1 000稀释后滴加于包被有HEp2细胞的膜条上，血清中的特异性抗体与固相上细胞中的抗原结合，再滴加荧光素标记的抗人抗体，与已经结合的抗体反应，若血清中有特异性的抗体，呈现特异性的荧光，荧光显微镜下观察，荧光强度与抗体滴度相关。
试剂由德国欧蒙（杭州）医学实验诊断有限公司生产。
朱洪等.自身免疫病中多种自身抗体的检测及分析 1.2.3 抗dsDNA 检测采用间接免疫荧光法将患者血清以1∶100、1∶250、1∶500、1∶1 000稀释后滴加于包被有绿蝇短膜虫的生物薄片上，血清中的特异性抗体与固相上细胞中的抗原结合，再滴加荧光素标记的抗人抗体，与已经结合的抗体反应，若血清中有特异性的抗体，呈现特异性的荧光，荧光显微镜下观察，荧光强度与抗体滴度相关。
试剂由德国欧蒙（杭州）医学实验诊断有限公司生产。
1.2.4 ENA多肽谱检测采用欧蒙免疫印迹法将核抗原印迹于干硝化纤维膜上，封闭其特异反应区，检测时膜条与稀释的患者血清共同孵育，使血清中的抗体与膜条上的抗原结合，再利用辣根过氧化物酶标记IgG二抗，以检测此结合抗体，加入底物后，显示蓝色条带，终止反应后则为棕色。
试剂由德国欧蒙（杭州）医学实验诊断有限公司研制生产。
2 结果6种自身免疫病患者血清RF、ANA、抗ds DNA、ENA多肽谱测定结果如表1所示，其中ENA多肽谱检测项目包括抗 Histones、抗SmD1、抗SSA/R0、抗SSB/La、抗Scl70、抗Centromere、抗J01和抗U1snRNP 8种抗体。
6种自身免疫性疾病中，RF的阳性检出率以类风湿性关节炎（RA）患者为最高，达74.2%，干燥综合症（SS）患者次之，为62.5%，而多发性皮肌炎（PM/DM）患者中未检出；ANA在6种自身免疫病患者中均有较高的阳性检出率，以系统性红斑狼疮（SLE）患者为最高，达94.1%，混合性结缔组织病（MCTD）患者次之，为88.9%，RA患者最低，为33.3%；抗dsDNA则只在2种自身免疫病患者中检出，其中SLE患者阳性检出率高，达80.4%，而RA患者较低，为3.7%；6种自身免疫病患者中，ENA 多肽谱的各种抗体的检出率差别较大，其中，抗SSA/R0均有检出，但阳性率不高，均低于40.0%，而抗 Histones只在SLE患者中有检出，抗Scl70只在系统性硬皮病（PSS）患者中有检出，抗J01则只在PM/DM患者中有检出，而抗U1snRNP则在MCTD患者中检出率较高，达88.9%，抗Centromere均无检出。
表1 6种自身免疫病患者血清RF、ANA、抗ds DNA和ENA多肽谱阳性分布情况注：抗 His代表抗 Histones; 抗Cen代表抗Centromere; 抗U1代表抗U1 snRNP。
3 讨论自身免疫性疾病是一种谱型范围广，与自身免疫关系密切，具有多种自身抗体的多样化的疾病。
这些自身抗体是针对自身细胞内，细胞表面及细胞外抗原成分的免疫球蛋白。
类风湿因子（RF）是一种抗人或动物IgG分子Fc片段抗原决定簇的抗体，以变异IgG为靶抗原。
常见的RF成分有IgM、IgG、IgA和IgE，而IgM型是RF的主要类型［6,7］。
本实验采用速率散射比浊法自动化检测患者血清中的RF，此法准确、快速能定量分析，测定结果准确性和敏感性均高于胶乳颗粒凝集实验，但只能检测IgM型RF。
由本研究结果可见，RF在RA其检出率很高，达74.1%，但RF不是仅在RA患者中出现，在SS、PSS、SLE和MCTD患者中的阳性率分别为62.5%、50.0%、39.2%和22.2%，因而RF对RA患者具有泛特异性，RF阳性不能作为诊断RA的惟一标准。
尽管在多种疾病中可有RF阳性，但其含量均不高，随着RF含量增加，RF对RA的诊断特异性增高。
抗核抗体（ANA）是一组具有多种细胞核成分的自身抗体，是以真核细胞的核成分为靶抗原的自身抗体的总称，ANA靶抗原分布由传统的细胞核抗原扩展到现在的整个细胞，包括细胞核、细胞骨架、细胞浆、细胞分裂周期等，可与不同来源的细胞核起反应，无器官特异性和种属特异性［810］。
从理论上讲，ANA阳性应是细胞内这些蛋白质分子及其复合物的抗体阳性，但因其所采用的方法的敏感度不同，ANA的阳性率与ds DNA 和ENA阳性率之间并不完全吻合［11］。